藤茶中二氫楊梅素的研究

鄭 琳，高士偉，劉盼盼，鄭鵬程，龔自明

（湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所，武漢 430064）

藤茶（Ampelopsis grossedentata），又叫茅巖青霜茶、青霜古藤茶等，廣泛分布在云南、廣西、湖南、湖北、福建等地，具有抑菌消炎［1，2］、抗氧化［3］、抗腫瘤［4］、護(hù)肝［5］等功效。藤茶的主要功效成分為二氫楊梅素（Dihydromycetin，簡稱DMY），不同產(chǎn)地［6］、植株［7］、生長時(shí)期［8］、加工方式［9］等均會(huì)影響其DMY 含量。近年來，DMY 被作為一種天然無毒的添加劑逐步應(yīng)用于食品、日化產(chǎn)品生產(chǎn)中，故對(duì)其提取純化工藝的研究較多，酶促提取［10］、超聲提取［11］、微波提取［12］、溶劑提取［13］等均有涉及，但聯(lián)合提取方法的研究較少。本研究比較分析了不同產(chǎn)地藤茶嫩葉中DMY 的含量，聯(lián)合溶劑提取和超聲∕微波∕破壁輔助提取法，優(yōu)化了DMY 成分的提取工藝，為有針對(duì)性地提高藤茶利用率、延長產(chǎn)業(yè)鏈提供了技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

藤茶原料：2019年4月分別于湖北省恩施土家族苗族自治州來鳳縣、廣西壯族自治區(qū)金秀瑤族自治縣、湖南省張家界市、云南省麗江市和福建省武平縣采集同等嫩度（一芽一葉）的藤茶樣品。

試劑：DMY 標(biāo)準(zhǔn)品（上海源葉生物科技有限公司，純度為98%），乙醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純），冰乙酸、乙腈（美國Fisher Chemical 公司，色譜純）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同產(chǎn)地藤茶嫩葉中DMY 含量比較 料液比1∶70（g∶mL，下同），100% 乙醇溶液，沸水浴提取30 min，過濾，采用高效液相色譜法測定DMY 含量。

1.2.2 不同提取方法對(duì)藤茶中DMY 提取量的比較 超聲輔助條件為料液比1∶70，用80% 乙醇溶液常溫提取3 min；微波輔助條件為100 W 功率，料液比1∶60，用60% 乙醇溶液提取2 min；破壁式提取條件為常溫25 ℃，料液比1∶60，用100% 乙醇溶液提取3 min，然后均置于沸水浴中提取20 min。過濾，采用高效液相色譜法測定DMY 含量，以此研究不同提取方法對(duì)藤茶中DMY 成分提取的效果。

1.3 高效液相色譜分析檢測方法

色譜柱為Agilent TC-C18 不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm）。流動(dòng)相為甲醇-水（3∶7）（用冰乙酸調(diào)pH至3.5）。流速為0.7 mL∕min；檢測波長為292 nm；柱溫為35 ℃；進(jìn)樣量為10 μL。

標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確稱取20 mg DMY 標(biāo)準(zhǔn)樣品，溶解于上述流動(dòng)相，精確定容至25.0 mL，得到0.8 mg∕mL母液。然后取適量上述溶液，分別稀釋至1、4、8、16、32 倍，即得到濃度梯度為0.800、0.200、0.100、0.050、0.025 mg∕mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。將配制好的標(biāo)準(zhǔn)溶液用高效液相色譜法進(jìn)行測定，以測定得到的色譜峰面積和已知標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度進(jìn)行回歸分析，得回歸分析曲線：y=（3E-08）x+0.012，r2=0.999，x為峰面積，y為樣品濃度（mg∕mL）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同產(chǎn)地藤茶嫩葉中DMY 含量的比較

黃建華等［8］的研究發(fā)現(xiàn)，藤茶中二氫楊梅素的含量呈逐月遞減趨勢，4月含量最高，適合用于二氫楊梅素的提取。因此，于2019年4月選擇了5 個(gè)產(chǎn)地的藤茶嫩葉，檢測分析DMY 含量，結(jié)果見表1。

