烯丙基絲素蛋白溫敏水凝膠的合成及性能研究

王勃翔，劉麗，李佳，路艷華，程德紅，靳惠宇，周凌

（1 上海大學材料科學與工程學院，上海200444； 2 遼東學院遼寧省功能紡織材料重點實驗室，遼寧丹東118003）

引 言

水凝膠是一種具有三維交聯網絡結構的材料，它在水中溶脹而不溶解，并能夠吸收超過自身體積數百倍乃至數千倍的水分，是集吸水、保水、緩釋、柔性等特點于一體的新型材料[1]。水凝膠因其高含水量和仿真的組織彈性，已經成為體外細胞培養、組織工程和藥物載體的理想材料。水凝膠可以模擬細胞外天然基質，并且可調節的力學性能有助于保持水凝膠結構的完整性和細胞的黏附性[2]。目前開發的水凝膠很少作為單一組分獨立調整細胞生態環境，因此，引入天然蛋白質能夠為水凝膠提供高的生物仿生特性和豐富的生物活性位點。

蛋白質具有長程有序的二級分子結構和高一級氨基酸序列，展現出獨特的生物結構和生物活性，蛋白質材料在生物醫學領域得到廣泛應用。柞蠶絲是一種常見的非?？菩Q絲，絲素蛋白（ASF）為柞蠶絲纖維的主要成分[3]。ASF 中含有特有的精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸RGD 序列，RGD 序列可與哺乳動物細胞產生特異相互作用，可與11種整合素特異性結合，有利于細胞黏附和生長，具有其他蛋白質所不可比擬的生物親和性。目前，以ASF 制成的生物醫用和組織工程材料如凝膠材料、納米纖維膜、支架和薄膜材料等[4-7]已經得到廣泛的研究。但是，由于ASF 再生的過程中溶劑對其大分子結構以及結晶結構的破壞，獨立制成的材料缺乏一定的力學強度和機械穩定性，難以形成特定形狀的材料；而且ASF 大分子肽鏈上缺乏一定的活性位點，與高分子聚合物復合相容性較差，嚴重影響其實際使用性能，限制其作為生物醫用材料的發展[8-11]。環氧化合物常被用來改性蠶絲纖維，通過環氧化合物對真絲進行整理，在真絲織物泛黃、耐老化性和抗褶皺性等方面取得了良好的效果[12]。烯丙基縮水甘油醚（AGE）是一種含不飽和雙鍵和環氧基雙官能團的功能分子，易溶于水，其環氧基團能夠與絲素蛋白中的組氨酸、賴氨酸、精氨酸、天門冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸和酪氨酸發生反應[13]。因此，AGE 的環氧基團可以與ASF 上大量的氨基發生反應，從而可將雙鍵引入到ASF主鏈上，形成具有反應性的ASF，為其與烯丙基單體共聚提供有利條件。

近年來，智能響應性材料受到廣泛的關注和研究。智能水凝膠在細胞培養平臺的開發中能夠對細胞增殖情況進行動態控制，從而達到有針對性的醫療目的，如細胞治療或組織/器官再生[14]。聚N-異丙基丙烯酰胺（PNIPAAm）是一種溫度響應性聚合物，轉變溫度為32℃[15]，其相轉變行為表現在當其水溶液升至一定溫度時，PNIPAAm 與水發生相分離，呈現低溫溶解、高溫分相的現象[16]。PNIPAAm 通過改變溫度控制細胞生長的動態微環境，細胞在不同的環境中具有不同的黏附程度，能夠進一步調節細胞的增殖、分化和遷移[17]。PNIPAAm 的溫度調節區間便于控制且在人體生理溫度范圍內，因此，PNIPAAm 水凝膠通常作為促進細胞生長和增殖的平臺，又可作為組織工程的原位支架，PNIPAAm 水凝膠在細胞培養和組織工程領域顯露出巨大的潛力[18-19]。

