實(shí)時(shí)PCR 檢測(cè)在妊娠晚期B 族鏈球菌篩查診斷中的應(yīng)用價(jià)值觀察

張 敏 季姍姍 李文然

（河南省三門峽市中心醫(yī)院產(chǎn)科，河南三門峽472000）

B 族鏈球菌（GBS）為革蘭陽性球菌，一般寄生于人體下消化道和泌尿生殖道，20 世紀(jì)30年代，F(xiàn)ry 等報(bào)道了GBS 能夠引發(fā)產(chǎn)后心內(nèi)膜炎而導(dǎo)致患者死亡，故而證明該細(xì)菌為人類致病菌[1]。隨著人們對(duì)GBS 的認(rèn)識(shí)加深，眾多研究顯示，GBS 可以導(dǎo)致新生兒感染，如肺炎、腦膜炎等，對(duì)新生兒生命安全危害較大[2-3]。而對(duì)于GBS 陽性孕婦而言，其容易發(fā)生胎膜早破、子宮內(nèi)膜炎等，危害其健康[4]。準(zhǔn)確篩查GBS 陽性孕婦，對(duì)指導(dǎo)GBS 防治具有重要意義。實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是GBS 診斷的方法之一，檢測(cè)所需時(shí)間短，本研究探討實(shí)時(shí)PCR 在妊娠晚期GBS 篩查診斷中的應(yīng)用價(jià)值，并分析GBS 陽性孕婦不良妊娠結(jié)局。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2017年5月至2019年4月于本院進(jìn)行GBS 篩查的917例妊娠晚期孕婦為研究對(duì)象，孕婦年齡21～40 歲，平均年齡（28.60±3.94）歲；初產(chǎn)婦683例，經(jīng)產(chǎn)婦234例；孕周28～38 周，平均孕周（34.19±2.67）周。本研究取材均通過孕婦同意，其無自身免疫性疾病、無嚴(yán)重生殖道畸形、無嚴(yán)重內(nèi)外科疾病、近期內(nèi)無性生活和使用抗生素情況。

1.2 方法：根據(jù)2002年美國疾病控制中心（CDC）推薦的取材方法，對(duì)妊娠晚期孕婦進(jìn)行陰道取材，擦拭外陰分泌物，向陰道內(nèi)置入2 根無菌陰道棉簽，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)采集分泌物，之后向肛門內(nèi)置入2 根棉拭子，于肛門括約肌2 指位置順時(shí)針旋轉(zhuǎn)，采集直腸分泌物。2 根無菌陰道棉簽和2 根棉拭子均分為2 份，各用于細(xì)菌培養(yǎng)和實(shí)時(shí)PCR 檢測(cè)。細(xì)菌培養(yǎng)：將標(biāo)本接種于COBA 平板及改良TH 肉湯中，在35℃環(huán)境下，置于5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，觀察是否有GBS 生長菌落（粉紅色或白灰色），發(fā)現(xiàn)疑似GBS 菌落后采用B 群鏈球菌鑒定方法予以鑒定。若經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)48h 培養(yǎng)后未發(fā)現(xiàn)GBS 菌群生長，則判斷為無GBS 生長；若經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)48h 培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)有GBS 菌群生長，則判斷為GBS 陽性。實(shí)時(shí)PCR 檢測(cè)：取樣后的陰道棉簽和直腸棉拭子均置于2mL 標(biāo)本運(yùn)輸液中，24h 內(nèi)予以檢測(cè)。振蕩標(biāo)本運(yùn)輸液，吸取50μL 進(jìn)行離心，除去離心后的上清液，以50μLTE緩沖液重懸，加入10μL 內(nèi)參照，振蕩5min，95℃環(huán)境中加熱2min，冰浴備用。向PCR 反應(yīng)管中加入處理后的待測(cè)標(biāo)本4μl，并設(shè)置陰性對(duì)照和陽性對(duì)照，離心，將待測(cè)PCR 反應(yīng)管予以PCR 擴(kuò)增檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：運(yùn)用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)軟件包分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌培養(yǎng)及實(shí)時(shí)PCR 診斷結(jié)果：細(xì)菌培養(yǎng)顯示GBS 陽性者38例，所占比例為4.14%；實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)顯示GBS 陽性者96例，所占比例為10.47%。

