閩東地區兒童地中海貧血的基因表型及分析

李春芳 左娟 何思俊 陳東亮 鐘健 林泉

（1 福建省寧德市閩東醫院小兒內科 寧德355000；2 福建省寧德市閩東醫院產前診斷中心 寧德355000）

地中海貧血是一種單基因遺傳病，又稱海洋性貧血或珠蛋白生成障礙性貧血，具有高發病率、高危害性，發病機制為血紅蛋白中1 種及以上珠蛋白在遺傳基因缺陷的情況下缺乏合成或缺乏充足的合成，從而促進病理或貧血狀態的出現[1]。命名、分類依據為缺乏的珠蛋白鏈程度及種類，α 地中海貧血指α 珠蛋白鏈缺乏，β 地中海貧血指β 珠蛋白鏈缺乏[2]。本研究分析了閩東地區兒童地中海貧血的基因表型。現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2017 年10 月～2019年6 月疑似地中海貧血兒童125 例資料，其中男75例，女 50 例；年齡 5 個月 ～13 歲，平均（6.6±1.4）歲；年齡分布：5～6 個月 5 例，7 個月 ～4 歲 32 例，5～11 歲 45 例，12～13 歲 43 例。貧血標準：血紅蛋白（Hb）含量，新生兒期＜145 g/L、1～4 個月＜90 g/L、4～6 個月＜100 g/L、6～59 個月＜110 g/L、5～11 歲＜115 g/L 和 12～14 歲＜120 g/L。

1.2 納入和排除標準 納入標準：紅細胞平均血紅蛋白均在28pg 以下；紅細胞平均體積均在80fl 以下。排除標準：依從性較差；合并血液系統疾病；合并免疫系統疾病。

1.3 研究方法

1.3.1 主要儀器和試劑 使用杭州博日科技有限公司生產的TC-96/G/H（b）C LifeECO 基因擴增儀，日本希森美康株式會社生產的XS-10 全自動模塊式血液體液分析儀，潮州開普生物技術有限公司生產的地中海貧血基因檢測試劑盒、血液基因組DNA提取試劑盒、HB-2012A 醫用核酸分子雜交儀等。

1.3.2 篩查方法 采用血細胞分析儀對外周血中平均血紅蛋白體積（MCV）、平均血紅蛋白（MCH）、Hb進行測定，初步排除其他因素引發的貧血。

1.3.3 標本采集和制備 抽取篩查陽性、高度疑似地中海貧血兒童的2 ml 外周靜脈血，EDTA-2K 抗凝，應用地中海貧血基因診斷試劑盒提取DNA。

1.3.4 基因診斷 運用跨越斷點 PCR 法（Gap-PCR）擴增α 地中海貧血，運用普通PCR 法擴增β 地中海貧血，擴增程序為95℃、97℃、60℃、72℃溫度下分別預變性15 min、變性50 s、退火60 s、延伸2 min，35 個循環，最后在72℃的溫度下延伸10 min，在導流雜交儀上導流雜交擴增產物及標記有不同突變或缺失類型探針的尼龍膜，依據試劑盒說明書判定結果[3]。

2 結果

2.1 125 例兒童地中海貧血基因篩查結果分析125 例兒童中，正常 50 例，α 地中海貧血 32 例，β 地中海貧血38 例，α、β 復合地中海貧血5 例。見表1。

表1 125 例兒童地中海貧血基因篩查結果分析[例（%）]

2.2 32 例α 地中海貧血患兒的基因型分布情況分析 32 例 α 地中海貧血患兒中，α 雜合子 29 例，占總數的 23.2%，其中 - -SEA/αα 26 例，-α3.7/αα 2 例，-α4.2/αα 1 例；α 點突變 2 例，占總數的 1.6%，其中ααQS/αα 1 例，ααWS/αα 1 例；α 雙重雜合子 1 例，為--SEA/ααCS，占總數的0.8%。見表2。

表2 32 例α 地中海貧血患兒的基因型分布情況分析[例（%）]

2.3 38 例β 地中海貧血患兒的基因型分布情況分析 38 例β 地中海貧血患兒中，IVS-II-654/N 19例，CD41-42/N 12 例，CD17/N 4 例，CD27-28/N 1例，βE/N 1 例，CD41-42/CD27-28 1 例。見表 3。

表3 38 例β 地中海貧血患兒的基因型分布情況分析[例（%）]

2.4 5 例α、β 復合地中海貧血患兒的基因型分布情況分析 5 例 α、β 復合地中海貧血患兒中，--SEA/αα，CD41-42/N 1 例 ；-α3.7/αα，CD17/N 1 例 ；ααCS/αα，IVS-II-654/N1 例；--SEA/αα，IVS-II-654/N1 例；-α3.7/αα，IVS-II-654/N 1 例。見表 4。

表4 5例α、β 復合地中海貧血患兒的基因型分布情況分析[例（%）]

3 討論

地中海貧血是遺傳性貧血病的一種，由于高發于地中海地區，所以命名為地中海貧血。除地中海地區以外，其他地區包括我國南方地區和少數民族也有發病[4～5]。紅細胞內的血紅蛋白是由兩條α 鏈和兩條β 鏈所組成，因此地中海貧血分為兩種，一種叫α-地中海貧血，一種叫β-地中海貧血，α-地中海貧血是因為α 鏈基因發生問題，合成不足而引起；β- 地中海貧血是因為合成β 鏈的基因發生問題，合成β 鏈不足而引起的貧血[6～7]。地中海貧血臨床較易診斷，最簡單的方法為行血紅蛋白電泳檢查，可以看到異常表現，進一步還可行基因篩查，明確地中海貧血具體基因異常表現，達到分子水平的診斷[8]。

本研究結果顯示，125 例兒童中，正常50 例，α地中海貧血 32 例，β 地中海貧血 38 例，α、β 復合地中海貧血5 例，分別占總數的40.0%、25.6%、30.4%、4.0%。32 例 α 地中海貧血患兒中，α 雜合子 29 例，占總數的23.2%，其中- -SEA/αα 26 例，占總數的20.8%。38 例β 地中海貧血患兒中，IVS-II-654/N 19例，占總數的15.2%。5 例α、β 復合地中海貧血患兒中，--SEA/αα，CD41-42/N 1 例，-α3.7/αα，CD17/N 1 例，ααCS/αα，IVS-II-654/N 1 例，- -SEA/αα，IVS-II-654/N 1 例，-α3.7/αα，IVS-II-654/N1 例，均占總數的 0.8%，說明閩東地區兒童地中海貧血的發病率高，其中α地中海貧血基因表型主要為α 雜合子- -SEA/αα，β地中海貧血基因表型主要為IVS-II-654/N。因此，閩東地區應該對篩查兒童人群的力度進行強化，進而有效診斷其基因，篩查出地中海貧血基因攜帶者，并及時采取有效措施。同時，充分重視產前篩查與診斷婚育年齡婦女地中海貧血，避免地中海貧血基因蔓延，切實有效實現優生優育的目標。綜上所述，閩東地區兒童地中海貧血的發病率高，其中α 地中海貧血基因表型主要為 α 雜合子 - -SEA/αα，β 地中海貧血基因表型主要為IVS-II-654/N。