本文針對ASF 的缺陷，解決ASF 與高分子材料相容性差的問題，并結合PNIPAAm 水凝膠和ASF在細胞培養領域的優勢，開發一種具有生物親和性的復合水凝膠。首先，以ASF 為原料，采用AGE 對ASF 進行改性，在均相條件下合成出具有反應性雙鍵的烯丙基絲素蛋白（ASF-AGE），使ASF 大分子肽鏈上增加便于反應的活性位點。然后，在不使用任何交聯劑的情況下，將ASF-AGE 與NIPAAm 進行聚合，利用ASF 的自組裝特性，最終形成具有良好溶失穩定性和良好綜合力學性能的p(ASF-AGENIPAAm)溫敏水凝膠。本文研究了ASF-AGE 的化學結構以及p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠的結晶結構，并探討ASF-AGE 用量對水凝膠溫敏性、水溶失性和力學性能的影響。本文制備的水凝膠較PNIPAAm 和ASF 獨立凝膠比較具有較好的力學性能和水溶失穩定性，有望在細胞培養、組織支架等領域得到應用。

1 實驗材料和方法

1.1 材料

柞蠶繭，購置于遼寧柞蠶絲綢科學研究院有限公司；水合茚三酮，AR純度99%，上海阿拉丁試劑有限公司；烯丙基縮水甘油醚，AR純度99%，上海阿拉丁試劑有限公司；N-異丙基丙烯酰胺（NIPAAm），AR純度98%（在正己烷中重結晶純化處理），上海阿拉丁試劑有限公司；過硫酸銨（APS），分析純，上海國藥化學試劑有限公司；N,N,N′,N′-四甲基乙二胺（TEMEDA），分析純，上海國藥化學試劑有限公司；其他試劑均為市售分析純；高純氮氣，99.999%，丹東天茂氣體有限公司。

1.2 分析測試儀器

北京博醫康實驗儀器有限公司FD-1C-50 型冷凍干燥機；美國Mettler Toledo 公司FE28 型臺式pH計；日本島津UV-2600 紫外分光光度計；德國Bruker 公司AV 400 型核磁共振波普儀；日本Rigaku公司D/max-2550 型X 射線衍射儀；美國TA instruments 公司Q-2000 差示掃描量熱儀；美國FTC公司TMS-PRO質構儀。

1.3 烯丙基絲素蛋白（ASF-AGE）的制備

（1）柞蠶繭脫膠：將已經去除蠶蛹的柞蠶繭剪成2 cm×2 cm 碎片，浸泡于0.5%（質量）Na2CO3和0.25%（質量）十二烷基硫酸鈉溶液中，蠶繭片與純水浴比為1∶100，沸煮50 min 脫除柞蠶繭表面的絲膠蛋白，用去離子水充分洗滌，重復三次，將充分脫膠后的柞蠶絲纖維用吹風機吹干后備用。

（2）再生ASF 制備：稱取200 g Ca(NO3)2置于500 ml 錐形瓶中，在105℃±1℃油浴中熔融；量取100 ml熔融Ca(NO3)2置于250 ml 錐形瓶中，加入10 g±0.3 g的柞蠶絲纖維，與熔融Ca(NO3)2組成浴比1∶10 溶液，不斷攪拌溶解3～4 h；待柞蠶絲纖維全部溶解后，通過雙層脫脂紗布對粗溶液進行過濾，隨后轉入透析袋中，在去離子水環境下透析除去鹽離子，在4℃恒溫冰箱中透析3 d，每隔6 h 換水一次，并測試透析液電導率，當透析液電導率小于15 μS/cm 并不再變化后即為透析完成。透析后的ASF 溶液在冷凍離心機中離心（8000 r/min，10 min，4℃），將離心后的上清液在超低溫冰箱中-50℃急速冷凍8 h，然后置于冷凍干燥機中凍干20h，最后獲得再生ASF。

（3）ASF-AGE 的制備：在250 ml 三口瓶中加入一定量ASF，加入一定量去離子水溶解，ASF 濃度為10 mg/L，采用2 mol/L 的Na2CO3和1 mol/L 的NaOH標準溶液調節pH，通入氮氣，勻速攪拌下滴加AGE，15～30 min 內滴加完畢，在一定溫度下反應24 h；反應結束后用1 mol/L 鹽酸溶液調節溶液pH 至中性。反應液裝入透析袋中，4℃下透析2 d，每隔6 h 換水一次。透析后的溶液在超低溫冰箱中-50℃急速冷凍8 h，然后冷凍干燥20 h，得到ASF-AGE。

