塵肺職業(yè)病患者血清MMP19、8-OHdG和CC16與其病情進(jìn)展程度及肺功能的關(guān)系分析

榮興華，丁興龍

徐州礦務(wù)集團(tuán)總醫(yī)院：1.塵肺科；2.檢驗(yàn)科，江蘇徐州 221006

塵肺職業(yè)病是常見(jiàn)的在職業(yè)活動(dòng)中吸入粉塵并在肺部潴留導(dǎo)致肺組織出現(xiàn)彌散性纖維化病變，并可能由肺部彌散性纖維化逐漸發(fā)展至全身性的疾病。職業(yè)性塵肺的發(fā)病機(jī)制相對(duì)復(fù)雜，且目前臨床中尚無(wú)對(duì)塵肺病進(jìn)行鑒別診斷的特異性指標(biāo)，缺乏特異性治療方法和藥物[1]。基質(zhì)金屬蛋白酶19(MMP19)、8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷酸(8-OHdG)和克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)是近年來(lái)廣泛研究的重要生物學(xué)標(biāo)志物[2-3]，本研究選擇本院收治的塵肺職業(yè)病患者作為研究對(duì)象，分析塵肺職業(yè)病患者血清MMP19、8-OHdG和CC16與患者病情進(jìn)展程度及肺功能的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 將本院2018年1月至2019年9月收治的97例塵肺職業(yè)病患者作為塵肺職業(yè)病組，所有患者均為男性，且符合《肺塵病診斷標(biāo)準(zhǔn)：GBZ70—2015》[4]。其中Ⅰ期塵肺職業(yè)病患者47例，年齡(57.36±4.97)歲，工齡(18.38±2.84)年，實(shí)際接塵工齡(14.39±3.28)年，農(nóng)民工41例，有吸煙史40例;Ⅱ期塵肺職業(yè)病患者31例，年齡(58.06±5.14)歲，工齡(18.62±2.91)年，實(shí)際接塵工齡(15.18±4.19)年，農(nóng)民工37例，有吸煙史35例；Ⅲ期塵肺職業(yè)病患者19例，年齡(57.97±5.37)歲，工齡(18.49±3.03)年，實(shí)際接塵工齡(15.03±3.73)年，農(nóng)民工16例，有吸煙史16例。選擇同期50例體檢健康者作為健康對(duì)照組，年齡(56.89±5.21)歲，工齡(18.46±2.90)年。2組受試者年齡、性別等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。參與本組研究的所有受試者均排除心、肝、腎、肺等臟器纖維化或器質(zhì)性病變。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法 采集所有受試者5 mL空腹靜脈血，室溫靜置0.5 h，3 000 r/min離心10 min分離血清，將血清分裝至3個(gè)離心管中并置于-80 ℃冰箱中保存，統(tǒng)一檢測(cè)。在檢測(cè)時(shí)采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)血清中MMP19、8-OHdG和CC16水平，所用試劑盒均購(gòu)自杭州聯(lián)科生物科技有限公司，并嚴(yán)格遵照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作和質(zhì)控。所有受試者入組后均采用Autospiro-507肺功能儀對(duì)其肺功能進(jìn)行檢測(cè)，采用坐姿檢測(cè)受試者第1秒用力呼氣量(FEV1)、用力肺活量(FCV)，并計(jì)算FEV1/FCV。依照《職工工傷與職業(yè)病致殘程度鑒定標(biāo)準(zhǔn):GB/T16180—2006》[5]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)患者的肺功能損傷程度進(jìn)行分級(jí)評(píng)估，其中正常(13例)：FVC≥80%，F(xiàn)EV1≥80%，F(xiàn)EV1/FVC≥70%；輕度損傷(44例)：FVC 60%～<80%，F(xiàn)EV160%～<80%，F(xiàn)EV1/FVC 55%～<70%；中度損傷(29例)：FVC 40%～<60%，F(xiàn)EV140%～<60%，F(xiàn)EV1/FVC 35%～<55%；重度損傷(11例)：FVC<40%，F(xiàn)EV1<40%，F(xiàn)EV1/FVC<35%。

