血小板功能檢測在經皮冠狀動脈介入術后抗血小板治療中的應用進展

盧 聰，程 標，2△

(1.遵義醫科大學，貴州 遵義 563000；2.四川省醫學科學院·四川省人民醫院，四川 成都 610072)

盡管使用了雙重抗血小板治療，部分經皮冠狀動脈介入(percutaneous coronary intervention，PCI)患者中仍會發生心血管事件，抗血小板藥物的作用受多種因素的影響，不同個體在接受標準抗血小板治療方案后的反應性差異與血栓、出血等不良事件具有較強相關性。研究發現[1]，20%～40%的PCI術后患者表現為氯吡格雷低反應性，導致缺血事件發生風險增加，新型P2Y12受體拮抗劑可降低缺血事件的發生率，同時也增加了PCI術后患者出血事件的發生率。

通過血小板功能檢測了解血小板反應性可預測PCI術后患者再發心血管事件的風險。血小板功能檢測(platelet function testing，PFT)可以分析PCI患者血小板聚集功能的抑制程度來評估患者出血/血栓風險：血小板功能抑制過強則血栓風險降低而出血風險增高，血小板功能抑制不足則出血風險降低而血栓風險較高，只有當血小板功能抑制程度達到合適的治療窗范圍才能更好的平衡出血和血栓風險。但由于PFT方法多且缺乏統一標準，迄今為止國內外對血小板功能的臨床檢驗和處理仍存在較大爭議。本文就PFT在PCI術在后抗血小板治療中的應用進展作一概述。

1 常用抗血小板藥物

近年來，P2Y12受體拮抗劑在抗血小板藥物領域中發展較快，不同P2Y12受體拮抗劑抗栓效果不一，臨床上根據患者的出血/血栓風險選擇不同的抗栓方案。阿司匹林在各大指南中均為毫無爭議的I類推薦，其療效確切，實際常需調整的是選擇合適的P2Y12受體拮抗劑。目前臨床上常用氯吡格雷、普拉格雷和替格瑞洛三種P2Y12受體抑制劑。

2 血小板反應多樣性及其可能機制

同一抗血小板藥物治療后不同個體之間的多樣性差異表現為血小板反應多樣性，這些差異與再發血栓或出血相關。抗血小板藥物治療后血小板功能檢測提示血小板活性抑制不足或抑制過多時分別稱為血小板高反應(HPR)和血小板低反應(LPR)。目前已有多項研究表明缺血事件和HPR之間顯著相關。抗血小板反應多樣性影響因素諸多，其作用機制尚未不清楚。主要包括：遺傳因素、細胞因素、臨床因素。

2.1 遺傳因素氯吡格雷通過肝臟P450酶代謝產生活性產物，而位于10號染色體上編碼該酶的基因CYP2C19表現為高度多態性。CYP2C19基因多態性表現為在不同位點上存在多個等位基因，不同等位基因編碼出來的CYP酶導致氯吡格雷代謝活性不同。CYP2C19*1是最常見的正常活性等位基因，CYP2C19*17為功能增強(GOF)等位基因，CYP2C19*2～8為功能缺失或減少(LOF)等位基因。對CYP2C19不同等位基因的表型分型：攜帶CYP2C19*17的純合子或雜合子稱為超快代謝型，攜帶CYP2C19*1的純合子稱為快速代謝型(正常代謝型)，攜帶1個LOF等位基因的雜合子稱為中間代謝型，攜帶2個LOF等位基因稱為慢代謝型，共4型。

研究[2]發現，慢代謝型患者的比例可高達55%～76%，顯著降低氯吡格雷代謝產生活性成分的比例，可使支架內血栓形成風險增加2.6～4.0倍。因此，CYP2C19的遺傳變異性可顯著影響PCI術后的長期臨床預后。

2.2 細胞因素血小板加速更新，CYP同工酶基線水平和其他細胞內因素對肝臟產生抗血小板活性代謝產物過程的影響，P2Y12/P2Y1旁路上調以及其他不依賴于P2Y12受體的血小板信號轉導通路。

2.3 臨床因素臨床因素方面眾多，急性冠狀動脈綜合征(ACS)、糖尿病(DM)、體質指數(BMI)、腎功不全可能會產生影響，藥物方面，患者依從性差、用藥劑量不足、其他藥物對其影響以及未能被有效吸收等也可能產生影響。

