核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)在無償獻(xiàn)血血液標(biāo)本乙肝病毒篩查中的應(yīng)用比較

成守澤

【摘要】目的：分析核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)在無償獻(xiàn)血血液標(biāo)本乙肝病毒篩查中的應(yīng)用情況。方法：選擇2019年1月至2020年1月某中心血站所收集的無償獻(xiàn)血樣32428份為研究樣本，所有受試者的血液樣本均經(jīng)過金標(biāo)試紙法檢測(cè)HBsAg以及干化學(xué)法測(cè)定ALT顯示合格，將樣本分為兩份，分別開展核酸檢測(cè)以及ELISA測(cè)定，分析結(jié)果。結(jié)果：相較于ELISA檢測(cè)法，核酸檢驗(yàn)法的特異性以及靈敏度明顯更高（P<0.05）。核酸檢測(cè)特異度為99.98%。靈敏度為80.85%;ELISA檢測(cè)特異度為70.05%，靈敏度為70.21%。結(jié)論：在開展HBVI臨床篩查時(shí)，應(yīng)用核酸檢測(cè)法所得出的結(jié)果特異性更強(qiáng)、靈敏度更高，該法應(yīng)用前景廣闊，因此值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】核酸檢測(cè);酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);無償獻(xiàn)血;乙肝病毒篩查

[中圖分類號(hào)]R446.6：8512.62 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]2096-5249（2021）01-0137-02

酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）為經(jīng)典血清學(xué)診斷方式。其有著快速、靈敏以及價(jià)格經(jīng)濟(jì)等等特征。其主要實(shí)驗(yàn)原理為：抗體與酶復(fù)合物聯(lián)合顯色，其能夠發(fā)揮出維持抗體免疫活性的效用。現(xiàn)如今，酶聯(lián)吸附免疫法為臨床中開展乙肝病毒檢測(cè)的常用方式。這種方法于血液篩查中可發(fā)揮出一定作用。而核酸檢測(cè)法（nucleic acid testing，NAT）不但能夠有效減少輸血傳播病原體風(fēng)險(xiǎn)度，另外也可縮減病毒檢測(cè)窗口期。其在測(cè)定隱匿性乙肝病毒感染方面意義重大[1]。

為了全面探究?jī)煞N檢測(cè)方式于無償獻(xiàn)血血液樣本乙肝病毒篩查中的應(yīng)用價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)選擇2019年1月至2020年1月某中心血站所收集的無償獻(xiàn)血樣32428份為研究樣本，對(duì)上述病情進(jìn)行全面分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年1月至2020年1月某中心血站所收集的無償獻(xiàn)血樣32428份為研究樣本。所有受試者的血液樣本均經(jīng)過金標(biāo)試紙法檢測(cè)HBsAg以及干化學(xué)法測(cè)定ALT顯示合格。將樣本分為兩份，分別開展核酸檢測(cè)以及ELISA測(cè)定。并在樣本試劑瓶上有效記錄編碼以及收集日期，于采集后4h內(nèi)離心處理，放在冰箱內(nèi)低溫保存。

1.2 方法 本實(shí)驗(yàn)所使用的ELISA測(cè)定設(shè)備為瑞±哈密頓公司生產(chǎn)，型號(hào)為FAME24/20型全自動(dòng)酶免分析儀。核酸檢測(cè)利用美國(guó)羅氏公司所生產(chǎn)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)完成。

所有受試樣本均實(shí)施PCR系統(tǒng)HBV-DNA檢測(cè)以及ELISA法實(shí)施HBV血清標(biāo)記物檢測(cè)，將1g（HBV-DNA）在2.7以上陽性標(biāo)準(zhǔn)[2]。完成靜脈采血之后留取兩份樣本，完成核酸檢測(cè)以及ELISA檢測(cè)。均在收集樣本之后48h內(nèi)完成。針對(duì)無法完成的樣本，需要在提取血漿之后放置于-20℃環(huán)境下妥善保存，并在1周內(nèi)完成檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) 針對(duì)于三類HBV感染狀態(tài)的HBeAg陽性情況加以記錄以及分析，具體包含慢性感染或急性感染[HBsAg（+）/HBeAb（+）]、小三陽[HBsAg（+）/HBeAb（+）/HBcAb（+）]、大三陽[HBeAg（+）/HBeAg（+）/HBeAb（+）]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)原理 本實(shí)驗(yàn)使用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)數(shù)據(jù)內(nèi)的計(jì)數(shù)資料開展x2檢驗(yàn)分析，若P<0.05，證實(shí)相關(guān)數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

相較于ELISA檢測(cè)法，核酸檢驗(yàn)法的特異性以及靈敏度明顯更高（P<0.05）。核酸檢測(cè)特異度為99.98%。靈敏度為80.85%;ELISA檢測(cè)特異度為70.05%，靈敏度為70.21%。ELISA檢測(cè)結(jié)果、核酸檢測(cè)結(jié)果分別與金標(biāo)試紙法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比情況，詳見表1、表2。

