妊娠高血壓綜合征患者MTHFR基因C677T多態性與Hcy及腎功能指標的相關性研究*

何麗梅，李海川，仲偉國，傅啟華，龔 波△

上海市長寧區婦幼保健院:1.檢驗科；2.婦產科，上海 200050；3.上海交通大學醫學院附屬上海兒童醫學中心檢驗科，上海 200127

妊娠高血壓綜合征(簡稱妊高征)是妊娠期女性常見的產科疾病之一。妊高征在我國的發病率為9.4%～10.4%[1]，其導致的孕產婦死亡約占妊娠相關性死亡的10%。5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是葉酸代謝途徑的催化劑，對DNA甲基化和基因調控具有重要作用[2]。研究表明，MTHFR基因C677T突變位于1號染色體(1p36.6)第4外顯子，使第222密碼子處纈氨酸轉化為丙氨酸，可導致血漿葉酸水平下降和同型半胱氨酸(Hcy)水平升高[3]。本研究通過分析MTHFR基因C677T多態性、Hcy以及腎功能指標在妊高征患者中的表達，探討以上指標對妊高征的診斷價值，以期為臨床診療提供更為可靠的依據，改善不良妊娠結局。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年2月至2019年10月在長寧區婦幼保健院產科住院的妊高征患者86例(疾病組)，按中華醫學會婦產科學分會妊娠高血壓疾病學組發布的《妊娠期高血壓疾病診治指南(2012版)》的相關診斷標準[4]，即妊娠20周以后出現的高血壓，收縮壓≥140 mm Hg和(或)舒張壓≥90 mm Hg(2次間隔至少4 h，1 mm Hg=0.133 kPa)，同時排除其他妊娠合并疾病，根據病情輕重程度分為妊娠高血壓組(30例)、輕度子癇前期組(26例)、重度子癇前期組(30例)3個亞組。妊高征患者年齡21～41歲，平均(31.19±3.93)歲；孕周22～41周，平均(35.91±3.93)周。隨機選擇同期到該院產檢的健康妊娠女性(正常妊娠組)200例，年齡20～42歲，平均(29.72±3.34)歲；孕周22～42周，平均(37.18±3.17)周。選擇到該院體檢的健康非妊娠女性(健康對照組)150例，年齡22～39歲，平均(30.32±3.58)歲。所有入選對象均無肝、腎疾病及血栓性疾病，半年內未服用影響凝血功能的相關藥物，均簽署知情同意書。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2方法 囑受試者空腹10 h，采集未抗凝靜脈血4 mL，分離血清后在西門子ADVIA Chemistry XPT儀器上采用酶法進行Hcy、尿酸(UA)、肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)水平檢測，具體操作參照儀器配套試劑盒說明書。采集EDTA-K2抗凝血2 mL收集白細胞層提取DNA，利用Primer Premier 6.0 軟件設計MTHFR C677T基因引物序列：正向引物5′-GTGCTGTGCTGTTGGAAGGT-3′，反向引物5′-TCAGC GAACTCAGCACTCC-3′，從NCBI網站獲取健康人群的基因序列，預期位置：rs1801133；預期序列：TTGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGAG[C/T]CGATTTCA TCATCACGCAGCTTTTC。將DNA標本送上海允晟醫學檢驗所進行基因測序[采用ABI測序儀(3730×1 DNA Analyzer)]，利用Chromas軟件分析測序結果，并與健康人群序列進行比對，找出多態性位點。

2 結 果

2.1不同人群以及不同嚴重程度妊高征患者Hcy、腎功能指標水平比較 與健康對照組、正常妊娠組相比，疾病組Hcy、UA、Cr和BUN水平明顯增高，差異均有統計學意義(P<0.05)。與健康對照組相比，正常妊娠組UA水平增高，Hcy、Cr和BUN水平降低，但差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。與妊娠高血壓組、輕度子癇前期組相比，重度子癇前期組Hcy、UA、Cr和BUN水平明顯增高，差異均有統計學意義(P<0.05)。與妊娠高血壓組相比，輕度子癇前期組Hcy和UA水平增高，差異有統計學意義(P<0.05)，而Cr和BUN水平雖有增高，但差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.2MTHFR基因C677T多態性 利用Chromas軟件分析測序結果，MTHFR基因C677T有3種基因型：CC基因型、CT基因型、TT基因型。對研究人群的基因型分布進行H-W遺傳平衡定律檢驗，送檢的86例妊高征患者的基因型分布符合H-W遺傳平衡定律(χ2=0.109，P=0.947)，標本具有本區域群體代表性，見圖1。