3 血小板功能檢測方法

基于血小板激活的各個過程，在方法學可以有多種選擇(方法、誘導劑和濃度等)。為了保證檢測結果的真實性，通常建議采用多種誘導劑連續監測。常用的血小板功能檢測方法如下：

3.1 光學比濁法(LTA)通過檢測激動劑誘導血小板聚集形成血凝塊的透射光變化。但方法為全血測定，價格低廉，結果具有一定的代表性。然而，LTA由于其操作過程繁瑣復雜、處理樣本的時間長，某些特殊樣本(如溶血、脂血等)不適用等缺點限制了其在臨床上廣泛使用。

3.2 血管舒張刺激磷蛋白(VASP)檢測其原理是檢測血小板誘聚物作用下聚集導致的電阻變化。該方法檢測到的血小板聚集物小于比濁法檢測到的血小板聚集物，因此相對敏感。優劣勢：不需要制備血漿，但檢測費用高，耗時長，需血量大，不適合大樣本檢測。

3.3 VerifyNow P2Y12儀其原理同LTA一樣，檢測血小板聚集引起的透光率的變化，區別在于加入纖維蛋白原包被的小珠與血小板表面Ⅱb/Ⅲa受體復合物交聯，增強透光性。優劣勢：簡單、快速，全自動，其所需樣本量少，易標準化，但其受血細胞壓積和血小板數量限制、無校正，沒有統一的臨界值標準。研究[3]表明VerifyNow檢測的HPR是PCI術后患者再發心血管不良事件的獨立危險因素，可通過確定HPR臨界值并預測相關事件。該檢測方法簡便和快速，無需處理血樣，重復性好，然而高昂的價格限制了其廣泛的應用。

3.4 血栓彈力圖(TEG)原理：檢測在體外模擬凝血過程中血栓彈力的變化來檢測血液凝血、纖溶等過程，依據不同激活物的最大血栓幅度計算相應通路的抑制率。優勢：檢測樣本為全血、易于標準化操作、易對比結果，可在床旁即時完成；但該方法也被其成本高、操作相對復雜、標準不一致等限制于臨床應用中。

3.5 Plateletworks和PL多參數血小板功能分析儀原理：運用庫爾特原理，通過加激動劑前后血小板計數的變化來檢測血小板活性。該方法有時限要求，檢測結果與二磷酸腺苷誘導血小板聚集的時間有關且需即時完成，因此，臨床應用在一定程度上是有限的，很少有相關研究。多項研究[4]對正常健康人群使用PL多參數血小板功能分析儀測定血小板反應性，并表示HPR界值為最大聚集率>55%，和LTA、VerifyNow、TEG對HPR的診斷界值基本一致，且對PCI術后再發血栓風險相關；用該PFT指導抗血小板治療可改善PCI術后半年的臨床結局。因此PL多參數血小板功能分析儀在預測或指導患者個體化抗血小板治療方面有獲益，但因PL多參數血小板功能分析儀是我國近幾年才自主生產研發的檢測血小板功能儀器，無預測相關不良事件的標準閾值，仍需更多的研究探討其在臨床上的收益。

不同血小板功能檢測方法得到的結果差異很大，Helten等研究[5]比較了LTA、VASP、MP三種血小板功能檢測結果，結果發現各種試驗所得出的HPR和LPR發生率明顯不同，其中17%的患者中，一種檢測方法顯示HPR，而另一種檢測方法則顯示LPR。這種差異可能部分解釋不同臨床試驗(采用不同血小板功能檢測方法)中PFT指導抗血小板方案調整對臨床預后影響得到的不一致結論。上述檢測方法中，VASP和VerifyNow P2Y12檢測在國內普及率不高。LTA雖有缺點，但其成本低，對設備要求低，在我國仍有較大應用空間。

4 血小板功能檢測在抗血小板治療中臨床應用

平衡缺血/出血風險是PCI后抗血小板治療的核心，新型P2Y12受體拮抗劑有更強的抗栓作用，但其長期使用會顯著增加出血風險。氯吡格雷易受代謝影響而產生差異性反應。因此使用氯吡格雷的缺血高危患者進行血小板功能監測并在必要時進行抗血小板藥物劑量或者方案的調整可能改善缺血風險。新型P2Y12受體拮抗劑具有更強抗栓作用和更高出血風險，應用此類藥物的高出血風險人群依據血小板功能檢測結果及時調整治療方案可能降低出血風險。PHARMCLO研究[6]顯示，根據臨床特征和CYP2C19基因型選擇抗血小板策略顯著降低PCI患者主要不良心血管事件發生風險。

