GLP-1R基因多態性與2型糖尿病患者利拉魯肽療效的相關性研究

王飛羽 江震 劉亦偉

摘 要 目的：探討2型糖尿病（T2DM）患者胰高血糖素樣肽-1受體（GLP-1R）基因單核苷酸多態性與利拉魯肽療效的關聯性。方法：入選的T2DM患者給予利拉魯肽12周，測定治療前后糖化血紅蛋白（HbA1c）水平。同時對其GLP-1R基因單核苷酸多態性（rs6923761、rs10305420、rs3765467、rs2254336）進行檢測，統計分析降糖療效與基因多態性的相關性。結果：最終納入的62例患者，與野生型相比，HbA1c值在s3765467純突變型（AA）患者中下降更顯著（P<0.05），但在其余各基因型患者間無顯著差異。結論：rs3765467基因多態性可能影響利拉魯肽的降糖療效，未發現rs6923761、rs10305420、rs2254336基因多態性對利拉魯肽降糖療效的影響。

關鍵詞 2型糖尿病 利拉魯肽 基因多態性 降糖療效

中圖分類號：R977.15； R587.1 文獻標志碼：B 文章編號：1006-1533（2021）23-0021-04

基金項目：福建省中青年教師教育科研項目（JT180186）；福建醫科大學啟航基金項目（2018QH1071）

The relationship between GLP-1R gene polymorphism and the efficacy of liraglutide in patients with type 2 diabetes

WANG Feiyu1， JIANG Zhen2， LIU Yiwei1

（1. Department of Pharmacy； 2. Department of Endocrinology， the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University， Fuzhou 350005， China）

ABSTRACT Objective： To explore the association between the single nucleotide polymorphisms （SNPs） on a glucagonlike peptide-1 receptor （GLP-1R） gene and the efficacy of liraglutide in patients with type 2 diabetes （T2DM）. Methods： The T2DM patients were treated with liraglutide for 12 weeks and glycosylated hemoglobin （HbA1c） levels were determined before and after administration， also GLP-1R （rs6923761， rs10305420， rs3765467， rs2254336） genotypes were measured. The relationship between the hypoglycemic effect and the gene polymorphism was analyzed. Results： Sixty-two patients were finally enrolled and the HbA1c levels in the patients with rs3765467 pure mutant （AA） decreased more significantly compared with the wild type （P<0.05）. There were no significant differences among the patients with other genotypes. Conclusion： The rs3765467 gene polymorphism may affect the hypoglycemic effect of liraglutide， and no effect of rs6923761， rs10305420， rs2254336 gene polymorphism on the hypoglycemic efficacy of liraglutide has been found.

KEY WORDS type 2 diabetes； liraglutide； gene polymorphism； hypoglycemic efficacy

利拉魯肽作為胰高血糖素樣肽-1受體激動劑（glucagon-like peptide-1 receptor agonist， GLP-1RA）的代表，通過葡萄糖依賴的方式促進胰島素的分泌及抑制胰高血糖素的分泌來達到降糖的目標，同時能夠抑制食欲中樞，減少食物的攝入來達到降低體重的作用[1]。利拉魯肽在有效降糖的同時，具有明確的心血管獲益，近年來在糖尿病指南中的地位逐步提高[2]。

臨床實踐中發現利拉魯肽的臨床療效存在可能與基因多態性相關的個體差異。利拉魯肽通過與GLP-1R結合來發揮相應的作用。GLP-1R基因變異可導致GLP-1R與GLP-1之間的親和力下降，改變GLP-1R對體內的反應[3]。人類GLP-1R基因由13個外顯子和12個內含子組成，目前研究較多的與GLP-1R功能改變相關的單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP）主要集中在rs6923761、rs3765467、rs10305420、rs2254336[4]。多項研究表明，GLP-1R的相關基因突變對GLP-1RA的降糖及降低體重的效果存在潛在影響，但在不同人群中結論存在差異[5-7]。因此，本研究對使用利拉魯肽的2型糖尿病（T2DM）住院患者進行GLP-1R基因多態性研究，進一步了解GLP-1R基因多態性對利拉魯肽治療作用的差異，以期對糖尿病個體化治療提供一定的依據。

1.1 研究方案

選取2019年1月至2020年12月在我院內分泌科住院期間使用利拉魯肽的T2DM患者作為研究對象。納入標準：①年齡≥18歲；②體質量指數（BMI）≥24 kg/m2；③首次使用利拉魯肽；④患者的空腹血糖（FBG）≥7.0 mmol/L，或餐后2 h血糖（2h PBG）≥11.1 mmol/L，糖化血紅蛋白（HbA1c）≥6.5%；排除標準：①有嚴重并發癥患者；②嚴重肝腎功能不全患者；③精神、意識障礙疾病患者。本研究經福建醫科大學附屬第一醫院醫學倫理委員會批準，且所有參與患者均簽署知情同意書。

