6 種藥用植物黃酮類物質(zhì)含量測(cè)定

謝 進(jìn)，戴艷嬌，周佳民，黃艷寧，宋 榮，彭斯文，朱校奇

（湖南省農(nóng)業(yè)環(huán)境生態(tài)研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410125）

黃酮類化合物（flavonoids）在植物界分布廣泛，88 科近230 屬植物中均有發(fā)現(xiàn)[1]，是藥用植物中的主要活性成分之一。黃酮類化合物的主要生物活性包括：抗菌抗病毒功能[2]、鎮(zhèn)痛祛痰平喘功能[3]、防止心腦血管疾病功能[4]、抗腫瘤抗癌功能[5]、抗氧化清除自由基功能[6-7]等。

試驗(yàn)選用的百合、玉竹、白術(shù)、全瓜蔞、葛根、玄參均為當(dāng)前主要藥用植物的研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行化學(xué)成分進(jìn)行研究分析，有助于后續(xù)的品質(zhì)分析。薛梅等[8]對(duì)龍牙百合的鱗莖總黃酮提取工藝進(jìn)行研究，通過(guò)最佳提取條件，得到百合鱗莖的總黃酮含量為（3.224±0.051）%；王京京等[9]在玉竹總黃酮提取綜述中提到，通過(guò)低共熔溶劑提取法得到玉竹塊莖的總黃酮含量為2.013%；楊小紅等[10]對(duì)白術(shù)總黃酮提取工藝進(jìn)行研究，得到總黃酮含量為1.329%；韓曉強(qiáng)等[11]通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化了瓜蔞總黃酮的提取工藝，得到的總黃酮含量為0.859%；王銳等[12]通過(guò)超聲波輔助提取法得到葛根的總黃酮含量為2.76%；宋玲玲等[13]對(duì)玄參的總黃酮提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，得到總黃酮含量為5.625%。

通過(guò)這些研究可以發(fā)現(xiàn)，百合等6 種藥用植物中的黃酮含量并不高，參考Liu 等[14]關(guān)于建立植物激素方法的思路，采用黃秋葵黃酮類物質(zhì)的提取檢測(cè)方法[15]對(duì)上述6 種藥用植物的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行含量測(cè)定，由于采用了超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，可以檢測(cè)到納克級(jí)的物質(zhì)，且具備較為完整的黃酮質(zhì)譜庫(kù)，這為試驗(yàn)樣品黃酮物質(zhì)的提取分離鑒定提供了穩(wěn)定的技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

百合鱗莖、玉竹塊莖、白術(shù)塊莖、瓜蔞果實(shí)、葛根、玄參根，于2015 年12 月在湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院高橋基地采集。樣品采收，烘干，磨粉后過(guò)20 目篩，稱重備用。

主要試劑：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（純度99%）、黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品（純度99%）、黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品（純度99%）、柚皮素標(biāo)準(zhǔn)品（純度99%）、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品（純度99%），均購(gòu)于Sigma 公司；無(wú)水乙醇（分析純，中國(guó)化工）；乙腈（色譜純）、甲酸（色譜純），德國(guó)默克公司。

主要試驗(yàn)儀器：BX5200H 超聲波清洗儀（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）；WB-2002 水浴鍋（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；1260-6460 液質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)安捷倫公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 驗(yàn)證試驗(yàn)方法的普遍性、穩(wěn)定性、重復(fù)性 分別將蘆丁、黃芩苷、槲皮素、柚皮素及黃芩素標(biāo)樣配置成1 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)原液，將5 種標(biāo)樣混合，稀釋成6 個(gè)濃度梯度（0.5 、2、10、100、500、2 000 μg/L），制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并取3 組濃度梯度（2、100、500 μg/L）對(duì)黃酮提取分離檢測(cè)方法[14]進(jìn)行評(píng)估，以驗(yàn)證試驗(yàn)方法的穩(wěn)定性及重復(fù)性。

1.2.2 6 種藥用植物黃酮類物質(zhì)含量檢測(cè) 準(zhǔn)確稱量百合鱗莖、玉竹塊莖、白術(shù)塊莖、瓜蔞果實(shí)、葛根、玄參根干粉2.0 g，加入20 mL 75%乙醇溶液，超聲提取75 min，進(jìn)行黃酮提取分離檢測(cè)，對(duì)蘆丁、黃芩素、黃芩苷、槲皮素和柚皮素這5 種黃酮類物質(zhì)的含量進(jìn)行比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)方法驗(yàn)證結(jié)果分析

如表1 所示，該方法重現(xiàn)性好，具有良好的穩(wěn)定性和精密度。由于采用質(zhì)譜檢測(cè)，可以排除干擾離子，使得檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確。從圖1 可知，蘆丁、黃芩苷、槲皮素、柚皮素和黃芩素色譜峰完全分開(kāi)，色譜峰比較對(duì)稱，沒(méi)有較明顯的拖尾現(xiàn)象，說(shuō)明色譜條件基本滿足試驗(yàn)要求。

2.2 6 種藥用植物中黃酮類物質(zhì)含量比較

百合鱗莖、玉竹塊莖、白術(shù)塊莖、瓜蔞果實(shí)、葛根、玄參根通過(guò)提取分離得到一定量的蘆丁、黃芩苷、槲皮素、柚皮素和黃芩素。從表2 可以看出，在蘆丁、黃芩素、黃芩苷、槲皮素和柚皮素這5種黃酮類物質(zhì)中，白術(shù)塊莖僅含有0.94 μg/g 的柚皮素；玉竹塊莖中槲皮素含量為2.96 μg/g，柚皮素含量為3.96 μg/g；瓜蔞果實(shí)中槲皮素含量為37.12 μg/g，且含有1.80 μg/g柚皮素；葛根中槲皮素、柚皮素和黃芩素的含量分別為1.17、6.72 和2.52 μg/g；玄參根中蘆丁、黃芩苷、槲皮素和柚皮素的含量分別為5.65、0.25、4.90 和1.45 μg/g；百合鱗莖含有5 種黃酮類物質(zhì)，其中蘆丁的含量達(dá)到25.31 μg/g。

3 結(jié) 論

試驗(yàn)結(jié)果表明，盡管蘆丁具有與總黃酮相似的結(jié)構(gòu)，若僅僅是測(cè)定藥用植物總黃酮中的指標(biāo)性成分，可以用來(lái)粗略估算總黃酮含量，但隨著對(duì)黃酮類物質(zhì)研究的不斷深入，多采用高效液相色譜甚至液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)黃酮類物質(zhì)進(jìn)行含量測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確；同時(shí)試驗(yàn)結(jié)果也說(shuō)明該黃酮類物質(zhì)提取檢測(cè)方法適用于多種藥用植物的黃酮類化合物含量測(cè)定，方法靈敏度高，最低檢測(cè)限低至0.1 μg/L，同時(shí)該檢測(cè)方法可以不斷添加新的黃酮類物質(zhì)標(biāo)樣，通過(guò)黃酮類物質(zhì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)，使植物樣品中黃酮類物質(zhì)能夠得到更全面地比較分析。

表1 提取檢測(cè)方法評(píng)估

圖1 黃酮類物質(zhì)標(biāo)樣色譜圖

表2 6 種藥用植物黃酮類物質(zhì)的含量 (μg/g)