1.4 溫敏p（ASF-AGE-NIPAAm）水凝膠的制備

將NIPAAm 溶解在去離子水中，配制成75 mg/ml 的溶液，靜置備用。在冰水浴中，將ASF-AGE、APS 和TEMEDA 按表1 比例溶解于去離子水中，通入N2磁力攪拌30 min，在攪拌過程中逐滴加入一定量的NIPAAm 水溶液，20℃反應一段時間后，待溶液變黏，吸取混合溶液裝入帶蓋玻璃瓶中，在室溫下繼續自由基聚合反應，12 h后得到白色水凝膠，最后將水凝膠裝入透析袋中，去離子水透析3 d 去除未反應物質，冷凍干燥得到干凝膠。

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1.5 氨基轉化率的測定

采用茚三酮比色法測定ASF-AGE 氨基轉化率。根據文獻原理[20-21]，以丙氨酸為標準溶液，測定其不同濃度在570 nm 的吸光度，繪制標準曲線如圖1 所示。在ASF 與AGE 反應前取一定體積的ASF 溶液測定其570 nm 的吸光度，根據丙氨酸標準曲線和式（1）確定反應前ASF 的氨基含量；同時，按照該方法，測定ASF 與AGE 反應后的氨基含量。根據反應前后的氨基含量變化，按式（2）計算氨基轉化率。

表1 p（ASF-AGE-NIPAAm）凝膠制備反應條件Table 1 Reaction conditions of preparation for p（ASF-AGE-NIPAAm）gel

圖1 丙氨酸溶液標準曲線Fig.1 Standard curve of alanine solution

氨基含量：

氨基轉化率：

式中，A 為反應液測得的吸光度值OD570nm；m 為反應時投入柞蠶絲素質量，g；V1為測定時反應液取樣體積ml；V2為測定時反應液定容體積，ml；10-6為單位換算系數；X1為反應前柞蠶絲素氨基含量，g/ml；X2為反應后柞蠶絲素氨基含量，g/ml。

1.6 核磁共振氫譜（1H NMR）測試

采用核磁共振波譜儀對ASF-AGE 樣品進行結構分析。分別稱取5～8 mg 的干燥樣品裝入干凈的試劑瓶中，用D2O 作為溶劑，樣品溶解后，用微量進樣器注入核磁管中，進行核磁1H測試。

1.7 水凝膠溫敏性和LCST測試

將充分干燥的p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠試樣精確稱量計為Wd，浸泡在去離子水中，水浴15℃每隔一段時間用濾紙吸干凝膠表面水分，迅速稱量溶脹水凝膠的質量，直至水凝膠樣品達到吸水飽和計為Ws，平衡溶脹率（ESR）按式（3）計算。然后，升高水浴溫度，在不同溫度下計算其ESR，根據數據繪制曲線。

采用差式掃描量熱儀測定p(ASF-AGENIPAAm)水凝膠的低臨界溶解溫度（LCST）。測試條件：N2氣氛，氣體流量20 ml/min，樣品質量約10 mg，溫度范圍0～50℃，升溫速率2℃/min。

1.8 凝膠水溶失性測試

1.9 凝膠力學性能測試

采用質構儀在壓縮模式下測試p(ASF-AGENIPAAm)水凝膠樣品的壓縮強度。將水凝膠裁剪成直徑為(10±0.5)mm、高為(8±0.5)mm 圓柱小塊，壓縮速率為5 mm/min，觸發力為0.5 N，形變設置為50%，溫度25℃，相對濕度65%±5%。

2 實驗結果與討論

2.1 烯丙基絲素蛋白（ASF-AGE）的制備機理

ASF 和AGE 的反應機理如圖2 所示。ASF 溶解后，ASF大分子肽鏈在溶液中呈無規線團結構，能夠將氨基端基裸露出來，當AGE 逐漸加入后，AGE 的環氧基團在堿性條件下發生開環[22]，形成羥基的同時與柞蠶絲素蛋白的氨基發生親核取代反應，從而形成ASF-AGE。實驗中優化反應條件，確定ASF與AGE 的質量比為1∶8，水浴20℃，pH=10.5，反應24 h。在此條件下，最終得到的ASF-AGE 氨基轉化率為55.21%。

