重慶市部分豬場糞污抗生素測定分析

何道領，韋藝媛，王 震

（1.重慶市畜牧技術推廣總站，重慶 渝北 401121；2.重慶市生豬產業技術體系創新團隊，渝北 401121）

當前抗生素被廣泛用于畜禽養殖的疾病治療，但大部分抗生素是不能被機體完全吸收，最終會以原形或者代謝產物的形式在糞尿中被排出體外，若處理不當，會導致殘留抗生素進入土壤、水體，成為引起環境破壞及抗性基因傳播的潛在風險。

線性化誤差模型進行結構誤差辨識時，采集數據多于非線性化誤差模型，即線性化誤差模型還需采集各主動移動副上指定點運動前后空間的位置坐標，其誤差辨識所需的輸入數據多于非線性化誤差模型結構誤差辨識所需的數據。線性化誤差模型將約束方程簡化、變形，組成關于主動移動副運動量、結構誤差、托架位姿誤差的關系表達式，對其中的結構誤差采用最小二乘法進行求解。該方式的最小二乘不需要給出迭代初值，適用于未知結構誤差值范圍的情況，但需要結合輔助測量。下面對線性化誤差模型進行詳細介紹。

本試驗通過采集重慶市11個規模生豬養殖場，共21個樣品（每個豬場分別采集糞便和污水樣，其中1個糞便樣因運輸途中受污染，未納入檢測）分別對其中的土霉素、金霉素、強力霉素和四環素4種抗生素殘留情況進行檢測，初步了解當前豬場糞污中抗生素含量狀況。

1 材料與方法

1.1 采樣點狀況

本試驗主要針對重慶市部分年出欄200～2 000頭的生豬規模養殖場，通過分別采集養殖場處理后的豬糞便（即堆置發酵準備施肥前的糞樣，后同）和污水（即經沼氣池等處理后貯存用于農田施肥的污水樣，后同），分別對其中的土霉素、金霉素、強力霉素和四環素進行抗生素檢測分析。

針對全國現在仍有近500萬水庫移民貧困人口，全國農村移民人均純收入僅是全國農民人均純收入的2/3，水庫移民收入水平總體與當地農村存在較大差距的實際，各級黨委政府及有關部門要切實落實責任。

筆者建議在“兩票制”政策執行過程中，一是要加強對藥品出廠價的監管。由于生產企業的“高開票”策略從源頭上就會導致藥價的居高不下，故在考慮到生產企業合理的研發成本、生產成本、銷售成本、利潤等的基礎上，政府部門需對價格異常上漲的藥品進行監管，必要時可以開展成本核算。二是要加強對藥品配送企業供應鏈的管理。雖然“兩票制”政策的實施能壓縮流通環節，但基于國家及云南省“兩票制”文件對“兩票制”的界定，可能導致當前“兩票制”政策對藥品價格、配送流程及藥品質量等產生的積極影響尚不顯著。故對集團型生產、流通企業的銷售及內部調撥行為加強監管非常必要。

1.2 樣品采集

液體：將糞污樣品過濾后，量取1 mL污水樣品，其余步驟同上。

對11個污水樣品中的四環素類抗生素進行檢測，其中四環素檢出率最高，檢出率為100%，4種抗生素的檢出率大小依次為：四環素＞土霉素＞強力霉素＞金霉素。污水中四環素類抗生素檢測率見表4。4類抗生素中金霉素檢出的均值含量最高，為0.90 mg/L，最高為2.72 mg/L。污水檢測樣本中4種抗生素總含量范圍在3.35～0.49 mg/L，其平均值為1.51 mg/L。

老婦人坐下來，她穿著淡粉色的及地長裙，唯一露在衣服外的手腕，舒展出平滑曲線，用大拇指和食指輕輕捏住鍍金的杯柄，緩緩地把杯子送到嘴邊小口慢飲。她邊喝邊平視著我，面帶禮節性的微笑，但眼神是犀利的。她說，我喜歡喝黑咖啡。你呢？中國茶？

1.3 測定方法

采用GB/T 32951—2016有機肥料中土霉素、四環素、金霉素與強力霉素的含量測定-高效液相色譜法。

具體測定洗脫條件見表1。

1.3.1 樣品提取 固體：精確稱取固體糞便1 g，精確至小數點后4位。加入5 mL EDTA-mcllvaine緩沖液，渦旋30 s，超聲10 min，離心5 min，4 000 r/min，取上清液。以上步驟重復2次，合并上清液。

