核轉錄因子NF-kB與肺癌骨轉移的相關性研究

劉 哲 吳芳庚 鄒俊韜 鄒平安 鐘 赟

肺癌是常見的惡性腫瘤之一，很多肺癌患者來院就診時已伴有遠處轉移的情況，其中以骨骼為靶器官轉移的病灶越來越多，且以多發為主。骨轉移中最常見的轉移部位為肋骨，其次為胸椎和腰椎及骨盆；也易在含有紅骨髓的軀干骨定殖，研究發現其較少在含黃骨髓的四肢長骨生長[1-2]。

核轉錄因子通路在惡性腫瘤的發生、發展過程中占有重要的地位，目前己經證實的多條與惡性腫瘤的生長和生存至關重要通路中NF-kB均起著重要的作用，特別是在血液系統疾病中的惡性腫瘤，其組成性的激活是許多疾病的發生、進展的共同性特征標志[3]。

本研究通過研究肺癌細胞中的NF-kB表達情況，明確NF-kB在肺癌細胞中的表達及其與發生骨轉移風險的相關性，為臨床治療提供依據，及早對有轉移風險的患者進行預防性的判斷與治療。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月1日至2020年6月1日江西省腫瘤醫院病理科系統中診斷為肺癌及發生了骨轉移的42例患者經福爾馬林固定石蠟包埋的骨轉移組織的病理標本。入選標準：①已確診病例，②有足夠的標本用于診斷和染色，③病案資料及聯系方式完整；排除原發性骨源性疾病。以42例肺癌骨轉移疾病患者病理組織作為研究對象。收集肺癌骨轉移患者在初次確診時的相關臨床資料，包括性別、年齡、病理類型(常規病理及免疫組化)、病灶的大小、受累區域、肺癌腫瘤標志物。所有病例的病理診斷均由我院病理科明確。病例入組后，由至少一名以上的具有高級職稱的病理醫師負責對所有病例標本的病理切片按照肺癌國際診斷及分類標準進行復核，并根據相關的基線資料，由臨床主治醫師及以上的醫生進行分期。隨機選取42例未發生骨轉移即早期肺癌患者標本作為對照組。

1.2 試劑與方法

兔抗人NF-kB p65單克隆抗體購自美國cell signaling公司，實驗中抗原修復采用的是檸檬酸鈉緩沖液熱抗原修復，即S-P免疫組織化學法，并以PBS代替一抗作為陰性對照組，使用已知陽性病理切片作為陽性對照使用。

1.3 結果判斷

NF-ΚB染色陽性定位于細胞核之中，染色表現為棕褐色或黃色顆粒狀。每例患者隨機觀察5個高倍視野(×200)的切片，并對每例切片采用半定量積分法判斷是否為陽性的結果。積分標準為：陽性細胞數≤5%為0分；>5%～25%為1分；>25%～50%為2分；>50%～75%為3分；>75%為4分；陽性染色黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。兩者積分相乘，0分為陰性(-)，1～4分為弱陽性(+)，5～8分為中度陽性(++)，9～12分為強陽性(+++)。

1.4 統計學方法

采用SPSS22統計軟件包比較2組的差別，采用卡方檢驗，以P值<0.05判斷其差異存在統計學意義。

2 結果

2.1 NF-kB表達在肺癌骨轉移中的表達

42例肺癌骨轉移患者中31例NF-kB陽性，陽性率為73.8%；42例對照組中19例NF-kB陽性，陽性率為42.2%，2組比較差異有統計學意義(χ2=8.868，P=0.003)。

2.2 NF-kB表達與肺癌骨轉移患者臨床病理特征的關系

NF-kB的表達與腫瘤患者的性別、年齡無相關性，與腫塊大小、淋巴結轉移病理類型相關(P<0.05)。見表1。

表1 NF-kB表達與肺癌骨轉移患者臨床病理特征的關系(例，%)

3 討論

NF-kB這一信號分子是1986年由Sen等[4]在成熟的B淋巴細胞中所提取出的一種對細胞信號通路起到調控的重要核轉錄因子。研究發現NF-kB廣泛存在于真核生物中，NF-kB可以對免疫應答、炎癥反應起到調控作用，還參與了炎癥的急性反應階段、細胞分化、細胞周期調控、細胞凋亡及對病毒感染的反應等。近來的研究還發現，在人類乳腺癌[5]、膀胱癌[6]、胃癌[7]等多種惡性腫瘤中均發現有NF-kB持續活化的現象[8-10]，而NF-kB的持續活化能紊亂微血管的纖溶系統從而引起其生理機制的改變，為腫瘤血行轉移提供了血液動力學的基礎[11]。NF-kB能夠參與免疫細胞的分化，增殖和活化[12-14]。NF-kB還能促進IL-2受體，T細胞受體α、β鏈的表達，從而介導了IL-2的毒性損害以及T細胞與內皮細胞粘附，導致內皮細胞受損從而為腫瘤的轉移提供了條件[15-17]。NF-kB通過上調凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis，IAP)而抑制瘤細胞等的凋亡，從而加速了疾病的發生，這可能與Rel家族中不同成分及不同信號通路的刺激、傳遞有關[18-19]。

有研究表明核轉錄因子NF-kB 是重要的轉錄因子，通常以非活性形式存在幾乎所有細胞的細胞質中，只有被激活后，才能從細胞質轉位于細胞核發揮重要的作用，活化的NF-kB 與腫瘤的發生發展、抗凋亡及促進腫瘤細胞生長等相關。肺腺癌晚期患者易遠處轉移，轉移部位以胸腰椎、骨盆轉移及四肢長骨骨干最為常見，其轉移的主要因素可能與腺癌病灶多位于肺組織的周邊，因此容易直接侵犯而累及肋骨、胸椎。

本研究發現，肺癌骨轉移組NF-kB 陽性表達明顯高于對照組，且有統計學差異，提示NF-kB 與肺癌骨轉移有一定的相關性。NF-kB 的表達與患者的年齡及性別分組無關，但與腫瘤病灶的大小、淋巴結轉移情況及病理類型相關。小細胞肺癌的腫瘤中 NF-kB 的表達高于腺癌和鱗狀細胞癌。目前國內外未見報道，具體機制尚有待探討。NF-kB 被活化后進一步促進了腫瘤的惡性進展，并且發現存在淋巴結轉移的腫瘤組織較無淋巴結轉移的表達增高，這說明NF-kB 有可能參與了腫瘤的浸潤轉移。在以后的臨床中，NF-kB水平變化在骨轉移風險較高的患者的篩查中可能起到預警的作用。