2.2 ASF-AGE的化學結構分析

ASF 和ASF-AGE 的核磁氫譜如圖3 所示。對比圖3（a）、（b）發現，ASF-AGE 樣品的化學位移在δ=5.20 和δ=5.85 處出現新的特征峰，對應于乙烯基上質子H-1(2H)和H-2(1H)的特征峰，并且H-1與H-2特征峰的積分比為2∶1?；瘜W位移在δ=4.55處為環氧基開環后H-5(1H)的特征峰；化學位移在δ=3.49屬于質子H-3、H-4、H-6 的特征峰。根據1H NMR 譜圖結果，可以判斷AGE 環氧基團開環與ASF 的氨基發生反應，形成具有雙鍵反應性的ASF-AGE。

2.3 p（ASF-AGE-NIPAAm）水凝膠形成過程

ASF 在水溶液中以無規線團和α-螺旋結構存在，但隨著時間的延長ASF 自組裝形成穩定的物理交聯結構，無規線團和α-螺旋結構向β-折疊結構轉變[23]，形成ASF 凝膠；但是，由于ASF 肽鏈上含大量的疏水性聚丙氨酸(-Ala-)n重復序列，這使得ASF凝膠表現出更強的疏水性，并且ASF凝膠β-折疊為高度結晶結構，因此ASF 凝膠力學性能差，且受力后易碎,不能保持凝膠形態和結構的完整[24]。

圖2 烯丙基絲素蛋白（ASF-AGE）制備機理Fig.2 Preparation mechanism of ASF-AGE

圖3 ASF（a）和ASF-AGE（b）的1H NMR譜圖Fig.3 1H NMR gspectra of ASF(a)and ASF-AGE(b)

ASF-AGE 溶液的凝膠化過程以及線性PNIPAAm 的溫敏行為如圖4 所示。由圖4(a)可以看到，新鮮的ASF-AGE 溶液呈透明狀，放置一段時間后自組裝形成白色凝膠，但是，樣品瓶中的ASFAGE 凝膠受到輕微晃動和倒置后，凝膠破碎且低濃度的ASF-AGE依然可以流動。雖然ASF-AGE溶液的凝膠化轉變迅速，但其本身并不能保持穩定的凝膠形態，這表明ASF-AGE與ASF二者具有相似的凝膠化現象。由圖4(b)可以看到，線性PNIPAAm 室溫(20℃)下呈無色透明狀，并且可以流動，當溫度高于低臨界溶解溫度(LCST)時，無色透明溶液變為白色，但倒置后溶液依然可以流動，這說明在無交聯劑的情況下，線性PNIPAAm不能夠形成三維網狀結構的水凝膠。通過對ASF-AGE溶液和線性PNIPAAm 溶液的分析，表明ASF-AGE 和線性PNIPAAm 均不能獨立形成完整形態的凝膠，不能獨立作為細胞培養平臺使用。

ASF-AGE 與NIPAAm 聚合形成p(ASF-AGENIPAAm)水凝膠過程如圖5 所示。在引發劑的作用下，NIPAAm 發生自由基聚合，并與ASF-AGE 中的烯丙基雙鍵通過共價鍵發生聚合；在NIPAAm 與ASF-AGE 聚合的同時，隨著反應時間的延長，體系黏度逐漸增大，ASF-AGE 大分子肽鏈與PNIPAAm大分子鏈纏結到一起，通過ASF-AGE 的凝膠化自組裝，最終形成具有較好形態的水凝膠材料。

2.4 p（ASF-AGE-NIPAAm）水凝膠結晶結構分析

圖4 ASF-AGE的凝膠化現象(a);線性PNIPAAm溫敏特性(b)Fig.4 Gelation behavior of ASF-AGE solution(a);thermosensitive behavior of linear PNIPAAm(b)

圖5 p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠形成過程Fig.5 Preparation process of p(ASF-AGE-NIPAAm)hydrogel

圖6 顯示的是樣品的XRD 譜圖，其中圖6（a）是凍干后ASF 和ASF-AGE 的XRD 譜圖，圖6（b）是不同ASF-AGE 含量下p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠的XRD 譜圖。由圖6（a）可以看到，ASF 和ASFAGE 的2θ 在11.5°和22.3°處具有明顯的衍射峰，對應的是絲素蛋白silkⅠ結構，對應的二級結構為無規線團結構和α-螺旋結構，這說明ASF-AGE 的二級結構并未發生變化。圖6（b）中p(ASF-AGENIPAAm)水凝膠主要在8.2°和20.3°具有較寬的衍射峰，在16.7°和24.5°處具有微弱的衍射峰，表現出絲素蛋白典型的silkⅡ結構，對應的二級結構為β-折疊結構，與ASF 的結晶結構相對應。在反應過程中，隨著反應時間的延長，ASF-AGE 發生凝膠化自組裝，其二級結構由無規線團和α-螺旋結構轉變成穩定的β-折疊結晶結構，這與柞蠶絲纖維的結晶結構相同，這樣穩定的結晶結構可能使p(ASF-AGENIPAAm)水凝膠展現出良好的機力學性能。

