LADA患者維生素D3水平與胰島細胞自身抗體和炎癥指標的相關性研究

李德琴，張 瑞，耿麗萍

青海省人民醫院醫學檢驗科，青海西寧 810003

成人隱匿性自身免疫糖尿病(LADA)與1型糖尿病(T1DM)類似，均為T細胞介導胰島β細胞受自身免疫細胞攻擊而被選擇性地破壞，導致胰島β細胞受損的一種自身免疫性疾病[1]。一直以來，糖尿病引發的炎癥和治療方法是醫學研究的熱點。以往研究表明，T1DM、2型糖尿病(T2DM)患者體內存在不同程度的炎癥狀態，25羥維生素D3[25(OH)D3]可以降低T1DM、T2DM發病風險，調節體液免疫應答介導的胰島自身免疫反應[2]，降低胰島細胞自身抗體陽性率和滴度。但25(OH)D3能否調節LADA患者體內的炎性反應，減輕胰島細胞自身免疫損害的研究較少見報道。本研究收集了臨床診斷為LADA的患者，探討其25(OH)D3水平與炎性反應和胰島細胞自身抗體之間關系，以期為揭示LADA的發病機制和指導臨床治療提供相關依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院2016年8月至2019年12月臨床診斷為LADA的患者67例，其中男32例，女35例。診斷標準：根據中華醫學會糖尿病學分會《關于成人隱匿性自身免疫糖尿病(LADA)診療的共識》[3]，臨床診斷為糖尿病并具備以下3點，(1)胰島細胞自身抗體陽性；(2)年齡≥18歲；(3)診斷糖尿病后至少半年不依賴胰島素治療。排除T1DM、T2DM、慢性感染、自身免疫性疾病、腫瘤等患者。符合上述條件即可納為研究對象。根據25(OH)D3水平將研究對象分為3組：25(OH)D3≥30 ng/mL為充足組；25(OH)D3在20～<30 ng/mL為不足組；25(OH)D3<20 ng/mL為缺乏組。充足組22例中男10例、女12例，年齡(34.55±6.47)歲。不足組16例中男8例、女8例，年齡(36.25±7.44)歲；缺乏組29例中男14例、女15例，年齡(38.75±8.25)歲。各組間性別、年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經本院倫理委員會審核通過，所有研究對象均知情同意。

1.2儀器與試劑 主要包括Sysmex-XN2000血常規分析儀，貝克曼AU5831生化分析儀，羅氏i2000SR電化學發光儀及其配套試劑，深圳亞輝龍公司生產的糖尿病自身抗體免疫印跡檢測試劑盒等。

1.3方法 采集患者EDTA-K2抗凝血1～2 mL，采用Sysmex-XN2000血常規分析儀檢測患者血常規，收集白細胞計數(WBC)、淋巴細胞計數、中性粒細胞計數結果。另取普通干管采集患者空腹血液，3 000 r/min離心10 min后留取血清，采用糖尿病自身抗體免疫印跡檢測試劑盒檢測胰島細胞自身抗體[谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)、鋅轉運蛋白8抗體(ZnT-8A)、蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗體(IA-2A)、胰島細胞抗體(ICA)、胰島素自身抗體(IAA)]水平。C反應蛋白(CRP)、血清淀粉樣蛋白A(SAA)采用貝克曼AU5831生化分析儀進行檢測，并做好相關質控。25(OH)D3按照羅氏25(OH)D3檢測試劑盒要求進行檢測，并設立相應對照。

2 結 果

2.1各組炎癥指標水平對比 與正常參考值相比，3組患者WBC、淋巴細胞計數、中性粒細胞計數、SAA水平均在正常參考值范圍內，CRP水平均有不同程度升高。缺乏組中性粒細胞計數、CRP水平高于充足組，不足組中性粒細胞計數高于充足組，差異均有統計學意義(P<0.05)，其余檢測項目在3組間差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組炎癥指標水平比較

2.225(OH)D3水平與炎癥指標的相關性分析 LADA患者25(OH)D3水平與WBC、中性粒細胞計數、CRP呈一定程度的負相關(r=-0.494、-0.530、-0.290，P<0.05)，與淋巴細胞計數、SAA無相關性(r=-0.167、-0.078，P>0.05)。

2.3各組胰島細胞自身抗體陽性情況分析 67例LADA患者中GADA陽性38例，陽性率為56.72%，ZnT-8A陽性36例，陽性率為53.73%，IA-2A陽性15例，陽性率為22.39%，ICA陽性11例，陽性率為16.42%，IAA陽性14例，陽性率為20.90%。5種胰島細胞自身抗體陽性率GADA>ZnT-8A>IA-2A>IAA>ICA。GADA陽性(38例)或GADA陰性且ZnT-8A陽性(16例)患者總計54例，占80.60%。各組間胰島自身抗體陽性率差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組胰島細胞自身抗體陽性情況[n(%)]

2.4各組1種或≥2種胰島細胞自身抗體陽性構成比較 充足組1種胰島細胞自身抗體陽性的比例高于缺乏組，≥2種胰島細胞自身抗體陽性的比例低于缺乏組，差異有統計學意義(P<0.05)；不足組與缺乏組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 各組1種或≥2種胰島細胞自身抗體陽性構成比較[n(%)]