4.1 血小板功能檢測在缺血高危患者中的應用2018年歐洲心臟病協會血運重建指南明確指出了PCI術后患者缺血高危因素，患者存在以下一項或多項因素時要考慮加強抗血小板治療強度：DAPT下的支架內血栓形成，彌漫性多支病變尤其是糖尿病患者，慢性腎病患者，置入至少3個支架，至少干預3處病變，置入2枚支架的分叉病變，支架長度>60 mm，慢性完全閉塞病變的介入治療，ST段抬高心肌梗死病史等。ADAPT-DES研究[7]隨訪2年的結果顯示，在30天內發生心肌梗死患者其支架內血栓發生率最高，且在氯吡格雷治療后血小板高反應患者中發生這種風險升高。Kim等研究[8]結果顯示，PCI術后出現血小板高反應患者的缺血性終點事件的發生率顯著增加，出血發生率顯著降低。可考慮根據PFT結果對氯吡格雷治療患者在必要時進行抗血小板藥物劑量或者方案的調整來確保最大的獲益。

然而研究發現，增加氯吡格雷劑量也不一定能達到理想的抗栓效果。Zhang等研究[9]結果顯示與傳統療法相比，根據血小板功能檢測結果增加氯吡格雷劑量(75 mg bid)后，其出血風險未增加而缺血事件發生率有所下降。GRAVITAS研究[10]結果表明HPR患者經氯吡格雷治療后經PFT指導下增加氯吡格雷劑量對患者預后無明顯臨床獲益。總的來說，對于中代謝型或者慢代謝型患者可能更應考慮更換其他P2Y12受體抑制劑(普拉格雷或替格瑞洛)而非增加氯吡格雷的劑量方案。

新型的P2Y12受體抑制劑不受CYP2C19基因多態性影響，在中間代謝型或者慢代謝型患者中，能發揮更強的抗栓作用；研究[4]表明針對ST段抬高型心肌梗死患者升級為新型的P2Y12受體抑制劑降低HPR比氯吡格雷增加劑量方案降低HPR效果更佳。在TRITONTIMI 38研究[11]中，中間代謝型或者慢代謝型患者使用普拉格雷治療比使用氯吡格雷治療的復合終點事件發生率減少。基于中國人群的PATROL研究[12]，將STEMI-PCI患者分為2組，一組在PFT指導下將HPR患者換用替格瑞洛(HPR轉換組)，另一組HPR患者繼續服用氯吡格雷(HPR非轉化組)，隨訪1年，結果發現HPR非轉換組主要不良心血管事件發生率顯著高于非HPR組和HPR轉換組。但是隨著新型P2Y12受體拮抗劑證據增加，PFT指導下藥物升級抗栓策略的臨床實用性仍存在爭議。Mshelbwala等研究[13]中43%接受氯吡格雷治療的PCI術后患者出現HPR，該部分換用新型P2Y12受體拮抗劑后，1年內凈臨床獲益無顯著差異。目前大部分臨床試驗結果表明，基于PFT升級抗血小板方案雖能降低血小板反應性，但并不能有效地改善臨床預后。研究發現，通過調整為新型P2Y12受體拮抗劑并不能完全降低HPR患者血栓風險的增加。非P2Y12受體介導的途徑可能導致HPR患者PCI術后血栓事件的發生率增加。

綜上，支持常規使用PFT指導缺血高危的PCI術后患者，阿司匹林聯合氯吡格雷升級策略的隨機臨床試驗證據有限，大部分研究得出的結果不如人意，指南推薦級別較低。但在臨床實踐中，針對缺血高危患者尤其是DAPT治療下出現缺血事件的氯吡格雷治療的PCI術后患者，仍可考慮PFT指導下對血小板高反應者升級抗血小板治療，且升級為新型P2Y12受體拮抗劑優于增加氯吡格雷劑量。

4.2 血小板功能檢測在高出血風險患者中的應用

使用新型P2Y12受體拮抗劑較氯吡格雷更應注重出血并發癥。ACS PCI患者在數天內其血小板反應性由高值迅速下降，最近的研究也支持根據PFT結果，必要時進行抗血小板藥物降級策略是可行的。TROPICAL-ACS研究、TROPICAL-ACS亞組研究、TOPIC研究等紛紛表明PCI患者在PFT指導下降級新型P2Y12受體抑制劑的調整策略都可使出血風險降低。TROPICAL-ACS亞組研究還顯示，非老年血小板低反應性(low platelet reactivity，LPR)患者在出血風險上獲益更大。另有研究[14]表示隨機分配的LPR組患者在PFT指導下降階治療比未進行降階治療的LPR組出血風險更小。總之，以上表明PTF指導降階治療對PCI患者有益處，其中LPR患者獲益更大。