圖6 ASF和ASF-AGE(a)以及不同ASF-AGE含量p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠（b）的XRD譜圖Fig.6 XRD patterns of ASF and ASF-AGE(a),and p(ASF-AGE-NIPAAm)hydrogels with different ASF-AGE content(b)

2.5 p（ASF-AGE-NIPAAm）水凝膠溫敏特性

p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠的DSC 曲線如圖7 所示。DSC 曲線上吸熱峰起始溫度與最大吸熱溫度的切線為樣品的低臨界溶解溫度（LCST）。顯然，所有樣本在32℃附近都顯示出相似的LCST，這與PNIPAAm 水凝膠的LCST相對應[25]。隨著ASF-AGE含量的增加，水凝膠的LCST 略有下降，這是因為PNIPAAm 的溫敏特性是由于疏水基團異丙基與親水基團酰胺基相互作用產生的，ASF-AGE 本身含有大量的超疏水聚丙氨酸片段，凝膠網絡中大量的聚丙氨酸使水凝膠的疏水性增強，ASF-AGE 上的烯丙基雙鍵與NIPAAm 發生共聚后PNIPAAm 主鏈的疏水性增強所導致的。

圖7 不同ASF-AGE含量的p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠DSC曲線Fig.7 DSC curves for p(ASF-AGE-NIPAAm)hydrogels with different ASF-AGE content

圖8 PNIPAAm水凝膠可逆溶脹-收縮過程Fig.8 Reversible swelling-shrink process of PNIPAAm

PNIPAAm 為典型的高溫收縮型溫敏聚合物，PNIPAAm 類水凝膠在LCST 以下時，水凝膠表現出清澈、透明以及均勻的狀態，當溫度高于LCST 時，水凝膠體積急劇收縮，平衡溶脹率（ESR）發生改變，大分子鏈構象的微觀變化，導致凝膠的親/疏水性發生根本變化，這是一個可逆溶脹-收縮過程（圖8）。因此，研究水凝膠的ESR 與溫度之間的關系，可以直觀反映出水凝膠的溫敏特性，同時也能間接評估水凝膠的LCST。

ESR 的溫度依賴性如圖9 所示。ESR 數據表明[圖9（a）]，所有水凝膠都具有相似的溫敏特性，ESR數據對溫度的微分曲線[圖9（b）]表明所有水凝膠的ESR 在接近32℃時均顯著降低，在32℃時的相分離速率最快。由圖9 可以看到，當溫度低于LCST 時（T＜32℃），凝膠的ESR 在不同ASF-AGE 含量下表現出不同的水平；在室溫環境下，隨著ASF-AGE 含量的增加，其ESR 呈現降低趨勢，這也可以通過大量的聚丙氨酸引起的疏水性增強來解釋。通過ESR觀測的LCST 數據與DSC 曲線數據相吻合，可以確定p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠具有PNIPAAm 同樣的溫敏特性和可逆溶脹-收縮過程。

2.6 p（ASF-AGE-NIPAAm）水凝膠的溶失穩定性

圖9 p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠不同溫度下的ESR曲線（a）和ESR對溫度的微分曲線（b）Fig.9 ESR curves(a)and integral curves(b)for p(ASF-AGE-NIPAAm)hydrogels under different temperature

p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠的水溶失性與凝膠自身的親水基團含量和ASF 分子結構的結晶度相關，通過對該凝膠的水溶失率分析，可以評價其作為生物醫學材料的體內外穩定性[26]。p(ASFAGE-NIPAAm)水凝膠的水溶失率如圖10 所示。由圖可知，該水凝膠的水溶失率隨著ASF-AGE 的含量增加而降低，pAGN4 樣品的水溶失率最低，其值為5.61%；當ASF-AGE 的含量繼續增加，pAGN5 樣品的水溶失率升高，這是因為ASF-AGE 的轉化率有限，ASF-AGE 上并沒有足夠多的烯丙基與NIPAAm 發生共聚合，因此水凝膠體系中仍有多余的PNIPAAm 在可逆溶脹-收縮過程中溶于水中并析出，導致水溶失率增加。