2019年5月18日樣品收集完畢，2019年8月樣品全部檢測完成。

豬糞樣品采集：采用5點采樣法，即分散采集豬糞5個點，每點定量取0.1 kg，放到干凈的塑料布上，將豬糞混勻，采用四分法剔除多余樣品，即將混勻的豬糞分成4份，留取對角的2份，最終取樣品0.2 kg，用自封袋裝，貼內標簽，再外套一個自封袋，貼外標簽，用不干膠封自封口，預防泄漏，帶回備用，并填寫豬場具體情況表。

1.3.2 抗生素富集 HLB活化：用5 mL甲醇，5 mL蒸餾水一次通過HLB小柱，流速為2 mL/min，然后將提取液過柱，流速1 mL/min再依次用5 mL水，5 mL甲醇-水淋洗小柱，然后全部流出液，減壓抽干5 min，用5 mL草酸-甲醇洗脫目標物，洗脫液用飽和氫氧化鈉（NaOH）溶液調節pH至5～6，置于氮吹儀吹至近干，用1 mL水溶解殘渣，過0.22 μm鋁膜，待測。

檢驗檢測中心作為政府職能部門，必須要采取科學、公正、高效的現代化方式，為科學監管、依法行政提供重要的技術保障，全面推動食品安全檢驗檢測基礎設施和體系建設，為保障一方食品質量安全提供有力的技術支撐[1]。

EDTA：0.05 mol/L EDTA+0.6 mol/L磷酸二氫鈉+0.08 mol/L檸檬酸，pH 4±0.05。

1.3.4 試劑 草酸溶液：1.26 g草酸稀釋定容至1 000 mL水中，備用。

草酸-甲醇0.01 mol/L：稱取0.13 g草酸，用甲醇溶解，定容至100 mL。

甲醇-水（1+19）：量取5 mL甲醇與95 mL水混勻。

1.3.3 標品 準確稱取一定量的土霉素、四環素、金霉素和強力霉素，用甲醇定容并按需稀釋進樣，建立標曲。

1.3.5 色譜法 儀器：HPLC-1100，色譜柱：0.5 μm，4.6 mm×250 mm。

流速：1.0 mL/min，柱溫：30 ℃，波長：355 nm，進樣量20 μL。

我國資本市場中CPA審計尋租活動的產生有多種條件，本文將其分為充分條件和必要條件，其中充分條件又分為內在條件和外在條件。具體表現為：

根據盛放液態銀的澆鑄包的具體情況，設置一個旋轉機構來承接澆鑄包，通過旋轉機構帶動澆鑄包旋轉從而實現澆鑄；設置一個固定機架，一個承放澆鑄包的支架，再設置兩個擺動油缸，構成一個四連桿機構驅動支架旋轉，從而帶動澆鑄包旋轉；支架上設置特殊的結構以便可以對澆鑄包實行簡單快速固定［4］。

表1 流動相及梯度洗脫條件 %

1.4 數據質量控制

本次樣品設定平行樣，每5個樣品設定一個平行樣，樣品重復3次。在重復性條件下，兩次獨立測試結果的絕對差值不超過重復性限r，有機肥中土霉素、四環素、金霉素、強力霉素濃度范圍及重現性方程見表2。

表2 有機肥料中土霉素、四環素、金霉素和強力霉素的重復性和再現性方程

1.5 數據分析方法

采用Excel 2007對數據基礎分析；數據結果參照肥料分級要求及標準（表3）。

表3 農田級肥料和生態肥料要求

2 結果分析

2.1 污水抗生素檢測情況

污水采樣：每個豬場在儲存池4個不同點取樣，取樣前將污水攪勻，用干凈塑料勺子取樣，用大漏斗倒入干凈的1 000 mL廣口塑料瓶中，取樣2瓶，用不干膠密封瓶蓋和瓶口，瓶身貼標簽。

表4 污水中四環素類抗生素檢測情況

2.2 糞便抗生素檢測情況

糞便中的四環素類抗生素含量普遍高于污水，但檢出率未達到100%，最高為90%（糞便四環素類抗生素檢測率見表5），檢出率依次為：土霉素＞四環素＞強力霉素=金霉素。4類抗生素中強力霉素檢出的均值含量最高，為13.13 mg/kg，最大值為25.15 mg/kg。10個檢測樣本中4種抗生素含量范圍在58.85～4.02 mg/kg，其平均值為20.75 mg/kg。

