miR-34c-3p與M2型腫瘤相關巨噬細胞在鼻咽癌中的表達及意義

鄒彎彎 羅慶豐 曾 平 李金高

鼻咽癌是腫瘤科常見的惡性腫瘤之一[1]，臨床表現為鼻塞、涕中帶血、耳悶堵感、聽力下降、復視及頭痛[2]。鼻咽癌患者腫瘤是由腫瘤細胞、間質細胞及其他細胞外基質等構成[3]。腫瘤微環境浸潤的巨噬細胞被稱作腫瘤相關巨噬細胞[4]，能夠促進分泌多種細胞因子，促進腫瘤的發展進程[5]。腫瘤相關巨噬細胞可分為M1和M2兩種亞型，M2型主要作用是促進腫瘤細胞的生長和免疫抑制。IL-10是腫瘤相關巨噬細胞的重要指標。非編碼的腫瘤抑制分子分為3p和5p兩個亞型，在鼻咽癌等多種腫瘤中表達均下調，是重要的抑癌分子。目前，針對miR-34c-3p與鼻咽癌中M2型腫瘤相關巨噬細胞的研究尚缺乏。本研究探討miR-34c-3p與M2型TAM在鼻咽癌患者中的表達及意義，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年12月至2020年12月我院收治的50例鼻咽癌患者作為觀察組，50例鼻炎患者為對照組。觀察組男性29例，女性21例，平均年齡(53.04±3.69)歲；對照組男性27例，女性23例，平均年齡(52.85±3.50)歲。兩組患者一般資料具有可比性(P<0.05)。

1.2 納入及排除標準

納入標準：(1)病理檢查確診為鼻咽癌；(2)自愿接受并配合本研究者。

排除標準：(1)合并其他心腦血管疾患；(2)合并腫瘤轉移者；(3)非首次確診及診治的患者。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 觀察組采集術后新鮮腫瘤組織標本，對照組采取鼻咽部正常腺體組織。將采集好的組織分成兩份，一份經液氮迅速冷凍保存；另一份用于流式細胞檢測。采集兩組患者外周血標本， 檢測ELISA。

1.3.2 miR-34c-3p表達的檢測 采用PCR法檢測。預變性95℃、10 min，變性95℃、15 s，退火60℃、1 min，進行40個循環。

1.3.3 M2型TAM表達的檢測 將組織標本研磨成勻漿后加入生理鹽水混勻過濾制作單細胞懸液，1500 r/min離心5 min，去除上清，然后加1ml PBS緩沖液，然后進行第二次離心，重復3次后將重懸細胞用錫箔紙包住在流式細胞儀上分析。

1.3.4 血清IL-10檢測 采用ELISA法進行檢測，將分離好的血清標本800 r/min，5 min離心后覆蓋鋁箔紙，置于37℃環境中孵育2 h，然后移出上清液，加100 μl檢測試劑A，覆蓋鋁箔紙置于37℃環境中孵育1 h，再次移出上清液，重復該步驟，逐次縮短孵育時間(每次縮短為前一次的1/2 h)直至終止溶液反應，應用酶標儀檢測。

1.3.5 兩組患者5年后生存率比較 通過為期5年的隨訪，比較兩組患者生存情況。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 兩組鼻咽組織中miR-34c-3p的表達

兩組鼻咽組織標本中均有miR-34c-3p的表達，觀察組miR-34c-3p的平均相對表達量為(110.15±10.64)、對照組miR-34c-3p的平均相對表達量為(99.83±10.06)，觀察組高于對照組(P<0.05)，見表1。

2.2 兩組患者血清中IL-10水平

兩組患者血清中IL-10均有表達，觀察組血清IL-10平均水平為(19.30±4.85)pg/ml，對照組血清IL-10平均水平為(16.48±3.42)pg/ml，兩組比較P<0.05，見表1。

表1 兩組患者miR-34c-3p、M2型腫瘤相關巨噬細胞、IL-10水平比較

2.3 兩組患者5年后生存情況比較(表2)

表2 兩組患者5年后生存情況比較(例，%)

3 討論

關于鼻咽癌的研究已經較多了，但是其發病機制還尚未闡明，鼻咽癌的發病機制也一直是腫瘤科的研究熱點。既往關于腫瘤的研究顯示miR-34c-3p在消化道腫瘤、乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤中均呈下調表達[6]，miR-34c-3p是人體十分重要的癌癥抑制因子[7]，能夠有效Hep-2細胞的生長與浸潤，具有明顯的抑制腫瘤增長和延緩細胞衰亡的作用[8]。現有的研究顯示miR-34c-3p抑制腫瘤的發生于進展可能與Notch2通路有關，而且已有的研究顯示miR-34c-3p在鼻咽癌中的表達均降低，對鼻咽癌腫瘤因子抑制作用明顯[9]。本研究結果顯示miR-34c-3p的在鼻咽癌的表達降低，表明miR-34c-3p確實能夠抑制鼻咽癌細胞分化。腫瘤相關巨噬細胞相比起腫瘤細胞，基因表達更穩定。M2型腫瘤相關巨噬細胞細胞表面具有CD68及CD206等特征性蛋白分子，能高分泌白細胞介素-10 (IL-10)，加快免疫抑制，M2型腫瘤相關巨噬細胞在鼻咽癌中扮演著加快腫瘤增殖、促進腫瘤轉移的作用[10]，本究結果顯示，與正常對照組相比較，觀察組患者的M2型腫瘤相關巨噬細胞比例高于對照組(P<0.05)，也證實了M2型腫瘤相關巨噬細胞在鼻咽癌中的作用。通過分析miR-34c-3p與M2型腫瘤相關巨噬細胞及IL-10水平的關系發現miR-34c-3p與M2型腫瘤相關巨噬細胞、miR-34c-3p與IL-10水平均呈現負相關，表明miR-34c-3p在鼻咽癌的發病與進展中起著抑制作用。兩組患者5年后的生存率比較差異明顯(P<0.05)，表明隨著M2型的細胞數目的增多，患者的生存年限下降。

綜上，miR-34c-3p能夠抑制鼻咽癌的進展，是治療的新靶點，但是其具體作用方式與作用機制還有待研究。