1.2 治療方法

納入研究時降糖方案修改為二甲雙胍/二甲雙胍及胰島素加利拉魯肽。利拉魯肽注射劑（規格為3 mL： 18 mg，國藥準字J20160037，諾和諾德制藥有限公司）皮下注射，初始劑量為0.6 mg/d，如無嚴重不良反應，則1周后日劑量增至1.2 mg或1.8 mg，最大劑量不超過1.8 mg/d。

1.3 基因型檢測

使用利拉魯肽前采集患者外周靜脈血5 mL，使用血液基因組DNA快速抽提試劑盒（生工生物工程（上海）股份有限公司）對血液樣品進行DNA抽提。完成后，使用Qubit 2.0對獲得的DNA進行濃度測定，以確保獲得高質量的基因組DNA。采用多重PCR技術結合高通量測序（next-generation sequencing，NGS）技術的靶向測序法，檢測GLP-1R（rs6923761、rs3765467、rs10305420、rs2254336）的基因分型，即對以上多個檢測位點設計特異性引物，利用多重PCR，同時擴增多個核酸片段，之后結合NGS結果實現對樣本多位點的高深度檢測。

1.4 相關指標檢測

記錄患者使用利拉魯肽前的相關指標，包括性別，年齡，BMI，FBG、2h PBG、HbA1c、空腹C肽和餐后C肽水平。使用利拉魯肽3月后，再次測定HbA1c水平，以與基線值比較的差值△HbA1c評估其降糖療效。

1.5 統計分析

2.1 研究對象基本資料

共納入了62名T2DM患者，他們的年齡、性別、BMI、FBG、2h PBG、HbA1c、空腹C肽及餐后C肽的指標比較，差異均無統計學意義（P>0.05，表1）。

2.2 基因分型頻率分布

本研究人群SNP rs6923761、rs10305420、rs2254336、rs3765467的基因型及等位基因頻率詳見表2，其分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律結果，具有群體代表性。

2.3 基因多態性對患者降糖療效的影響

HbA1c指標在rs6923761 GA基因型患者治療前后無顯著下降，而在其余基因型患者中均有顯著下降（P<0.05）；rs6923761、rs3765467、rs10305420中不同基因型患者組間降糖療效無顯著性差異，而rs3765467 AA突變型與野生型GG患者相比，HbA1c指標下降更顯著（P<0.05，表3）。

rs6923761為研究最多的GLP-1R基因的SNP，在白種人中突變率較高，A等位基因突變率為53%～58%，在漢族人群突變頻率為3.7%，此突變會降低胰島素的分泌量，從而影響其降糖、降體質量的效果[5-9]。在我們的研究中，突變頻率與之前報道的結果接近，我們的結果也顯示表明攜帶A等位基因的患者可能影響利拉魯肽的降糖療效。GLP-1R rs6923761位點突變可能降低利拉魯肽與GLP-1R的親和力，進而減少胰島素分泌，從而影響患者的降糖療效。

Jesnterle等[10]開展了一項研究，評估rs10305420基因變異對利拉魯肽治療多囊卵巢綜合征婦女體重的影響，與CC基因型相比，T等位基因的攜帶者治療效果較差，此基因對糖尿病患者降糖療效的影響未見報道。我們的結果表明，兩種基因型對利拉魯肽降糖療效沒有顯著性差異。

最新的一項研究[11]以152例超重的T2DM患者為研究對象，探索rs2254336和rs3765467基因多態性與利拉魯肽減重療效及不良反應的相關性。研究表明，rs2254336及rs3765467基因多態性與利拉魯肽相關的體重減輕效果無相關性，而與胃腸道不良反應相關。在一項韓國的研究中[12]，rs3765467攜帶A等位基因的患者能夠獲得更好的降糖療效。在我們的研究中，rs3765467攜帶A等位基因也更容易降低HbA1c水平，與上述韓國的研究結果的一致。rs3765467的基因變異可能調節細胞的信號傳導，從而改變利拉魯肽與GLP-1R的結合能力，從而影響降糖療效。但我們的研究中該位點突變率低，僅有2例突變純合子，提示我們可擴大樣本量來進一步驗證。

GLP-1R基因多態性對GLP-1治療糖尿病臨床療效及不良反應的影響尚未完全明確，我們的研究結果與既往的已有研究結果有一致或相反的結果。可能是我們納入的人群遺傳背景較為單一，樣本量較少，未進行長期隨訪，試驗結果存在一定局限性。后續將納入更多人群及進行更長時間的隨訪來驗證GLP-1R基因多態性對于糖尿病患者臨床療效的影響。

參考文獻

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