2.33組不同嚴重程度妊高征患者MTHFR C677T基因型及等位基因頻率分布 妊娠高血壓組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組基因型及等位基因分布差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表1 3組人群Hcy、腎功能指標水平比較

表2 3組不同嚴重程度妊高征患者Hcy、腎功能指標水平比較

2.4MTHFR C677T基因型與Hcy和腎功能指標水平的關系 TT基因型患者的Hcy水平明顯高于CC、CT基因型患者，差異有統計學意義(P<0.05)，而CC基因型與CT基因型患者的Hcy水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。此外，3種基因型患者的UA、Cr和BUN水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。通過Spearman相關分析發現，MTHFR C677T基因型與Hcy呈正相關(r=0.418，P<0.05)，與UA、Cr和BUN無相關性(r=-0.111、0.043、-0.042，P>0.05)，見表4。

圖1 MTHFR基因C677T多態性

表3 3組不同嚴重程度妊高征患者MTHFR C677T基因型及等位基因分布頻率[n(%)]

表4 MTHFR C677T 3種不同基因型患者的Hcy、腎功能指標水平比較

3 討 論

正常情況下，孕6～8周時母體血容量開始增加，至孕32～34周時達到高峰，總循環血量增加40%～50%，血液相對稀釋。循環血量的增加致使各重要臟器的灌注量增加，孕晚期子宮動脈的橫斷面積較非孕期增加2～3倍[5]，腎小球濾過率(GFR)和腎血漿流量(ERPF)代償性升高，使孕期血液中的Cr和BUN等水平有一定程度的下降。妊高征是妊娠與血壓升高并存的一組疾病，是孕晚期產科的常見疾病，在孕20周后出現高血壓、水腫和蛋白尿，并且隨著病情的加重，其可導致全身多處臟器受累。全身小動脈痙攣和血液高凝是本病主要的病理改變，可導致機體全身臟器有效血流量減少，腎臟供血下降，GFR與ERPF降低，腎臟代謝UA、Cr和BUN明顯減少。本研究發現，與健康對照組、正常妊娠組相比，疾病組UA、Cr及BUN水平均明顯增高；與妊娠高血壓組、輕度子癇前期組相比，重度子癇前期組UA、Cr和BUN水平均明顯增高(P<0.05)。由此可見，隨著病情進展，腎臟失去代償功能，血液中的腎功能指標水平明顯增加，這表明血清UA、Cr及BUN能夠作為妊高征的臨床輔助診斷指標，以及成為判斷疾病嚴重程度的一類重要參數。

MTHFR是葉酸轉運和代謝的關鍵酶。MTHFR基因C677T位點和A1298C位點的多態性會造成MTHFR活性降低，造成葉酸代謝異常，并且葉酸水平下降會使Hcy水平升高。研究發現，Hcy可以促進氧自由基的生成，不僅激活血小板的黏附和聚集，損傷血管內皮細胞，還能刺激血管平滑肌細胞增殖[6]，使血管內膠原成分增加，血管壁增厚，破壞血管順應性。此外，Hcy還可抑制胱硫醚γ裂解酶活性，減少內源性血管舒張劑硫化氫的生成[7]，這些因素可促進妊高征的形成。有研究報道，MTHFR基因A1298C位點[8]多態性與Hcy無相關性。本研究從MTHFR基因C677T位點入手，發現MTHFR基因C677T多態性與UA、Cr及BUN無相關性(P>0.05)，與Hcy有一定的相關性(P<0.05)，且TT基因型患者的Hcy水平明顯高于CC、CT基因型患者(P<0.05)。妊高征患者Hcy水平明顯增高(P<0.05)，并與病情嚴重程度呈正相關，與高同型半胱氨酸血癥的存在加重妊高征疾病的發展相一致[9]。

綜上所述，妊高征患者血清Hcy及腎功能指標水平明顯增高，且在重癥患者中升高更為明顯，能夠作為妊高征輔助診斷、病情監測及預后判斷的重要指標。MTHFR基因C677T多態性和妊高征患者血清Hcy水平有一定的相關性，且純合型(TT基因型)患者血清Hcy水平顯著增高，檢測MTHFR基因C677T多態性可為妊高征患者病情嚴重程度評估及預后判斷提供一定依據。