圖10 不同ASF-AGE含量p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠的水溶失率Fig.10 Dissolve-loss ratio of p(ASF-AGE-NIPAAm)hydrogels with different ASF-AGE content

2.7 p（ASF-AGE-NIPAAm）水凝膠力學性能

水凝膠材料多應用在含水的介質，在水中可以膨脹到很高的程度，這導致聚合物鏈密度降低，使水凝膠的物理強度極差。在細胞培養和組織工程領域，材料所需的力學性能更加多樣化，細胞生長支架的力學性能應與宿主組織所需的力學性能相匹配，傳統的水凝膠難以實現[27-29]。

ASF-AGE 和PNIPAAm 均難以獨立形成水凝膠，ASF-AGE 與NIPPAAm 共聚復合后形成較為完好形態的水凝膠。因此，為了研究p(ASF-AGENIPAAm)復合水凝膠的力學性能，采用壓縮實驗對達到一半ESR 的復合水凝膠進行表征，研究不同ASF-AGE 含量對復合水凝膠力學性能的影響，如圖11 所示。圖11（a）中，每個水凝膠樣品在50%的形變內并未顯示出破碎的情況，水凝膠的強度隨著ASF-AGE 含量的增加而增大，pAGN4 和pAGN5 承受的最大壓力均超過100 kPa，分別為101.26 kPa 和117.85 kPa；說明水凝膠中ASF-AGE 的結晶結構使其機械強度得到增加，保證水凝膠能夠承受一定的壓力。隨著ASF-AGE 含量的增加，水凝膠的彈性模量[圖11（b）]由（80±23）kPa(pAGN1)逐漸提高到（606±93）kPa(pAGN4)，彈性模量增加了約8 倍；說明相互纏結的大分子相互作用提升了水凝膠的彈性范圍。但是，隨著ASF-AGE 含量繼續增加，pAGN5 的彈性模量下降至（467±61）kPa；這是因為隨著ASF-AGE 含量增加，體系中沒有足夠多的烯丙基與NIPAAm 發生共聚合，導致多余的ASF-AGE自組裝聚集在一起，形成很強的集中結晶，這種聚集雖然強度較高，但會導致水凝膠整體剛性變大?？傮w而言，pAGN4 具有較好的綜合力學性能，可以滿足生物組織細胞體內外培養所需的力學性能要求[30-31]。

3 結 論

圖11 不同ASF-AGE含量p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠的應力-應變曲線（a）和彈性模量（b）Fig.11 Stress-strain curves(a)and elasticity modulus(b)of p(ASF-AGE-NIPAAm)hydrogels with different ASF-AGE content

（1）利用ASF 氨基與AGE 環氧基團反應機制，堿性條件下使AGE 環氧基團開環與ASF 的氨基發生反應，制備具有反應性雙鍵的ASF-AGE；1H NMR表明，烯丙基雙鍵成功引入ASF大分子鏈上；當ASF與AGE 的質量比為1∶8，水浴20℃，pH=10.5，反應24 h 時，ASF-AGE 的氨基轉化率為55.21%；烯丙基的引入，為ASF 與烯丙基單體共聚提供有利條件，解決ASF與高分子聚合物相容性差的問題。

（2）在不含交聯劑的情況下，通過ASF-AGE 和NIPAAm 共聚復合，制備了溫敏p(ASF-AGENIPAAm)水凝膠，該凝膠具有穩定的β-折疊結晶結構，并且具有明顯的溫敏特性，表現出良好的可逆溶脹-收縮過程，其LCST約32℃。

（3）p(ASF-AGE-NIPAAm)水 凝 膠 隨 著ASFAGE 含量的增加，水溶失性和力學性能得到明顯提升，在ASF-AGE 與NIPAAm 比例為4/6 時，p(ASFAGE-NIPAAm)水凝膠水溶失率最低為5.61%，ESR達到50%形變所承受的最大壓力為101.26 kPa，彈性 模 量 為（606±93）kPa，綜 合 力 學 性 能 較 好。p(ASF-AGE-NIPAAm)水凝膠在細胞培養、組織支架等方面具有潛在的應用價值。