2.2 實(shí)時(shí)PCR 鑒別診斷GBS 陽性的價(jià)值：細(xì)菌培養(yǎng)顯示GBS 陽性的38例孕婦實(shí)時(shí)PCR 檢測(cè)均為陽性；其他實(shí)時(shí)PCR 檢測(cè)顯示為GBS 陽性而細(xì)菌培養(yǎng)顯示陰性的58例孕婦，擴(kuò)增測(cè)序證實(shí)有54例為GBS 陽性，4例為GBS 陰性。實(shí)時(shí)PCR 診斷妊娠晚期GBS 陽性的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為100%、99.52%和99.56%，詳見表1。

表1 實(shí)時(shí)PCR 鑒別診斷GBS 陽性的結(jié)果

2.3 GBS 陽性和GBS 陰性孕婦不良妊娠結(jié)局比較：GBS 陽性組胎膜早破、宮內(nèi)感染、胎兒窘迫和新生兒感染發(fā)生率均高于GBS 陰性組（P＜0.05），詳見表2。

表2 GBS 陽性和GBS 陰性孕婦不良妊娠結(jié)局比較 [n（%）]

3 討論

GBS 為條件致病菌，正常情況下不會(huì)引起感染，當(dāng)女性懷孕時(shí)，體內(nèi)性激素和糖原水平升高，陰道pH 值也發(fā)生改變，加之機(jī)體免疫功能降低，促進(jìn)了GBS 增殖，可造成孕婦、新生兒感染，是新生兒死亡重要原因之一[5]。研究表示，10%～30%GBS 菌落集中在孕婦陰道、直腸中，1%～2%嬰兒可發(fā)展為早發(fā)型GBS 感染（即出生后首周內(nèi)發(fā)生感染），另有部分嬰兒為晚發(fā)型GBS 感染（多在出生后1 周至3個(gè)月內(nèi)發(fā)生感染），而GBS 引起的新生兒死亡率較高。早期人們對(duì)GBS 致病的認(rèn)知并不深，忽視了孕婦GBS 篩查。美國CDC 于1996年提出圍產(chǎn)期GBS疾病預(yù)防指南后，預(yù)防GBS 感染開始引起人們注意。2002年，美國CDC 指出，對(duì)妊娠晚期孕婦進(jìn)行GBS 培養(yǎng)篩查，是預(yù)防GBS 感染的有效方法。

細(xì)菌培養(yǎng)是診斷孕婦生殖道GBS 陽性的金標(biāo)準(zhǔn)，準(zhǔn)確直觀，但由于該方法耗時(shí)較長，加之孕婦生殖道細(xì)菌種類較多，容易影響GBS 培養(yǎng)，漏診可能性較大[6]。本研究結(jié)果顯示，細(xì)菌培養(yǎng)診斷GBS 陽性者僅38例，所占比例為4.14%。實(shí)時(shí)PCR 檢測(cè)對(duì)比細(xì)菌培養(yǎng)所需時(shí)間短，診斷敏感度高，能較好反映孕婦臨產(chǎn)前GBS 帶菌情況，減少抗生素濫用或漏用。但該方法也存在假陽性情況。本結(jié)果中，實(shí)時(shí)PCR 檢測(cè)顯示GBS 陽性者96例，對(duì)比細(xì)菌培養(yǎng)陽性率明顯較高。分析實(shí)時(shí)PCR 診斷效能，顯示其診斷妊娠晚期GBS 陽性的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為100%、99.52%和99.56%，可見實(shí)時(shí)PCR 檢測(cè)在妊娠晚期GBS 診斷中的應(yīng)用價(jià)值較高。少數(shù)實(shí)時(shí)PCR 診斷為GBS 陽性的孕婦，通過擴(kuò)增測(cè)序證實(shí)為陰性，提示可憑借再次擴(kuò)增后測(cè)序來降低假陽性發(fā)生。本研究還分析了妊娠晚期孕婦GBS 陽性對(duì)妊娠結(jié)局的影響，顯示GBS 陽性組胎膜早破、宮內(nèi)感染、胎兒窘迫和新生兒感染發(fā)生率均高于GBS 陰性組。

綜上所述，對(duì)妊娠晚期孕婦采用實(shí)時(shí)PCR 技術(shù)進(jìn)行GBS 篩查，用時(shí)短且診斷價(jià)值高，妊娠晚期GBS 感染會(huì)增加不良妊娠結(jié)局發(fā)生率，需及時(shí)診斷并采取相關(guān)措施干預(yù)，以改善預(yù)后。