表5 糞便中四環素類抗生素檢測情況

3 結果討論

四環素類藥物（tetracyclines, TCs）為廣譜抑菌劑，對革蘭氏陰性菌、陽性菌及螺旋體等均有較強的抑制作用，在畜禽養殖中運用較為普遍。據報道，韓國和澳大利亞等國在畜禽養殖業使用的抗生素分別達1 278 t和932 t[1]，全國2016年度獸用抗菌藥（含抗生素）原料藥產量為5.47萬t，銷量為5.04萬t，相較于2015年使用總量9.27萬t而言[2]，已經取得重大改善，但豬糞中的抗生素種類都有不同程度的殘留（表6），其中以北京2005年度豬糞調查結果最為嚴重，豬糞中土霉素檢測最高值為134.75 mg/kg、四環素為78.57 mg/kg、金霉素121.78 mg/kg。

表6 畜禽糞便中四環素類抗生素殘留量 [3]

Ling等[7]對山東、浙江等八省的養殖廠進行采樣檢測，發現雞糞中恩諾沙星和諾氟沙星最高濃度分別為1 421 mg/kg、225 mg/kg，高于國內報道的最高濃度；Pan等[8]從山東省21個養殖廠采集了126份豬糞樣品發現，四環素類檢出率高達84.9%～96.8%，其中殘留的金霉素最大濃度為764.4 mg/kg。Zhang等[9]分析了從山東等8個省份采集的33份畜禽糞便樣品和17份堆肥樣品中抗生素含量發現，土霉素是最主要的抗生素，山東壽光的樣品中檢測出最高濃度達到417 mg/kg。

2017年國家工業和信息化部科技司公示了《肥料分級及要求》強制性國家標準，標準將肥料分為兩種類型農田級和生態級（表3）?！斗柿戏旨壖耙蟆分修r田級肥料對抗生素未做限定，但是對生態級肥料限定標準較高，總量不超過1.0 mg/kg。本次檢測中污水中四環素類抗生素均值為1.51 mg/L，豬糞中抗生素總和為20.75 mg/kg，因此作為一般的農田肥料，本次檢測的養殖場處理后的糞肥作為農田肥料不存在爭議，但對于高附加值的生態級肥料抗生素限量標準，畜禽處理后的糞污中的抗生素，特別是處理后的糞便中的抗生素含量不容樂觀。

甲狀腺癌(thyroid carcinoma,TC)是最常見的甲狀腺惡性腫瘤，約占全身惡性腫瘤的1%。近年來，在全世界范圍內其發病率顯著上升。甲狀腺乳頭狀癌(thyroid papillary carcinoma,TPC)約占成人甲狀腺癌的60%和兒童甲狀腺癌的全部。研究報道，1975年至今，甲狀腺癌發病率增長了2倍，其中，TPC發病率較前上升了3倍，男女比例為1∶4[3]。

4 對策建議

4.1 前端減量

畜禽糞便中的抗生素主要來源于畜禽在飼養中采食含抗生素的飼料添加劑和抗生素類獸藥的注射，為減少抗生素的殘留，最有效的方式是源頭減量，一方面是開展“無抗”養殖，開發綠色飼料添加劑、微生物制劑等，替代傳統抗生素添加，減少畜禽抗生素的攝入量，達到后端減量的目的；另一方面是開展標準化的健康養殖，通過標準化、規范化的養殖，營造安全健康的養殖環境，降低畜禽患病率，減少抗生素類獸藥的使用。

4.2 后端處理

根據收集到的樣品外觀性質判斷，部分生豬養殖場的糞便在堆肥發酵時多采用的是自然堆積發酵，由于堆積發酵時間短，為添加發酵菌種和發酵輔料，存在發酵溫度不夠、發酵不充分的情況，這可能是糞污中的四環素類抗生素檢測率較高的一個重要原因。通常情況下，好氧發酵過程中堆體溫度在55 ℃以上可維持5 d，堆體最高溫度可達60～70 ℃，在溫度、微生物、通氣狀況以及堆肥時間的綜合作用下，可以有效降解或者去除糞污中的抗生素。Wu等[10]發現堆體中金霉素、土霉素、四環素在堆肥1周后均能降解70%以上；此外不同抗生素的降解難度不同，相較于磺胺類和氟喹諾酮類抗生素，四環素類抗生素通常更易在堆肥過程中降解，這可能是由于磺胺類和氟喹諾酮類是人工合成藥物，而四環素類是微生物分泌的天然抗生素，微生物更容易分解利用[11]；Selvam等[12]針對好氧發酵過程中金霉素、環丙沙星的去除開展了研究，結果顯示，金霉素在堆體高溫階段的前7 d去除了70%，直至21 d時完全降解。因此對于抗生素含量較高的固體糞便可以通過充分發酵降解，以達到去除抗生素的目的。