2 結(jié) 果

2.1塵肺職業(yè)病組患者與健康對(duì)照組血清MMP19、8-OHdG、CC16結(jié)果比較 塵肺職業(yè)病組患者血清MMP19、8-OHdG、CC16水平明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 塵肺職業(yè)病組患者與健康對(duì)照組血清MMP19、 8-OHdG、CC16結(jié)果比較

2.2不同病情進(jìn)展程度塵肺職業(yè)病患者血清MMP19、8-OHdG、CC16結(jié)果比較 不同病情進(jìn)展程度患者血清MMP19、8-OHdG及CC16水平存在明顯差異，隨著患者病情嚴(yán)重程度的加重，患者血清MMP19、8-OHdG、CC16水平隨之升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同病情進(jìn)展程度塵肺職業(yè)病患者血清MMP19、8-OHdG、CC16結(jié)果比較

2.3不同肺功能患者血清MMP19、8-OHdG、CC16結(jié)果比較 不同肺功能患者血清MMP19、8-OHdG、CC16水平存在明顯差異，隨著患者肺功能損傷程度加重，患者血清MMP19、8-OHdG、CC16水平隨之升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同肺功能患者血清MMP19、8-OHdG、CC16結(jié)果比較

2.4MMP19、8-OHdG、CC16與病情進(jìn)展程度及肺功能的關(guān)系 Logistic回歸分析結(jié)果顯示，患者血清中高M(jìn)MP19、高8-OHdG和高CC16水平是影響患者疾病進(jìn)展程度和肺功能的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 MMP19、8-OHdG、CC16與病情進(jìn)展程度及肺功能的Logistic回歸分析結(jié)果

2.5MMP19、8-OHdG、CC16鑒別診斷塵肺職業(yè)病的診斷效能 ROC曲線結(jié)果顯示，MMP19、8-OHdG和CC16聯(lián)合檢測(cè)鑒別診斷塵肺職業(yè)病的靈敏度、特異度和ROC曲線下面積(AUC)均明顯高于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 MMP19、8-OHdG和CC16鑒別診斷塵肺職業(yè)病的診斷效能

3 討 論

塵肺職業(yè)病是近年來(lái)逐漸引起人們重視的嚴(yán)重職業(yè)病之一。有研究指出，塵肺職業(yè)病的發(fā)生和發(fā)展與炎癥因子釋放量增加、炎癥細(xì)胞聚體等導(dǎo)致免疫應(yīng)激、膠原沉積、成纖維細(xì)胞增殖、血管上皮和內(nèi)皮細(xì)胞損傷等相關(guān)，且多種因素相互制約、相互聯(lián)系[6-7]。此外，有研究結(jié)果顯示，塵肺職業(yè)病與體內(nèi)的自由基失衡及脂質(zhì)過(guò)氧化損傷等密切相關(guān)[8]。

MMP19在健康者肺組織中呈現(xiàn)明顯的低表達(dá)狀態(tài)，但在多種肺部疾病患者體內(nèi)均呈現(xiàn)明顯的異常表達(dá)趨勢(shì)，如慢性阻塞性肺疾病(COPD)、特發(fā)性肺纖維化、哮喘等[9]。有研究指出，肺組織損傷與MMP19密切相關(guān)，在COPD患者體內(nèi)隨著病情嚴(yán)重程度的加重患者血清MMP19水平也逐漸升高[10]。MMP19可有效靶向血漿酶原，抑制微血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，降低毛細(xì)血管狀結(jié)構(gòu)和間質(zhì)表皮轉(zhuǎn)化因子磷酸化。有研究指出，MMP19可誘導(dǎo)過(guò)氧化物酶2促進(jìn)傷口愈合，且在特發(fā)性肺纖維化鄰近纖維化區(qū)域增生上皮細(xì)胞中MMP19水平明顯增加[11]。