3 討 論

LADA是介于T1DM和T2DM之間的一種特殊類型糖尿病，由于其在免疫學、病理學、代謝、臨床治療等方面與T1DM和T2DM存在著諸多相似與不同，被認為是處于T1DM和T2DM之間的“灰色地帶”[4]。由于LADA發病人群為成人，早期臨床表現與T2DM相似，因此臨床常把LADA誤診為T2DM，致使患者胰島β細胞功能持續下降，衰退速度加快[5]。針對LADA發病機制的探討，免疫炎癥學說備受關注。以往研究表明，25(OH)D3的缺乏可以引起T細胞介導的免疫反應，Th1/Th2的平衡被破壞，胰島細胞抗原特異性的Th1表達增強，導致LADA的發生與發展[6]。CRP、SAA均為急性時相反應蛋白，可于各種急性炎癥、組織損傷、心肌梗死、手術創傷、放射性損傷等發生后數小時迅速升高。本研究旨在分析不同25(OH)D3水平的LADA患者胰島細胞自身抗體和炎癥指標的差異，以期為LADA的治療提供相關依據。

本研究分析了2016年8月至2019年12月來本院就診的LADA患者67例，根據25(OH)D3水平分為3組，檢測所有研究對象血常規、CRP、SAA、胰島細胞自身抗體水平。結果顯示，各組患者CRP水平均超過正常參考值上限，說明體內均存在一定程度的炎性反應。CRP不僅反映組織感染和創傷，同時其水平在自身免疫性疾病中亦有不同程度升高。SAA是由肝細胞產生后被分泌到血清中的一種急性時相蛋白[7]，LADA患者中未見明顯增高。缺乏組的中性粒細胞計數、CRP水平高于充足組，不足組中性粒細胞計數高于充足組，差異均有統計學意義(P<0.05)，說明25(OH)D3水平高的LADA患者體內CRP水平更低，炎性反應水平控制得更好。通過研究25(OH)D3水平與炎癥指標的相關性可知，25(OH)D3水平與WBC、中性粒細胞計數、CRP呈一定程度的負相關(P<0.05)，與淋巴細胞計數、SAA無相關性(P>0.05)。25(OH)D3的免疫調節機制和抗炎機制較為復雜，目前尚未完全闡明，維生素D主要通過1,25二羥維生素D3[1,25(OH)2D3]與其受體結合來發揮生物學效應，人體內很多細胞均有其受體存在，1,25(OH)2D3與T細胞的維生素D受體結合后可改變細胞的表型及功能,增加其免疫耐受性,抑制過激的免疫反應[9]。杜弢[10]的研究結果表明，高水平的CRP似乎并不會增加糖尿病的發病風險，炎癥并不能影響糖尿病的進程，控制炎性反應程度是否能控制糖尿病的進展有待長期的觀察。

胰島細胞自身抗體是一種針對胰島細胞抗原的血清自身抗體的總稱，是糖尿病發病過程中胰島自身免疫反應產生的[11]。GADA是胰島細胞遭受破壞出現最早、持續時間最長、具有特異性的抗體，該抗體陽性反映了內源性胰島素的不足[12]。ZnT-8A是近年新發現的自身抗體，屬于鋅轉運體蛋白，僅在胰島β細胞高表達，ZnT-8A是異常體液免疫應答攻擊胰島β細胞的標志[13]。本研究中5種胰島細胞自身抗體陽性率GADA>ZnT-8A>IA-2A>IAA>ICA，與余淑芳等[14]檢測結果有部分差異，可能與標本來源、檢測方法的不同有關。GADA陽性或GADA陰性且ZnT-8A陽性患者總計54例，占80.60%，進一步證明了ZnT-8A在LADA診斷中的重要作用。3組各類胰島細胞自身抗體陽性率差異無統計學意義(P>0.05)，說明25(OH)D3水平高低不能影響胰島細胞自身抗體類別。LADA患者可產生不止一種胰島細胞自身抗體，部分患者可產生兩種甚至兩種以上抗體。將3組的胰島細胞自身抗體數量分為兩個級別，經統計分析發現，充足組中1種胰島細胞自身抗體陽性的比例高于缺乏組，≥2種胰島細胞自身抗體陽性的比例低于缺乏組，差異均有統計學意義(P<0.05)。這說明25(OH)D3水平較低的LADA患者體內，胰島細胞自身抗體種類越復雜，胰島細胞損傷越嚴重。目前25(OH)D3對糖尿病患者胰島功能的具體作用機制未明，推測可能與抑制炎癥或者免疫調節有關。

綜上所述，充足組中性粒細胞計數、CRP水平均低于缺乏組，1種胰島細胞自身抗體陽性的比例高于缺乏組，≥2種胰島細胞自身抗體陽性的比例低于缺乏組，且25(OH)D3水平與WBC、中性粒細胞計數、CRP呈負相關。如果通過飲食、藥物提高患者25(OH)D3水平，可能會影響LADA患者炎癥因子水平和胰島細胞自身抗體數量，控制胰島細胞炎性反應和減少胰島細胞自身抗體的進一步產生，至于具體的治療效果和治療方案需要大樣本、雙盲、多中心的參與，才能得出科學的結論。