胃癌組織中S100A2的表達及其與臨床病理特征的關系

田偉，高愛紅

(陜西省核工業二一五醫院 a.病理科，b.內科，陜西 咸陽 712000)

胃癌是具有較強異型性的消化道惡性腫瘤，其發生、發展過程復雜，是由多基因、多階段、多因素共同介導的病理過程，疾病初期診出率低，常得不到及時治療，即使在進展期實施放、化療，治療結果也難達到預期[1-2]。隨著生物學研究的不斷深入，研究發現多種癌基因激活、凋亡抑制基因失活在胃癌的發生、進展過程中扮演重要角色，因此探尋并揭露胃癌病理過程中基因蛋白的表達情況，對指導臨床靶基因治療具有重要意義[3-4]。S100鈣結合蛋白A2(S100 calcium binding protein A2，S100A2)是Lee等[5]于1991年發現的一種新型蛋白，屬于抑癌基因，參與了腫瘤細胞的抑制。正常情況下，S100A2在機體正常細胞內低表達，是保障細胞正常增殖、分化的關鍵因素，但在機體某組織細胞發生癌變后，S100A2在組織內的表達顯著減少[6]。研究顯示，S100家族蛋白的表達在諸多癌變組織中呈減少甚至缺失狀態[7]。故考慮S100A2在胃癌組織中可能也存在異常表達，但S100A2相對表達與胃癌患者臨床病理特征是否具有直接聯系尚不清楚，且臨床相關研究也較少。本研究旨在分析胃癌組織中S100A2的表達及其與臨床病理特征的關系，以期為胃癌的診療提供新思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2010年1月至2014年12月陜西省核工業二一五醫院收治的105例胃癌患者的病歷資料，其中男75例、女30例；年齡42～73歲，平均(57±3)歲；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期20例，Ⅲ～Ⅳ期85例；淋巴結轉移63例，無淋巴結轉移42例；病灶直徑<5 cm 36例，≥5 cm 69例。納入標準：①經臨床病理組織確診為胃癌；②患者均接受手術治療，且手術均順利進行；③預計生存時間≥6個月；④胃癌患者病歷資料無缺失，且均有組織切片封存。排除標準：①合并其他部位惡病質的患者；②術前接受放、化療的患者。本研究經陜西省核工業二一五醫院醫學倫理委員會批準，患者及家屬均簽署了知情同意書。

1.2標本采集 所有組織標本均來源于術中切除組織，其中胃癌標本均采自胃癌原發病灶處，癌旁組織來源于距離胃癌原發病灶5 cm的胃壁組織，正常胃組織來源于距離胃癌原發病灶5 cm外的胃壁組織，且經病理學檢查為正常胃黏膜組織。所有組織來源均確保在術中離體30 min內完成取材，在此過程中應用的醫療器械、標本管均經去RNA酶水浸泡后使用。

1.3方法

1.3.1標本處理 所有標本均使用10%甲醛溶液固定、常規脫水、包埋(石蠟)、切片(厚度均為4 μm)、染色(蘇木精-伊紅、免疫組織化學染色液)，利用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶法對S100A2進行免疫組織化學染色。

1.3.2儀器及試劑 鼠抗人S100A2抗體(批號：20091225/20111223/20131218)由英國Lab Vision & NEOMARKERS公司生產，兔抗人reprimo抗體(批號：20091221/20111214/20131220)由武漢博士德生物技術公司生產，鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶試劑盒(批號：20091205/20111211/20131123)由福州邁新生物技術公司生產。包埋機(型號：HistoCore Arcadia H)、脫水機(型號：LP13-RZ6)、染色機(型號：HRS-18C)均由日本Olympus公司生產，光學顯微鏡(型號：SH11/YF-9)由日本Olympus公司生產。所有操作均嚴格遵循說明書進行，且在嚴格質量控制下完成。

1.3.3判定標準 參照Matsubara等[8]的免疫組織化學結果判定標準，選取陽性對照：已知的陽性玻片，陰性對照：磷酸鹽緩沖液代替一抗。具體判定方法為：細胞核或細胞核與細胞質之間有棕黃色顆粒視為S100A2陽性表達。每個玻片隨機選取10個高倍(×200)視野，可根據陽性表達的細胞占比分級，-：視野內未見著色細胞或胞質著色但視野中細胞核著色數量≤1；+：著色淺或陽性著色細胞占比<1/4；++：可見著色細胞深度適宜或陽性著色細胞占比1/4～1/2；+++：視野內著色深或著色細胞占比>1/2。本研究將+～+++均視為陽性，-為陰性。

1.4統計學方法 采用SPSS 23.0統計學軟件進行數據處理，計數資料比較采用χ2檢驗，等級資料比較采用秩和檢驗，相關性采用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1各組織中S100A2的表達情況 正常胃黏膜組織S100A2的陽性表達率為100%(105/105)，癌旁組織為92.38%(97/105)，癌組織為75.24%(79/105)，各組S100A2的陽性表達率比較差異有統計學意義(χ2=79.887，P<0.001)，其中癌組織S100A2的陽性表達率低于癌旁組織、正常胃黏膜組織(χ2=11.370，P<0.001；χ2=29.674，P<0.001)，癌旁組織S100A2的陽性表達率低于正常胃黏膜組織(χ2=6.368，P<0.001)。各組織中S100A2的表達分級比較差異有統計學意義(Z=63.009，P<0.001)，其中癌組織與癌旁組織、正常胃黏膜組織的S100A2表達分級比較差異有統計學意義(Z=6.380，P<0.001；Z=5.434，P<0.001)，癌旁組織與正常胃黏膜組織的S100A2表達分級比較差異有統計學意義(Z=2.877，P=0.004)。見表1、圖1。

