不同性別、臨床科室患者血小板抗體篩查結果分析*

陸 樂，李 平△，劉婷婷，王樹亞，周 勤

1.南京大學醫學院附屬鼓樓醫院輸血科，江蘇南京 210008；2.江蘇師范大學數學與統計學院，江蘇徐州 221116

血小板是巨核細胞胞質裂解脫落下來的具有生物活性的小塊胞質，在傷口愈合、止血及器官移植排斥等生理和病理過程中有著十分重要的作用。近年來隨著輸血技術的提高，血小板輸注已成為提高臨床患者(特別是血液疾病和腫瘤患者)血小板計數，防止出血最為快速、有效的方法，是現代成分輸血技術領域的重要內容[1]。通過輸注血小板可以有效降低血小板疾病導致的病死率，對于臨床上反復輸血的患者，其體內易產生血小板抗體[2]，經常出現血小板輸注無效。血小板抗體對血小板的破壞還會嚴重影響患者的生命健康與安全[3]。導致血小板輸注無效的原因包括非免疫因素和免疫因素，非免疫包括發熱、感染、脾大等[4]，免疫因素為血小板抗體[5]，其中最主要的原因為血小板同種抗體。現將南京大學醫學院附屬鼓樓醫院8 250例患者血小板抗體檢測結果與分析報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2019年3-5月南京大學醫學院附屬鼓樓醫院有輸血可能性的入院患者，排除臨床診斷不明確、病歷資料不完整的患者，共計8 250例為研究對象。其中男性3 975例，女性4 275例；發病年齡1～101歲，平均(51.0±18.26)歲。

1.2試劑與儀器

1.2.1試劑 血小板抗體檢測試劑盒(固相凝集法)、血小板抗體篩檢細胞、血小板抗體檢測用指示紅細胞均購自長春博德生物技術有限責任公司。

1.2.2儀器 TD58低速離心機購自長沙湘智離心機有限公司，PW-812全自動酶標洗板機購自深圳匯松科技發展有限公司。

1.3檢測方法

1.3.1標本前處理 采集患者2 mL左右靜脈血，采用乙二胺四乙酸二鉀抗凝，1 500×g離心10 min。

1.3.2固相凝集法 (1)血小板抗體檢測試劑盒平衡至室溫(18～25 ℃)，制備洗滌液，將濃縮洗滌液用蒸餾水按1∶24體積比稀釋。(2)稀釋商品化的凍干血小板，每支血小板凍干粉加入0.5 mL生理鹽水，溶解混勻。(3)反應板條上標記患者編號、陽性對照和陰性對照。 每個反應孔中加入1滴(50 μL)血小板懸液，輕搖反應板10 s。(4)平板式離心機50×g離心5 min，將血小板固定在反應孔底部。(5)輕輕倒出反應孔中的液體，洗滌液清洗反應板3次。(6)每個反應孔中加入2滴(100 μL)低離子強度溶液，并按編號向相應反應孔中加入1滴(50 μL)患者血漿、陽性對照液及陰性對照液。(7)用封口膠將反應孔封好，混勻，平放入濕盒中，37 ℃溫浴30 min后，棄封口膠，清洗反應板5次。(8)加入1滴抗人IgG及1滴指示紅細胞試劑，混勻,觀察記錄結果。

2 結 果

2.1不同性別血小板抗體篩查結果比較 本研究中女性患者血小板抗體陽性率(6.60%)顯著高于男性(4.43%)，差異有統計學意義(χ2=18.478，P<0.05)。見表1。

表1 不同性別的血小板抗體篩查結果比較

2.2不同臨床科室血小板抗體陽性率比較 不同臨床科室的血小板抗體陽性率比較,差異有統計學意義(χ2=86.513，P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床科室的血小板抗體陽性率比較

2.3聚類分析 利用最長距離法對表2中的所有臨床科室的血小板抗體陽性率進行聚類分析。依照血小板抗體陽性率將樣本分成兩類，第一類是血小板抗體陽性率高的科室，包括風濕免疫科、血液內科和中醫科；第二類為其他科室，即這些科室血小板抗體陽性率較低。比較第一類樣本的血小板抗體陽性率，結果顯示差異無統計學意義(χ2=3.447，P>0.05)； 比較第二類樣本的血小板抗體陽性率，結果顯示差異無統計學意義(χ2=14.536，P>0.05)。說明聚類后，每一類中的各科室血小板抗體陽性率無顯著差別。聚類后對兩類樣本的陽性率進行比較，利用均值t檢驗，差異有統計學意義(t=3.0276，P<0.05)，表明第一類科室(3個)和第二類科室(23個)聚類后兩類間存在明顯差異，即第一類科室風濕免疫科、血液內科和中醫科的血小板抗體陽性率顯著高于其他科室，同時也表明聚類是有意義的。見圖1。

