HBV持續感染患者血清ANA、免疫球蛋白和補體水平及其臨床意義*

余 卉,劉少平,寧立芬

1.泰康同濟(武漢)醫院檢驗科，湖北武漢 430000;2.天門市第一人民醫院檢驗科，湖北天門 431700;3.武漢市漢陽醫院檢驗科，湖北武漢 430000

乙型肝炎病毒(HBV)在世界范圍內廣泛傳播，統計結果顯示，全球HBV感染者數量可能高達20億，其中約2.4億患者為慢性持續感染，且每年死亡患者數約為60萬[1-2]。我國為HBV感染主要高發地區，60歲以下人群HBV攜帶率為7.18%，感染者總數達9 300萬，其中約2 000萬可進展為慢性乙型肝炎(CHB)。由于現階段抗病毒治療尚無法徹底治愈乙型肝炎，CHB患者肝細胞因持續炎癥和損傷而導致病情進展為肝硬化甚至肝癌。因此，準確判斷HBV感染狀態對病情評估、治療方案選擇和預后評估均具有重要的參考價值[3]。近年來有研究發現，HBV持續感染可能導致機體免疫功能紊亂和自身免疫現象發生，并在CHB患者病情進展和轉歸中占有重要地位。抗核抗體(ANA)是臨床最常見的自身抗體之一，常用于自身免疫性疾病的診斷、治療監測和病情評估[4-5]。本文主要探討外周血ANA、免疫球蛋白和補體在HBV持續感染患者中的表達水平及臨床意義，為促進CHB診治水平提高而提供參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年8月至2019年8月本院收治的HBV感染患者92例為研究對象，其中男54例、女38例，年齡26～74歲、平均(51.83±9.27)歲。納入標準：(1)符合CHB相關診斷標準[6]；(2)血清HBV DNA>1.0×103copy/mL；(3)年齡18～80歲。排除標準：(1)合并其他肝炎病毒感染或肝組織損傷；(2)伴其他免疫性疾病；(3)伴惡性腫瘤或心、腎功能不全；(4)妊娠或哺乳期女性；(5)前6個月內接受免疫調節治療。根據肝組織活檢結果將研究對象分為CHB組、肝硬化組。另外選取本院同期健康體檢者60例為對照組，其中男34例、女26例，年齡18～76歲、平均(52.64±9.08)歲。各組研究對象年齡和性別差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經本院倫理委員會審核通過。患者及家屬知曉本研究并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1實驗室檢查 抽取各組研究對象空腹外周靜脈血5 mL，離心后取上清液-80 ℃保存待用，采用免疫比濁法(試劑盒為廠家配套檢測試劑盒)檢測血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白M(IgM)水平；采用美國Beckman Coulter Immage800免疫化學系統及配套試劑檢測血清補體C3和C4水平；采用間接免疫熒光法(試劑盒由德國歐盟實驗診斷有限公司生產)檢測血清ANA滴度，以1∶100為起始滴度，滴度≥1∶100者為陽性，對結果為陽性者分別按1∶320和1∶1 000的比例進行稀釋以測量最終滴度。所有操作均嚴格按照說明書要求完成，正常參考值范圍：IgA 0.82～4.35 g/L、IgM 0.46～3.04 g/L、IgG 7.51～15.6 g/L、C3 0.79～1.52 g/L、C4 0.16～0.38 g/L。

1.2.2肝組織活檢 采用16G一次性穿刺針(美國Bard公司)進行肝組織穿刺活檢。合格標本標準為長度≥1.5 cm且鏡下匯管區數量≥6個。經4%甲醛固定和石蠟包埋后4 μm連續切片，經蘇木精-伊紅(HE)染色、Gordon-Sweets銀氨染色和Masson三色套染后參照Scheuer系統判斷有無肝硬化。

2 結 果

2.1肝硬化組、CHB組和對照組免疫球蛋白和補體檢測結果比較 經肝組織活檢，將HBV持續感染患者分為CHB組(65例)和肝硬化組(27例)。肝硬化組血清IgG、IgA及IgM水平高于CHB組和對照組，C3和C4水平低于CHB組和對照組，CHB組血清IgG、IgA及IgM水平高于對照組，C3和C4水平低于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 肝硬化組、CHB組和對照組免疫球蛋白和補體檢測結果比較

2.2肝硬化組、CHB組和對照組ANA檢測結果比較 肝硬化組、CHB組和對照組ANA陽性率分別為40.74%、21.54%和5.00%，其中肝硬化組各滴度的陽性率均高于對照組，1∶1 000滴度的陽性率高于CHB組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 肝硬化組、CHB組和對照組ANA檢測結果比較[n(%)]

2.3HBV感染患者發生肝硬化的危險因素分析 多因素Logistic回歸分析顯示，血清ANA陽性、IgG和IgA為HBV感染患者發生肝硬化的獨立危險因素(P<0.05)，C3和C4則為重要的保護因素(P<0.05)。見表3。

表3 HBV感染患者發生肝硬化的危險因素分析

2.4各項指標對肝硬化的診斷價值分析 ANA診斷HBV感染患者肝硬化的靈敏度和特異度分別為40.74%和80.00%，IgA的靈敏度和特異度分別為74.07%和84.62%，補體C3的靈敏度和特異度分別為70.37%和81.54%。將ANA、IgA、補體C3 3項指標聯合檢測可進一步提升診斷價值，靈敏度和特異度分別為66.67%和95.38%。見表4、圖1。