目前的研究結果表明，在出血高風險的PCI術后患者中采用血小板功能檢測指導DAPT降階梯治療證據越來越多，指南推薦級別在提高，可作為臨床決策的參考依據；而在缺血高危患者采用血小板功能檢測指導DAPT升級治療的證據不足，指南尚未推薦常規進行PFT。

5 血小板功能檢測標準化

現有的理論及實驗室研究均支持檢測血小板功能水平可以更加有效地指導臨床對血栓類疾病的防治。但應用于臨床時，其發揮的作用十分有限，尚未達到其預期效果。目前關于血小板功能檢測的臨床研究結論不一致，許多大規模臨床試驗均顯示為陰性結果，尚無足夠的證據指導個體化抗血小板治療，且指南推薦水平較低。這可能與不同的檢測方法、同一方法確定HPR閾值不同、研究疾病人群等均有關系。因此，標準化的血小板功能檢測至關重要。以下對目前臨床血小板功能檢測過程中的常見問題及影響因素進行分析，并提出改進和標準化建議。

5.1 檢測樣本的準備和處理的標準化采樣和處理過程中，諸多因素能導致明顯的血小板功能的變化：如溫度、放置時間、采血過程等。因此確保血樣中血小板的穩定性，有利于提高體外檢測結果與體內狀態一致的真實和有效性。

5.2 選擇準確、穩定的血小板功能檢測儀器并注意儀器檢測過程的標準化具有質控體系且變異系數(CV)值越小的檢測儀器能確保檢測結果的可信度及標準化的同時越能夠準確反應樣本中血小板功能水平。檢測應使用全血、樣本處理簡便，減少因樣本處理過程發生較大的功能改變，能真實地反應體內的血小板聚集功能；

5.3 血小板功能檢測方案設計標準化探討基于多項檢測指標綜合判斷并合理調控血小板功能水平可達到良好的防治效果。對血小板功能調控的原則的建議如下：對于傾向血栓形成風險患者，如果單一指標在高值區域，可考慮通過調整用藥盡量將另外幾項檢測指標都控制在參考范圍的中值或以下。只有多個指標控制在中位或以下，才能有效、安全地防治血栓性疾病，而不是認為單個指標的下降意味著血小板功能水平被完全有效地抑制。對于有出血傾向風險患者，各項檢測指標控制在靠近中值或中值偏上。ELEVATE-TIMI 56研究[15]結果發現在2個不同時間點進行血小板功能檢測時，有11.4%～15.7%的患者血小板反應狀態發生了變化(P<0.001)，該結果表明患者的血小板反應性測量值可能隨時間發生變化。因此，對于高風險個體，需采用多項誘聚劑及時動態跟蹤檢測。

5.4 關于抗血小板藥物抵抗判斷標準的探討目前抗血小板藥物抵抗尚無統一閾值。可以通過用藥后血小板聚集功能水平的最大值結果，或比較用藥前后血小板聚集功能變化進行判斷。目前認為：血小板聚集率用藥前后下降≤10%考慮無效，下降程度為10～29%考慮半有效，下降程度≥30%考慮有效；或用藥后血小板聚集率在高值區域為無效，在中值區域為半有效，在低值區域及以下的為有效。必要時通過對抗血小板藥物劑量或者方案的調整使患者獲益最大。

總之，確保檢測方法的標準合理才能反映體內血小板功能真實狀況，從而有效指導臨床缺血或出血事件的防治。

6 血小板功能檢測的發展前景

血小板功能檢測是預測PCI患者不良預后與出血風險的獨立危險因素，推薦對高危血栓或出血患者行血小板功能學檢測以平衡獲益/出血風險。但血小板功能檢測尚處于探索階段，基于血小板功能檢測指導藥物選擇，尚存在爭議且未得到指南的強烈推薦。

血小板功能檢測能否得到指南的進一步推薦仍面臨著關鍵問題的解決：首先，方法學需滿足床旁實時檢測的高準確性；其次，盡可能控制檢測成本，不要因為其高昂的價格限制于臨床應用；三是，需克服體外檢測與體內活性差異的問題，提高檢測結果對體內活性的真實反應性，因此，血小板功能檢測的標準化是提高血小板功能檢測準確性及臨床指導價值的關鍵。