2018—2019年汨羅市豬群豬繁殖與呼吸綜合征血清抗體及病原學檢測與分析

戴正強

（湖南省汨羅市畜牧水產局，湖南 汨羅 414400）

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）又稱豬藍耳病，該病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）感染所引起的一種高度接觸性傳染病，其中繁殖母豬感染該病主要表現為流產、早產或死胎等繁殖障礙疾病，仔豬則出現呼吸困難、高熱甚至神經癥狀等，并伴隨高死亡率，給我國養豬業造成巨大的經濟損失[1-2]。

PRRSV可通過空氣、水源和飼料等感染健康豬群，也可以通過胎盤垂直傳播給仔豬。目前我國已經將PRRS納入強制免疫計劃，雖然在一定程度上抑制了PRRS的流行與傳播，但近年來湖南省仍然有豬場發生PRRS疫情，給當地養殖場（戶）造成較大的經濟損失[3-4]。本研究于2018—2019年對汨羅市豬群PRRS血清學和病原學進行檢測與數據歸納，旨在為該地區PRRS的防控提供數據支持。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

本研究于2018年1月至2019年12月從汨羅市部分地區隨機采集豬血清樣品1 200份，其中2018年和2019年分別收集樣品640份和560份。采用頸靜脈（成年豬）或前腔靜脈（仔豬和保育豬）方式進行采血，將血液樣品于室溫靜置6～8 h，吸取上清液后置于新的離心管內，分別標記后保存于-20 ℃，待檢。

對部分豬場的發病豬群進行剖檢，取病變組織（如肺臟、腎臟、淋巴結等）樣品共107份，將樣品分別標記后低溫送至汨羅市畜牧水產局，保存于-20 ℃，待檢。

1.2 檢測方法

采用間接ELISA法（酶聯免疫吸附試驗）檢測被調查血清樣品中PRRSV抗體，其中試劑盒購自于美國IDEXX公司，操作步驟及判定標準均按照試劑盒提供說明書進行；采用Trizol法提取組織RNA，對RNA進行反轉錄后生成cDNA，采用Real time-PCR法對組織樣品中PRRSV核酸進行檢測，并對陽性樣品PRRSV毒株的Nsp2基因部分序列進行擴增與分析，其引物序列、擴增體系及條件均如文獻[5]所示。

2 調查結果

2.1 2018—2019年汨羅市部分地區PRRSV血清抗體檢測結果

本研究采用間接ELISA法對汨羅市部分豬場共1 200份血清樣品檢測PRRS抗體水平，所有豬場均已經免疫接種PRRSV滅活或弱毒疫苗。由表1可知，共有1 108份樣品為PRRS抗體陽性，平均陽性率為92.33%，其中2018年和2019年調查樣品PRRS陽性率分別為89.53%和95.54%。此外，本試驗在2018年調查的640份樣品中來源于小型養殖場和大型養殖場，樣品數量分別為224份和416份，調查結果如表2所示，小型養殖場和大型養殖場血清樣品PRRS抗體平均陽性率分別為80.80%和94.23%。

表1 不同年份汨羅市部分地區 PRRS 血清抗體檢測結果

表2 2018 年不同養殖規模豬場 PRRS 血清抗體檢測結果

2.2 2018—2019年汨羅市發病豬群PRRSV感染情況調查結果

為初步調查汨羅市發病豬群PRRSV感染情況，本試驗于2018和2019年從汨羅市被調查豬場收集發病或病死豬組織樣品數量分別為59份和48份，合計107份，采用Real time-PCR法對樣品中PRRSV核酸進行檢測。結果發現，107份樣品中共有9份檢測為PRRSV陽性，平均陽性率為8.41%，其中2018年收集發病豬群組織樣品PRRSV陽性率（10.17%）高于2019年（6.25%），見表3。

表3 2018—2019 年汨羅市發病豬群 PRRSV 感染情況調查結果

2.3 汨羅市PRRSV流行毒株Nsp2基因部分序列分析結果

為分析本次試驗獲得的9個汨羅市PRRSV流行毒株的基因型與變異情況，采用RT-PCR法對毒株的Nsp2基因部分序列進行擴增、測序，并將測序獲得的序列在GenBank上進行Blast序列比對與分析。結果發現，9個PRRSV毒株Nsp2基因部分序列擴增片段大小基本一致，為422～437 bp，通過在GenBank中數據庫進行比對，發現其中7個PRRSV毒株與近年來國內流行的變異株（如JXA-1株）Nsp2基因核苷酸部分序列同源性最高，為98.7%～99.5%，序列比對發現部分毒株存在堿基插入或缺失現象；而其它2個PRRSV毒株與國內2006年以前流行的傳統毒株（如CH-1a株）同源性最高，為99.2%～99.7%。

3 討論

豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）在我國豬場流行廣泛，一度給我國養殖業造成巨大的經濟損失。但由于PRRSV屬于RNA病毒，其基因組具有易突變和重組的特點，導致PRRSV在我國基因型較為復雜，基于不同基因型毒株研發的疫苗交叉保護力有限，這為該病的防控帶來了很大的挑戰。近年來，我省豬場暴發PRRS的案例很多，且在筆者多年疫病診斷與防控過程中也發現部分豬場即使免疫接種PRRSV疫苗后仍然暴發PRRS，并導致嚴重的經濟損失。

為了對汨羅市PRRS進行有效防控，并初步分析流行毒株基因變異情況，筆者于2018年1月至2019年12月對汨羅市部分豬場進行PRRSV血清抗體和病原檢測。結果發現，2018年和2019年被調查的血清樣品PRRSV抗體陽性率分別為89.53%和95.54%，符合農業部制定的標準（≥70%），說明疫苗的免疫接種使豬群獲得較高的免疫抗體水平；受非洲豬瘟的影響，我們僅比較2018年小型養殖場和大型養豬場豬群PRRS血清抗體水平，發現其陽性率存在一定差異，由于小型養殖場可能存在疫苗接種方式不規范或漏打的可能性，導致其陽性率稍低于大型養殖場。

大量研究結果表明，PRRSV基因組中Nsp2基因存在高變異的特點，通過知曉Nsp2基因序列變異情況可以初步分析PRRSV毒株遺傳變異情況和具體基因型特點，為該病的防控選擇更加有效的疫苗[5-6]。為此，本試驗首先從汨羅市以上被調查豬場采集?。ㄋ溃┴i組織樣品107份，采用RT-PCR法檢測組織基因組中是否存在PRRSV核酸，結果發現共9份樣品檢測為PRRSV陽性，其平均陽性率為8.41%。值得注意的是，這些被調查豬場均已經免疫接種過相應疫苗，且已經產生了較好的保護率，為了進一步確定此類豬場出現PRRS疫情的原因，我們對以上9株PRRSV毒株的Nsp2基因部分序列進行擴增與分析，發現大部分毒株屬于變異株，其它則為傳統株。我們對以上豬場回訪發現，部分豬場免疫接種的是基于變異株研發的疫苗，而有少數豬場仍然免疫接種基于傳統株研發的疫苗，這可能是導致部分豬場雖然免疫接種PRRSV疫苗，但仍然暴發疫情的原因。因此，應該定期對豬場PRRS進行病原學監測，分析其基因型，以便選擇更加有效的疫苗進行防控。