表4 各項指標對HBV感染患者肝硬化的診斷價值分析

注：A為C4、IgG和IgM；B為ANA、IgA、C3及三者聯合檢測。

3 討 論

CHB的發病機制現階段尚未完全明確，HBV對肝細胞并無直接殺傷作用，但可通過免疫反應和炎癥造成病理性損傷，具體機制可能包括淋巴細胞浸潤、免疫復合物沉積以及免疫耐受破壞等[7]。梁志軍等[8]報道顯示，HBV可影響患者T淋巴細胞亞群和免疫球蛋白水平，進而引起細胞免疫和體液免疫異常，因此對免疫功能進行檢測有利于評估患者病情和判斷預后。LANG等[9]研究認為，HBV感染與機體適應性免疫反應關系密切，檢測CD4+和CD8+T淋巴細胞等免疫學指標水平可為開展個體化免疫治療提供參考信息。

免疫球蛋白主要由B淋巴細胞合成和釋放，是機體受抗原刺激后產生的主要效應產物，補體是具有溶菌和溶細胞等免疫功能的活性蛋白，兩者在HBV感染后的病原體清除過程中具有積極作用，同時也是導致肝功能損傷的重要原因。因此，檢測一種或多種免疫球蛋白水平對肝臟疾病的診斷、病情監測和治療指導均具有重要的參考價值[10-11]。林孟新等[12]研究認為IgG、IgM、IgA、C3和C4對肝臟疾病的診斷具有重要價值。祁冬冬[13]對200例CHB患者進行分析，結果表明，血清免疫球蛋白水平可直接反映CHB患者肝功能情況并為臨床治療提供可靠依據。本研究中肝硬化組、CHB組和對照組血清IgG、IgA及IgM呈降低趨勢，C3和C4水平呈升高趨勢，且各指標組間差異均有統計學意義(P<0.05)。這表明HBV持續感染可引起免疫球蛋白水平上升和補體水平降低，其中血清IgG、IgA和IgM水平升高一方面是由于病毒誘導而大量產生，另一方面還與患者肝功能損傷導致抗體清除能力減退有關。因此，檢測血清IgG、IgA和IgM水平不僅可評估機體體液免疫水平，還可反映CHB病情和肝功能損傷程度。C3和C4是連接免疫反應中經典途徑和旁路途徑的關鍵補體，其水平降低不僅與免疫復合物形成造成補體大量消耗有關，還可能與肝細胞損傷導致補體合成減少關系密切，故觀察血清C3和C4水平變化可監測機體免疫狀態和肝功能損傷情況，與邱厚兵等[14]的研究結果相似。

自身免疫反應在肝臟疾病中較為常見，其發生可能與遺傳、免疫系統過度激活等因素有關，且在CHB病情進展過程中發揮著重要作用[15]。練明建等[16]對270例肝硬化患者進行檢測，發現其普遍存在自身免疫現象，且自身抗體陽性率與病因、性別及年齡等因素有關。本研究以滴度≥1∶100為ANA陽性進行研究，結果顯示，肝硬化組、CHB組和對照組陽性率分別為40.74%、21.54%和5.00%，且肝硬化組各滴度的陽性率均高于對照組，1∶1 000滴度的陽性率高于CHB組，提示自身免疫反應在CHB發生和發展過程中占據重要地位，并且可能加重患者肝功能損傷。但有研究認為，CHB患者的ANA低滴度僅反映機體處于自身免疫反應狀態，而并未對免疫功能造成明顯影響，而高滴度又可能因自身免疫性疾病所致，因此ANA陽性在CHB患者中的應用價值還有待進一步探討。

肝硬化是肝炎癥損傷的不可逆轉階段，及時發現和合理干預對控制病情進展具有重要意義。本研究采用多因素Logistic回歸進行分析，結果顯示，血清ANA陽性、IgG和IgA均為HBV感染患者發生肝硬化的獨立危險因素，C3和C4則為重要的保護因素，表明CHB病情進展和發生肝硬化是免疫系統多項因素共同作用的結果。因此，對免疫功能進行干預對改善CHB患者預后具有積極作用。目前，病毒抑制聯合免疫調節已成為CHB治療具有廣闊應用前景的新策略[17]。此外，本研究采用ANA、免疫球蛋白和補體對肝硬化和CHB進行鑒別診斷，結果顯示ANA的靈敏度和特異度分別為40.74%和80.00%，靈敏度較低的主要原因為ANA陽性率偏低所致，因此單獨應用ANA時容易造成漏診。3種免疫球蛋白中IgA的診斷價值相對較高，靈敏度和特異度分別為74.07%和84.62%，表明IgA類抗體在抗感染免疫中發揮主要作用，因而能更準確地反映患者病情變化。補體C3的靈敏度和特異度分別為70.37%和81.54%，C4雖然靈敏度高達96.30%，但特異度僅為49.23%，因此整體準確率相較于C3明顯偏低。采用ANA、IgA和C3 3項指標進行聯合檢測，靈敏度和特異度分別為66.67%和95.38%，表明ANA、免疫球蛋白和補體聯合檢測可為判斷CHB患者發生肝硬化提供準確的參考依據，進而指導臨床治療和預后評估，同時還可有效減少肝組織穿刺活檢等有創操作次數，對促進患者身心健康具有重要意義。

綜上所述，外周血ANA、免疫球蛋白和補體在HBV持續感染患者中水平較健康人群明顯升高且與患者病情進展情況關系密切，是CHB患者發生肝硬化的主要危險因素，同時可為肝硬化早期診斷和治療提供參考依據。