由表1 可知，DMY 含量按照從高到低排序?yàn)樵颇鲜←惤小V西壯族自治區(qū)金秀瑤族自治縣、福建省武平縣、湖南省張家界市、恩施土家族苗族自治州來鳳縣，云南省麗江市產(chǎn)的藤茶嫩葉DMY 含量顯著高于其他地區(qū)，湖北省恩施土家族苗族自治州來鳳縣產(chǎn)的藤茶嫩葉DMY 含量顯著低于其他地區(qū)，廣西壯族自治區(qū)金秀瑤族自治縣、福建省武平縣和湖南省張家界市3 個(gè)地區(qū)產(chǎn)的藤茶嫩葉DMY 含量無顯著差異。王家勝等［6］發(fā)現(xiàn)，相比于廣西壯族自治區(qū)恭城縣和平樂縣，湖南省衡東縣所產(chǎn)藤茶、江西省黎川縣產(chǎn)藤茶中DMY 含量較高；常敬芳等［14］研究發(fā)現(xiàn)，在廣西壯族自治區(qū)，桂林市靈川縣和岑溪市大隆鎮(zhèn)所產(chǎn)藤茶比南寧市武鳴區(qū)雙江鎮(zhèn)所產(chǎn)藤茶DMY 含量高。這些結(jié)論與本試驗(yàn)結(jié)果較為一致，說明DMY 含量體現(xiàn)出明顯的地區(qū)差異。

表1 不同產(chǎn)地藤茶嫩葉中DMY 的含量

2.2 不同提取方法對(duì)藤茶中DMY 提取量的影響

在前期研究［15］基礎(chǔ)上，為實(shí)現(xiàn)快速高效提取，進(jìn)一步優(yōu)化DMY 提取工藝，結(jié)果見表2。由表2 可知，無論哪種提取方式，云南省麗江市產(chǎn)藤茶中DMY 提取量均最高，湖北省恩施土家族苗族自治州來鳳縣產(chǎn)藤茶中DMY 提取量均最低；超聲輔助溶劑提取狀態(tài)下，各地區(qū)產(chǎn)藤茶中DMY 提取量存在顯著差異；微波輔助溶劑提取狀態(tài)下，云南省麗江市產(chǎn)藤茶中DMY 提取量最高，達(dá)到29.520%，顯著高于其他產(chǎn)區(qū)，湖南省張家界市和湖北省恩施土家族苗族自治州來鳳縣產(chǎn)區(qū)未表現(xiàn)出顯著差異；破壁輔助溶劑提取狀態(tài)下，湖北省恩施土家族苗族自治州來鳳縣產(chǎn)藤茶中DMY 提取量最低，僅為9.892%，與湖南省張家界市產(chǎn)區(qū)未表現(xiàn)出顯著差異，與其他3 個(gè)產(chǎn)區(qū)表現(xiàn)出顯著差異；綜合分析試驗(yàn)條件和DMY 提取量，發(fā)現(xiàn)微波輔助乙醇使用量較少、提取時(shí)間短、料液比相對(duì)較低，可達(dá)到綠色、節(jié)能、高效的提取狀態(tài)。

表2 不同提取方式對(duì)藤茶中DMY 提取量的影響

3 結(jié)論與討論

本研究以湖北省恩施土家族苗族自治州來鳳縣、廣西壯族自治區(qū)金秀瑤族自治縣、湖南省張家界市、云南省麗江市和福建省武平縣5 個(gè)產(chǎn)區(qū)同季節(jié)同等嫩度的藤茶為原料，比較分析了其中DMY 含量，發(fā)現(xiàn)DMY 含量表現(xiàn)出較為明顯的地區(qū)差異，云南省麗江市顯著高于其他地區(qū)，湖北省恩施土家族苗族自治州來鳳縣顯著低于其他地區(qū)。同時(shí)比較分析了超聲、微波、破壁式3 種方式輔助溶劑提取法對(duì)DMY 成分的提取效果，發(fā)現(xiàn)微波輔助溶劑提取狀態(tài)下，云南省麗江市地區(qū)產(chǎn)藤茶中DMY 提取量最高，達(dá)到29.520%；破壁輔助溶劑提取狀態(tài)下，湖北省恩施土家族苗族自治州來鳳縣產(chǎn)藤茶中DMY 提取量最低，僅為9.892%；綜合分析試驗(yàn)條件和DMY 提取量，微波輔助溶劑提取可達(dá)到較好的提取狀態(tài)。

預(yù)計(jì)從2 個(gè)方面著手開展后續(xù)試驗(yàn)：一是放大驗(yàn)證不同提取方法的提取效果，為中試化甚至工業(yè)化提取DMY 提供數(shù)據(jù)支撐；二是以DMY 為天然添加劑，將其應(yīng)用于食品、日用品生產(chǎn)行業(yè)，有效延長藤茶產(chǎn)業(yè)鏈。