3 討論

相關(guān)文獻(xiàn)證實(shí)：當(dāng)人體生成抗體以后，其會(huì)在相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)留存于機(jī)體之中。但因?yàn)榭贵w濃度水平較低，在此刻利用酶聯(lián)免疫吸附法開展檢測(cè)效果精準(zhǔn)度差。核酸檢測(cè)法所出具的結(jié)果有著良好的靈敏度和特異度。在臨床中，一般將核酸檢測(cè)結(jié)果視為酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果的互補(bǔ)型實(shí)驗(yàn)結(jié)論。

核酸檢測(cè)法是通過分析血液內(nèi)微小病毒核酸，經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)張，通過熒光信號(hào)加以識(shí)別。盡早實(shí)施核酸檢測(cè)，可以顯著縮短窗口期時(shí)間。在全面推廣核酸檢測(cè)法之前，美國(guó)有90%以上的輸血者傳播人類免疫缺陷病毒;有75%以上的輸血傳播丙肝病毒的危險(xiǎn)性主要來自于窗口期感染獻(xiàn)血。迄今為止，諸多國(guó)家紛紛開設(shè)了和血液篩查項(xiàng)目。其主要內(nèi)容包含篩查丙肝病毒、乙肝病毒以及人類免疫缺陷病毒。利用此法可以全面提升臨床用血的安全性，另外也可以減少輸血感染發(fā)生率。

中國(guó)屬于HBV感染的高發(fā)國(guó)。乙肝病毒感染往往經(jīng)血液傳播。由此能夠看出，做好HBV篩查工作是相當(dāng)重要的。當(dāng)前，ELISA檢測(cè)法已然成為了臨床診斷HBV感染的最常用方式。其在疾病診斷與血清學(xué)篩查中發(fā)揮了不可替代的作用。這種方法有著進(jìn)行方便快捷、價(jià)格經(jīng)濟(jì)等等優(yōu)勢(shì)。但值得注意的是，此法也存在一定局限性。比如說HBV感染具有一定窗口期，進(jìn)而令ELISA檢測(cè)法與臨床應(yīng)用中存在漏檢的不良情況[3]。

而HBV-DNA為一類近幾年發(fā)展而來的新式分子生物學(xué)檢測(cè)方式。其能夠?qū)崿F(xiàn)于早期發(fā)現(xiàn)HBV感染，同時(shí)也可對(duì)病毒加以定量。利用此法所取得的結(jié)果靈敏性高可、靠性強(qiáng)。該法可以對(duì)HBV感染真實(shí)情況加以反應(yīng)，其靈敏度以及特異性均較高。現(xiàn)如今，我國(guó)諸多血站已然廣泛應(yīng)用了核酸檢測(cè)法用于無償獻(xiàn)血者血液病毒感染篩查工作之中，且取得了滿意成效[4]。

有文獻(xiàn)報(bào)道表明[5]：HBV-DNA檢測(cè)以及ELISA檢測(cè)法測(cè)定HBV-DNA的結(jié)果存在一定差異。在該實(shí)驗(yàn)中，共計(jì)28例樣本HBsAg檢測(cè)陰性，而經(jīng)HBV-DNA檢驗(yàn)結(jié)果為陽性。之所以出現(xiàn)這種情況，主要原因在于在乙肝病毒感染先期無償獻(xiàn)血者血液內(nèi)病毒數(shù)量極少，而應(yīng)用ELISA無法檢測(cè)出HBsAgo而在這時(shí)，病毒的DNA已然存在于無償獻(xiàn)血者的血清樣本之內(nèi)。所以說，其HBV-DNA檢測(cè)結(jié)果表現(xiàn)為陽性。在該實(shí)驗(yàn)中，有19份血液樣本的HBsAg陽性，而HBV-DNA為陰性。之所以出現(xiàn)這種現(xiàn)象，主要原因在于乙肝患者經(jīng)藥物治療之后，血液內(nèi)僅僅存在HBsAg，而無病毒DNA。此刻，該受試者的病毒復(fù)制率和傳染性均較低。

