鴨源魏氏梭菌病的診斷與治療

馬芹，翁立雪，許明清，汪建華，趙杰，石艷紅，梁之策，張秀美

鴨源魏氏梭菌病的診斷與治療

馬芹1，翁立雪2，許明清1，汪建華1，趙杰1，石艷紅1，梁之策1，張秀美3*

（1.山東和康源生物育種股份有限公司，山東 濟南 250101；2.山東省煙臺市福山區畜牧獸醫站，山東 煙臺；3.山東省農業科學院畜牧獸醫研究所，山東 濟南）

為建立鴨源魏氏梭菌病的診斷與治療方法，對臨床32周齡櫻桃谷種鴨腸道臌氣病例展開研究。結果為剖檢可見腸道臌氣、腸黏膜覆有黃色纖維素性假膜，實驗室分離到革蘭氏陽性粗短桿菌，經PCR擴增及測序分析，鑒定為魏氏梭菌。同時在場區飼料中也檢測到該菌，因此種鴨感染可能跟飼料污染有關。臨床通過優化飼料配方、入場前飼料細菌檢測，并對臨床病鴨使用恩拉霉素后，死淘現象得以有效控制。

近兩年種鴨感染魏氏梭菌病例較為普遍，臨床上發生明顯的降蛋，同時種鴨死淘率也較高。臨床病料如鼓氣的腸道、肝臟、飼料以及場內土壤中均能檢測到魏氏梭菌，該菌水平傳播能力較強。臨床種鴨多因吞食污染的飼料而感染魏氏梭菌，引起腸道擴張、充滿大量氣體，腸黏膜的脫落及腸壁變薄，該病典型的癥狀為腸道臌氣、黃色纖維素性假膜[1-3]。國內外關于櫻桃谷種鴨感染魏氏梭菌的報道較少。本文從臨床診斷、病理剖檢及實驗室檢測等方面展開，建立科學有效的診斷和治療方法，對臨床防控具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 方法

1.1.1 病料 山東聊城某種鴨場32周齡櫻桃谷鴨。

1.1.2 主要試劑 厭氧肉肝湯培養基，購自青島海博生物技術有限公司；血瓊脂平板，購自北京陸橋技術股份有限公司；PCR反應試劑盒，購自南京諾唯贊生物科技有限公司；革蘭染色試劑盒，購自珠海貝索生物技術有限公司。

1.2 方法

1.2.1 臨床觀察與剖檢 發病的種鴨表現為飲食、飲水下降，不喜走動、腹瀉，日均死亡30只左右，產蛋下降。將病死鴨羽毛消毒打濕后，置于解剖臺進行剖檢，觀察腸道及其他組織臟器的病變情況。剪開小腸的中后段，觀察腸內容物與腸壁的厚薄程度，刮除腸內容物后制作腸抹片，進行固定、染色、鏡檢。

1.2.2 細菌分離培養 在無菌工作臺內，取肝臟劃線接種于血瓊脂平板，37 ℃ 厭氧環境，培養18~24 h。同時無菌剪取適量肝臟組織，置于厭氧肉肝湯培養基內，沸水煮沸10 min，然后置于37 ℃ 溫箱內培養18~24 h，觀察細菌生長情況。

1.2.3 PCR分析 取適量菌液進行PCR擴增，上游引物為AGAGTTTGATCMTGGCTCAG，下游引物為TACGGYTACCTTGTTACGACTT，擴增體系為Mix12.5 μl，上游引物1 μl，下游引物1 μl，細菌培養液2 μl，ddH2O 8.5 μl，反應程序為94 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s，54 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min 30 s，72 ℃ 8 min，擴增結束后于凝膠成像系統下進行觀察，連接轉化并進行測序分析。

1.2.4 飼料檢測 將適量養殖場區內飼喂的飼料置于厭氧肉肝湯內，沸水煮沸10 min，然后置于37 ℃溫箱內培養18~24 h，觀察有無氣體產生，同時將培養液進行鏡檢，觀察有無細菌生長，PCR擴增判斷有無魏氏梭菌的污染。