DNA損傷是重要的氧化損傷表現(xiàn)之一，其主要包括堿基氧化修飾、無(wú)堿基位點(diǎn)、DNA鏈交聯(lián)和斷裂等。其中堿基氧化修飾是最常見(jiàn)的DNA氧化損傷形式，由于鳥(niǎo)嘌呤分子軌道能級(jí)較高，當(dāng)氧自由基攻擊DNA時(shí)鳥(niǎo)嘌呤更易被氧化，并形成8-OHdG[12]。有報(bào)道指出，通過(guò)檢測(cè)8-OHdG水平可反映氧化應(yīng)激程度，8-OHdG成為最常用的生物標(biāo)志物[13]。相較于脂類(lèi)和蛋白質(zhì)氧化損傷，DNA損傷可更為直接有效地反映體內(nèi)氧化應(yīng)激損傷，8-OHdG是重要的DNA損傷產(chǎn)物，且8-OHdG也是體內(nèi)重要的致突變劑，可導(dǎo)致G-T和A-C突變。有研究顯示，DNA損傷也是導(dǎo)致塵肺職業(yè)病發(fā)生、發(fā)展的重要發(fā)病機(jī)制，且在塵肺職業(yè)病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中8-OHdG可能起重要作用[14]。

CC16具有抗炎、抗纖維化、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性，有研究發(fā)現(xiàn)在肺纖維化患者體內(nèi)，CC16可作為潛在的生物標(biāo)志物[15]。CC16主要由終末細(xì)支氣管黏膜和細(xì)支氣管的無(wú)纖毛柱狀上皮細(xì)胞合成并分泌，屬于重要的組織特異性蛋白[16]。有研究指出，CC16主要在肺組織中表達(dá)屬于內(nèi)源性的肺部抗炎因子，可有效抑制磷脂酶A2活性而起到抗炎作用，且CC16可作為評(píng)估患者的早期診斷標(biāo)志物[17]。

本研究結(jié)果顯示，相較于健康對(duì)照組，塵肺職業(yè)病組患者血清中MMP19、8-OHdG和CC16水平明顯升高，且隨著患者病情嚴(yán)重程度和肺功能損傷程度的加重，其血清中各指標(biāo)水平也隨之升高。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，患者血清中高M(jìn)MP19、高8-OHdG和高CC16水平是影響患者疾病進(jìn)展程度和肺功能的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。對(duì)各指標(biāo)的鑒別、診斷價(jià)值進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，MMP19、8-OHdG和CC16聯(lián)合檢測(cè)鑒別診斷塵肺職業(yè)病的靈敏度、特異度和AUC均明顯高于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)。分析認(rèn)為，隨著塵肺職業(yè)病患者病情進(jìn)展程度和肺功能損傷程度的加重，患者體內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)和炎癥狀態(tài)也明顯惡化，導(dǎo)致體內(nèi)多種氧化應(yīng)激因子和炎癥因子水平升高，進(jìn)而導(dǎo)致DNA損傷加重，引起患者體內(nèi)MMP19、8-OHdG和CC16水平升高。此外，隨著MMP19、8-OHdG和CC16水平的升高則可能進(jìn)一步阻礙肺部微血管修復(fù)并加重患者DNA損傷和炎癥狀態(tài)形成惡性循環(huán)，通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)血清中MMP19、8-OHdG和CC16水平可綜合反映和評(píng)估其體內(nèi)狀態(tài)，進(jìn)而可有效提高診斷和鑒別塵肺職業(yè)病的價(jià)值。

綜上所述，塵肺職業(yè)病患者血清MMP19、8-OHdG和CC16水平明顯升高，且各指標(biāo)是患者病情進(jìn)展程度及肺功能的獨(dú)立影響因素。但本研究并未對(duì)患者進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪且并未分析各指標(biāo)與患者長(zhǎng)期預(yù)后的關(guān)系，有待后續(xù)深入追蹤分析。