長(zhǎng)久以來，在中國(guó)無償獻(xiàn)血受試者的血液篩查工作之中，通常沿用的模式為：擇取兩類不同廠家生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒，針對(duì)于血液樣本開展2次篩查。利用這種方法以削減血液檢測(cè)所造成的誤差。有文獻(xiàn)表明：針對(duì)于10571例標(biāo)本應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法加以測(cè)定，最終檢測(cè)出50例乙肝表面抗原陽性樣本，綜合檢出率為0.4%;抗-HCV陽性共計(jì)58例，檢出率為0.54%;抗-HCV陽性共計(jì)%例，檢出率為0.9%。雖然說現(xiàn)如今我國(guó)ELISA檢測(cè)技術(shù)比以往更為先進(jìn)，能夠在一定程度上減少輸血感染風(fēng)險(xiǎn)。但值得說明的是，應(yīng)用ELISA檢測(cè)HIV、HCV、HPV病毒的抗原或抗體，針對(duì)于HIV、HCV以及HBV窗口期感染變異病毒等等仍舊沒有辦法第一時(shí)間檢出。另外也會(huì)受到諸如環(huán)境操作、試劑設(shè)備等等因素所產(chǎn)生的影響，因此存在較高的漏診率。

以酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)，聯(lián)合實(shí)施核酸檢測(cè)能夠取得滿意成效。在該項(xiàng)調(diào)查中，應(yīng)用此法檢測(cè)出HBV-DNA陽性共計(jì)20例，檢出率約0.18%。而HIV-RNA與HCV-RNA沒有發(fā)現(xiàn)陽性樣本。經(jīng)過對(duì)比，單一檢測(cè)法以及綜合檢測(cè)法測(cè)定乙肝病毒陽性樣本結(jié)果，在此其中共計(jì)4例樣本屬于酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)陰性而核酸檢測(cè)陽性。經(jīng)后期采血隨訪，表明其屬于窗口期感染。

核酸檢測(cè)為一類新式的生物分子學(xué)檢測(cè)方式。其能夠有效測(cè)定受試者HBV-DNA含量水平繼而體現(xiàn)出機(jī)體真實(shí)的感染情況。該法有著易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、核酸標(biāo)本回收率高等優(yōu)勢(shì)，屬于一類血清學(xué)診斷方式的有效補(bǔ)充，尤其適合于大量血樣本篩查工作。

有文獻(xiàn)表明：將某血液中心所收集的12758例血樣本為研究對(duì)象，分別開展ELISA檢測(cè)以及NTA檢測(cè)，結(jié)果證實(shí)：兩類方式在測(cè)定HBV陽性率方面無明顯差別（P>0.05），相較于ELISA法，NAT法針對(duì)于HBV診斷特異度、靈敏度明顯更高，并且核酸檢測(cè)法的窗口期顯著比ELISA法更短。由此能夠看出，核酸檢測(cè)法在測(cè)定血樣本內(nèi)HBV應(yīng)用價(jià)值更高。之所以出現(xiàn)這種情況，主要原因在于乙肝病毒感染存在隱匿性的特征。另外感染也存在窗口期。ELISA法主要經(jīng)過把酶復(fù)合物以及抗體結(jié)合顯色方式用于檢測(cè)，其非常容易受到諸如病毒感染窗口期以及病毒變異等等因素的影響，繼而引發(fā)漏診事件發(fā)生。

與之相比，NAT能夠經(jīng)過核酸擴(kuò)張技術(shù)，繼而測(cè)定出血樣本內(nèi)較早出現(xiàn)的病毒核酸。同時(shí)，對(duì)其開展定量可以更為直接有效的體現(xiàn)出機(jī)體HBV感染的真實(shí)情況。因而利用此法所得出的效果靈敏性高、特異性強(qiáng)。另外有研究表明：在大三陽血樣本內(nèi)HBV-DNA含量水平以及陽性率明顯比小三陽以及急性感染/感染慢性期的標(biāo)本。由此能夠看出，HBV-DNA含量水平可以在極大程度上體現(xiàn)出HBV傳染程度。隨著受試者機(jī)體中HBV-DNA水平上升，病毒傳染性越強(qiáng)。在此其中，慢性感染期以及急性感染HBV不存在傳染性;小三陽雖然有一定傳染性，但并不強(qiáng)。而大三陽則有相當(dāng)高的傳染性。臨床中，可以通過定量測(cè)定的方式，用以檢測(cè)HBV-DNA含量水平，進(jìn)而知曉HBV傳染性。

本實(shí)驗(yàn)中，將32428份無償鮮血的血液樣本視為研究對(duì)象，全面對(duì)比了該血液樣本中HBV篩查時(shí)利用核酸檢測(cè)以及ELISA檢測(cè)兩種方法的測(cè)定結(jié)果。最終證實(shí)：在開展HBV篩查時(shí)，核酸檢測(cè)法所體現(xiàn)出的特異性、靈敏性明顯比ELISA更高，組間數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

由此能夠看出，在開展HBVI臨床篩查時(shí)，應(yīng)用核酸檢測(cè)法所得出的結(jié)果特異性更強(qiáng)、靈敏度更高，該法應(yīng)用前景廣闊，因此值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]蘇俊，駱冬云.核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)在無償獻(xiàn)血血液標(biāo)本乙肝病毒篩查中的應(yīng)用價(jià)值比較[J].中國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)藥，2015，22（16）：58-59.

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