注：圖中兩個矩形內的科室分別歸類為兩類樣本，數字代表科室編號。

3 討 論

血小板表面存在著復雜的抗原系統，一般可分為血小板相關抗原與血小板特異性抗原。血小板相關抗原主要有紅細胞血型抗原和人類白細胞抗原(HLA)。紅細胞血型抗原包括ABH抗原，此外還有其他血型抗原，如Lea、Leb 等。血小板膜表面表達的HLA主要為HLA-Ⅰ類抗原，包括HLA-A、HLA-B和少量的HLA-C。而血小板特異性抗原由血小板特有的抗原決定簇組成，表現出血小板獨特的遺傳多態性。血小板特異性抗原主要分布于血小板膜糖蛋白上，構成血小板膜結構的一部分，同時還分布于血管內皮細胞、結締組織和平滑肌細胞等。妊娠、骨髓移植和反復輸血都會刺激機體產生同種血小板抗體。這些抗體引起機體產生一系列血小板抗原抗體免疫反應[6],當患者進行血小板輸注治療時就可能導致血小板輸注無效。特別是有些反復多次接受血小板輸注的患者，血小板輸注無效發生率明顯增高,呈正比關系[1，7]。根據原衛生部頒布的《臨床輸血技術規范》[8]中成分輸血指南的規定，臨床輸注單采血小板必須進行ABO同型輸注，因此，避免了因為ABO血型抗體導致的血小板輸注無效，但HLA-Ⅰ類抗體與血小板特異性抗體導致的輸注無效尚無法避免。固相凝集法中的血小板篩檢細胞上同時有HLA抗原和人類血小板抗原，可以及時檢測出患者體內對應的血小板同種抗體，從而提示可能出現的血小板輸注無效。

本次試驗選取8 250例住院患者檢測體內血小板抗體，臨床科室基本覆蓋。結果顯示,血小板抗體陽性率在不同的臨床科室分布有顯著差異，風濕免疫科、血液內科和中醫科血小板抗體陽性率明顯高于其他臨床科室，這與臨床科室患者疾病有關。本次研究中血液內科患者均為血液腫瘤患者，其血小板抗體陽性率為15.18%，略高于董曉鋒等[9]報道的血液腫瘤患者的陽性率(10.02%)。究其原因可能與患者治療原發病反復輸注血液制品有關，輸注的血液制品(包括血小板)刺激自身免疫系統產生除ABO血型抗體外的抗-HLA或抗-HPA等同種抗體[10]。血小板輸注次數越多，血小板抗體陽性率越高[11-12]。有研究報道，當患者免疫力低下時抗原抗體反應減弱，即便抗體篩查陽性的患者輸注血小板后也會有效果[13]。在本研究中，風濕免疫科患者血小板抗體陽性率達25.37%，高于血液病患者，其中血小板抗體陽性率排在前3位的疾病為系統性紅斑狼瘡、干燥綜合征、類風濕關節炎。其他自身免疫系統性疾病也有陽性患者，如抗中性粒細胞胞質抗體相關血管炎、彌散性(混合性、未分化)結締組織病及系統性硬皮病等，但這些病例數較少。國內較少見對風濕免疫科患者血小板抗體的研究，此類患者自身免疫系統功能紊亂，容易導致存在抗血小板的自身抗體，使其血小板數量低下，引起出血風險，應引起重視。中醫科患者樣本例數少，在此不作討論。

女性患者血小板抗體陽性率高于男性患者，與女性患者妊娠史密切相關。妊娠是女性患者產生血小板抗體的主要原因[14]。在我國二孩政策下，妊娠次數的增加會使血小板抗體陽性率也增高[15]。另外，也有研究表明，女性患者血小板抗體陽性率高與女性患者流產也有相關性，隨著流產次數增加，血小板抗體陽性率也會相應升高。

在統計數據時，男科、神經內科和疼痛科這3個科室的樣本量很小，而樣本量的大小可能會影響血小板抗體陽性率的估計。如刪掉樣本量低于30例的臨床科室數據，重新考慮上述問題，總體結論與之前一致，即臨床科室之間的血小板抗體陽性率存在顯著差別，而性別依然會影響血小板抗體陽性率。

血小板抗體的存在會導致臨床患者出現血小板輸注無效、輸血后紫癜、新生兒血小板減少性紫癜等多種免疫反應，當患者發生血小板輸注無效后，可通過血小板抗體檢測判斷輸注無效的原因是否由免疫因素引起[16]。女性，風濕免疫疾病、血液病的患者在進行血小板輸注治療前應考慮進行血小板抗體篩查，如果條件允許可以進一步做血小板交叉配型試驗，從而選擇最適合患者的供者血小板，達到臨床治療的目的。