2 結果

2.1 剖檢結果

病死鴨腹腔剖開后，腸道表面呈污黑色，腸壁變薄擴張充氣，腸黏膜上覆蓋一層厚厚的黃色纖維素性假膜，易于剝離，部分腸道有麩皮樣物質。腸抹片在鏡下觀察到革蘭陽性粗、短桿菌，大小為1~1.5 μm × 3~5 μm，兩端鈍圓，散在或排狀排列，形態和大小與魏氏梭菌相似。

2.2 細菌培養結果

經分離培養后，血瓊脂平板上長出光滑、圓形、灰白色菌落，有明顯的溶血現象；經厭氧肉肝湯培養后，試管內培養液渾濁，并有較多的氣泡產生。取單一菌落和適量培養液進行鏡檢，均觀察到革蘭陽性短粗桿菌，與腸抹片鏡檢結果一致。

2.3 PCR鑒定結果

細菌培養液經PCR擴增后，觀察到1 500 bp左右單一片段，與預期擴增目的條帶一致，經測序比對分析該菌為魏氏梭菌。

2.4 飼料檢測結果

飼料在厭氧肉肝湯內培養24 h后，觀察到明顯的氣泡。抽取適量培養液進行革蘭染色，鏡下觀察到與肝臟分離菌形態一致，飼料中該菌含量更多，PCR擴增及測序分析為魏氏梭菌。

3 討論

櫻桃谷種鴨感染魏氏梭菌后，剖檢癥狀與雞感染魏氏梭菌的病例相似[4-5]，出現了嚴重的腸道臌氣，腸黏膜壞死脫落，這解釋了臨床種鴨為何食欲下降、腹瀉，進而導致較高的死淘率。魏氏梭菌屬于產氣厭氧型菌，經厭氧培養后觀察到有“洶涌發酵”現象[6-7]，鏡檢為革蘭陽性粗短桿菌，再經PCR和測序分析確定病原，本實驗為臨床鴨源魏氏梭菌感染病例提供了診斷技術和方法。在臨床上不僅要檢測出病原、確定合適的治療方法，還應分析疾病發生的原因，避免疾病的擴散及復發，所以尋找魏氏梭菌的來源非常重要。魏氏梭菌分布范圍較為廣泛，飼料、土壤、糞便和畜禽腸道內都適合該菌繁殖，所以飼料在入場前一定要進行細菌檢測，避免污染的飼料進入場區。在養殖過程中也應注意飼料的合理存放，防潮防霉變；另外要注意突然更換飼料的成分、濫用抗生素、添加較多蛋白質含量較高的物質，易引起腸道菌群的失調，導致該病的發生。在養殖過程中，應根據不同階段胃腸道對營養物質的需求進行優化調整。另一方面，球蟲感染也常繼發魏氏梭菌，因球蟲感染后產生的黏液和包漿蛋白質是魏氏梭菌的最佳營養物質[8-9]，在日常養殖過程中也應注意球蟲的檢測與監控。本實驗通過臨床分析、病理剖檢、細菌分離培養及分子生物學診斷等方法，確定病原為魏氏梭菌后，臨床使用恩拉霉素藥物進行治療，使得疾病得到了有效的控制。為防止該病的發生，還應加強飼養管理，及時清理糞便、更換墊料，做好日常消毒工作，避免應激刺激[10]，控制好適宜的溫度與通風。

4 結論

綜合臨床表現、剖檢觀察、實驗室分離培養及分子生物學鑒定分析，確定該菌為魏氏梭菌。因該菌感染后引發了較高的死淘率，臨床采取緊急用藥，使用恩拉霉素7d后，死淘得到了有效控制。又因飼料中也檢測到該菌，及時優化飼料配方，飼料入場前進行細菌檢測，合格后用于飼喂。同時加強場區內糞便的及時處理、消毒，提高飼養管理水平，種鴨現處于正常狀態。

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（2021–01–15）

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1007-1733（2021）05-0029-02