新城疫、H9 亞型禽流感二聯滅活疫苗免疫程序初探

劉錦容，龍海鷹，鄧海燕，張險朋★

(1. 肇慶大華農生物藥品有限公司，廣東 肇慶 526238；2. 東莞市動物疫病預防控制中心，廣東 東莞 523086）

新城疫、H9 禽流感二聯滅活疫苗是雞群免疫的主要疫苗之一，由于其免疫質量指標血凝抑制抗體水平檢測方法操作和費用較為簡單，目前許多養殖單位均建立了監測體系，以期通過監測抗體水平來評價疫苗質量，優化免疫程序等。由于實際生產中抗體水平受到母源抗體、基礎免疫、雞群健康狀況以及野毒感染潛伏等因素的影響，導致其抗體水平與SPF 雞的抗體消長規律不盡一致，特別是抗體水平的異常，給生產帶來困惑。本文通過對快大肉雞抗體監測，初步探討不同免疫程序下新城疫流感滅活苗的免疫效果，以便優化免疫程序。

1 材料與方法

1.1 試驗雞 在華東某一快大雞養殖場開展試驗，將12 棟舍平均分為為A、B、C 和D 組，并按表1 免疫程序進行疫苗免疫接種。在1、7、14、28 和35 日齡翅靜脈采血，每組每次隨機抽取雞血48 份（每棟16 份），3000 r/min 離心分離血清，-20℃保存待檢。

表1 疫苗免疫程序

1.2 疫 苗 新城疫、H9 亞型禽流感二聯滅活疫苗、傳染性法氏囊病活疫苗、新城疫、傳染性支氣管炎二聯活疫苗。

1.3 試 劑 H9 亞型禽流感HI 抗原和陽性血清、新城疫HI 抗原和陽性血清購自哈爾濱國生生物有限公司。

1.4 試驗方法 H9 亞型禽流感抗體和新城疫抗體檢測分別按照《高致病性禽流感診斷技術》GB/T 18936-2020 和《新城疫診斷技術》GB/T 16550-2020 中的血凝與血凝抑制試驗方法進行操作。

2 結 果

2.1 新城疫抗體檢測結果 所有組別1 日齡針對新城疫的母源抗體抗體水平均約為9log2，在21 日齡下降至最低水平，均在3log2 以上，21 日齡之后抗體水平又逐步升高，最高達到8log2 以上，詳見圖1。在整個監測周期，抗體均勻度呈現前期高，后期各組均勻度較差。在21 日齡之前（包括21 日齡）各組抗體水平差異不顯著。A 組在21、28 和35 日齡均顯著高于B 組（P<0.05），而C 組在21、28 和35 日齡均顯著高于D 組（P<0.05）。盡管C 組在21、28 和35 日齡抗體水平顯著高于A 組（P<0.05），而A 組與D 組差異不顯著（P>0.05）。

圖1 新城疫母源抗體水平變化

2.2 2 H9 亞型禽流感抗體 從圖2 可以看出，H9 亞型禽流感母源抗體在1 日齡平均均在10log2 以上，然后逐步下降至21 日齡為最低水平，約3log2，隨后抗體水平逐步提高，最高達到9log2。在整個監測周期，抗體均勻度呈現前期高，后期各組均勻度較差。C、D 組抗體水平在28 日齡、35 日齡時均顯著高于A、B 組差異均顯著（P<0.05），其它日齡差異不顯著。

圖2 H9 亞型禽流感母源抗體水平變化

3 討 論

新城疫、H9 亞型禽流感母體抗體會影響疫苗接種后的抗體消長規律，與在SPF 雞上免疫后的抗體變化截然不同。本文對新城疫流感滅活苗在快大雞實際應用的抗體水平進行了監測。從本文監測結果可以看出，無論是1 日齡還是7日齡免疫，新城疫和H9 亞型禽流感抗體水平呈現U 字型的變化規律，最低點均在21 日齡，結合臨床上H9 在20 日齡多發的情況，抗體水平低有可能是該階段H9 發病較多的原因之一。抗體均勻度隨著日齡的增長而呈現不同的分化，這與免疫接種劑量是否精確一致，個體發育和免疫狀況等綜合因素有關。

在新城疫抗體方面，21 日齡之前各組差異不顯著，在21日齡及之后先免疫新支活苗后免疫新城疫流感滅活苗的A、C 兩組，其抗體水平均顯著高于先免疫新城疫流感滅活苗后免疫新城疫傳染性支氣管炎活疫苗的B、D 兩組（P<0.05），這有可能是因為新城疫傳染性支氣管炎活苗中的新城疫活毒感染后影響了新城疫抗體消長規律。 H9 亞型禽流感抗體未能呈現與以上的規律，主要與H9 沒有活疫苗有關，而D組在35 日齡的抗體水平明顯較高，有可能與感染野毒有關。

本文也對法氏囊病活苗免疫是否影響新城疫和H9 禽流感抗體進行了分析，從圖1 和圖2 結果可以看出，法氏囊病活苗1 日齡免疫的A、B 兩組與14 日齡免疫的C、D 兩組相比，新城疫抗體水平在21 日齡及之后前兩組顯著低于后兩者（A0.05），有可能是新城疫兩次免疫使法氏囊病的影響下降，而H9 亞型禽流感抗體水平在28 日齡及之后前兩組顯著低于后兩者，這可能與雞苗早期免疫系統不完善而法氏囊病活疫苗毒性較強有關。

本文對新城疫流感二聯滅活疫苗在快大肉雞的免疫誘導的抗體水平進行了探討，結果提示新城疫傳染性支氣管炎活疫苗先于新城疫流感滅活疫苗免疫對于新城疫抗體水平的提高更好，法氏囊病活疫苗14 日齡疫苗比1 日齡免疫，對新城疫和H9 亞型禽流感兩種抗體水平的提高更好。