表1 各組織中S100A2的表達情況 (例,n=105)

2.2S100A2表達情況與胃癌患者臨床病理特征的關系 不同性別、年齡、病灶直徑、浸潤深度胃癌患者的S100A2表達比較差異無統計學意義(P>0.05)，TNM分期Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ～Ⅳ期，病灶組織中高分化與低分化、未分化，侵犯脈管與未侵犯脈管，未發生淋巴結轉移與淋巴結轉移的S100A2表達分級比較差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。見表2。

2.3S100A2表達與胃癌患者臨床病理特征的相關性分析 Spearman等級相關分析結果顯示，S100A2表達與胃癌患者的TNM分期、侵犯脈管及淋巴結轉移均呈負相關(r=-0.246，P=0.011；r=-0.424,P<0.001;r=-0.210，P=0.032)，與分化程度呈正相關(r=0.518，P<0.001)。

表2 S100A2表達情況與胃癌患者臨床病理特征的關系 (例)

3 討 論

胃癌的發生與進展是由多基因、多因素共同作用造成的細胞增殖失控與分化受阻等異常積累的過程[9]。在胃黏膜上皮發生癌變的通路中，抑癌基因與癌基因占主要地位，同時也是介導細胞生長、分化過程的關鍵[10]。其中，抑癌基因在介導細胞增殖、分化過程中主要發揮負性調節作用，能抑制組織內癌變細胞的生長；當抑癌基因發生突變、缺失、失活時，正常組織細胞不斷向惡性轉變，抑癌基因活性的丟失現已被證實是誘發惡性腫瘤疾病發生、發展的重要原因之一[11-12]。推測這種抑癌基因的失活也可能與胃癌的發生發展有關，因此及時探尋胃癌抑癌相關基因的表達情況，明確胃癌抑癌基因與臨床特征之間的關系，對開發胃癌特異性診斷技術、開辟胃癌新療法具有重要意義。

S100A2屬于S100家族，S100家族中各成員蛋白均屬于鈣結合蛋白，各蛋白均由兩個EF-手型結構構成，EF-手型結構是由氨基酸組成的環狀結構，與鈣離子的親和力相對較好[13]。而鈣離子已被證實可調控機體肌肉收縮、細胞增殖、分化與轉錄等細胞生物學過程，同時還與某些惡病質的發生、進展密不可分，這也是鈣離子作為抑制劑的重要體現，鈣離子抑制劑在癌變組織細胞的生長、轉移中具有顯著的抑制作用[14-15]。本研究結果顯示，癌組織S100A2的陽性表達率低于癌旁組織、正常胃黏膜組織，胃癌組織中的S100A2低表達可能提示S100A2的抑癌作用顯著，蛋白的失活有可能參與腫瘤細胞的生長、運動、凋亡。其原因可能為：①S100A2陽性表達率較高時，S100A2與鈣離子結合率高，血清中游離的鈣離子濃度隨之降低，游離的鈣離子顯著抑制了癌變細胞的增殖、分化，最終延緩或抑制組織癌變過程[16-17]。②S100A2陽性表達率降低時，抑制細胞增殖的作用削弱，促凋亡作用也隨之削弱，為腫瘤細胞大量增殖、分化創造條件，加速胃癌進展，導致胃癌患者預后難達理想效果[18-19]。

已知S100A2的表達情況與胃癌疾病進展過程密不可分，但其表達是否與胃癌的臨床特征也存在某種必然聯系尚不清楚。本研究結果顯示，S100A2表達情況與胃癌患者的TNM分期、侵犯脈管及淋巴結轉移均呈負相關，與分化程度呈正相關，進一步證實了S100A2在胃癌中的檢測價值。分析原因可能為：①癌變細胞運動能力增強是促進癌變組織發生轉移的重要因素，也是必要前提。S100A2與非骨骼肌球蛋白相互作用，增強肌動蛋白細絲流動能力，改變癌變細胞結構，促進其運動，繼而增強腫瘤的遠處轉移能力[17]。②癌變細胞在分化、轉移過程中會造成諸多蛋白酶的改變，基質金屬蛋白酶在癌變細胞轉移、侵襲過程中發揮重要作用，能夠有效降解癌變細胞外基質，并幫助其重塑；而S100A2通過介導基質金屬蛋白酶合成、分泌，間接促進腫瘤細胞的轉移、侵襲[20]。③S100A2具有顯著的抑癌作用，當S100A2陽性表達下調時，抑癌作用也隨之減弱。因此，臨床可考慮將S100A2表達情況作為評估臨床胃癌患者病情進展的生物學指標。但本研究納入樣本數量較少，缺乏臨床論據，仍需更多試驗加以驗證。

綜上所述，胃癌組織中S100A2呈低表達可能提示胃癌TNM分期高、分化程度低、淋巴結轉移等不良臨床特征，由此考慮早期檢測胃癌患者的S100A2表達來作為患者病理特征評估的輔助手段，并指導臨床相關治療方案的制訂。