蘭索拉唑腸溶膠囊溶出一致性研究

李浩然，張玉倩，康 宇，曹 培，張志清

（河北醫科大學第二醫院藥學部，河北 石家莊 050000）

蘭索拉唑[1-2]是繼奧美拉唑之后新一代的質子泵抑制劑，其生物利用度和抑制胃酸分泌作用相較于奧美拉唑有明顯提高，主要用于胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合口潰瘍、卓-艾綜合征和反流性食管炎等疾病治療[3-6]。蘭索拉唑腸溶膠囊口服易吸收，患者順應性好，廣泛用于治療胃潰瘍等相關疾病。目前，我國除了日本武田的原研藥外，還有許多蘭索拉唑腸溶膠囊仿制藥，且國產的仿制藥尚未進行仿制藥的質量與療效一致性評價。

溶出行為是口服固體制劑質量的關鍵指標之一，口服固體制劑的吸收取決于藥物在胃腸道中的釋放和溶解，藥物的溶出對其在體內的吸收有重要影響，可通過體外溶出試驗預測其體內行為[7]。因此，本實驗考察了7個蘭索拉唑腸溶膠囊仿制藥在4種不同介質中的溶出行為，并繪制溶出曲線，以f2相似因子法評價溶出曲線的相似性，旨在對蘭索拉唑腸溶膠囊國產仿制藥的體外溶出進行一致性評價。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waterse2695高效液相色譜儀（美國Waters）；2489 UV/Vis檢測器（美國Waters）；CPA225D型電子分析天平（德國Sartorius）；ZRS-4型智能溶出試驗儀（天津大學無線電廠）；pH 213型臺式酸度計（羅馬尼亞HANNA）。

1.2 藥品與試劑

蘭索拉唑對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100709-201705）；蘭索拉唑腸溶膠囊[原研藥：天津武田（A廠家），批號0243A；仿制藥： B廠家，批號190202；C廠家，批號18120203；D廠家，批號190105； E廠家，批號AHKG04；F廠家，批號1190702；G廠家，批號20190312； H廠家，批號190702]。甲醇（賽默飛世爾，分析純，批號：195211）；濃鹽酸（康德化工，批號：20181106）；磷酸二氫鉀（天津永大，批號：YD20190712）；氫氧化鈉（北京益利，批號：20180217）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（73:27）；流速：1 ml/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：285 nm；進樣量：20 μl。

2.2 方法學考察

2.2.1 專屬性試驗 按2.1項下色譜條件，分別取流動相溶液、蘭索拉唑對照品溶液及供試品溶液20 μl測定，記錄色譜圖。本實驗條件下，色譜峰分離良好，輔料對蘭索拉唑的測定無干擾，該方法專屬性良好，結果見圖1。

圖1 HPLC圖譜

2.2.2 線性試驗 取蘭索拉唑對照品約10 mg，精密稱定，置入100 ml量瓶，用含0.01 mol/ml氫氧化鈉的流動相溶液稀釋至刻度，得104.2 μg/ml對照品溶液，逐級稀釋，配制濃度分別為1.042，2.084，4.168，8.336，16.672，33.334 μg/ml系列對照品溶液，按2.1項下色譜條件測定，記錄峰面積。以峰面積Y為縱坐標，濃度X（μg/ml）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程Y=51 370X-5640.3（r2=0.999），蘭索拉唑在1.042～33.334 μg/ml濃度范圍內線性關系良好。

2.2.3 加樣回收率試驗 取含量已知的蘭索拉唑腸溶膠囊10粒，去除膠囊外殼后精密稱定內容物，將內容物研磨成細粉，分別取適量細粉9份（約含對照品10 mg）精密稱定，置入50 ml量瓶，流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻濾過。分別精密量取每份濾液4 ml，置入50 ml量瓶，然后精密加入200.6 μg/ml對照品溶液2，3.2，4 ml，流動相稀釋至刻度，每個濃度制備3份，按2.1項下色譜條件測定，以加入量和測得量計算回收率，結果為100.17 %，100.32 %，99.93 %，RSD為0.40 %，0.37 %，0.67 %，加樣回收率良好。

2.2.4 精密度試驗 配制濃度為8.336 μg/ml對照品溶液，同日及連續3天分別連續測定5份該對照品溶液，記錄峰面積，并計算日內精密度RSD為0.24 %，日間精密度RSD為0.61%，表明該方法精密度良好。

2.2.5 穩定性試驗 蘭索拉唑是苯并咪唑類化合物，顯堿性，在酸性條件下易分解[8-9]，因此在溶出試驗中從不同介質取樣后需加入一定量的氫氧化鈉增加其穩定性。以pH 4.5，pH 6.0和pH 6.8的磷酸鹽緩沖液分別配制濃度為8.336 μg/ml的對照品溶液，精密量取2 ml并加入0.1 mol/L氫氧化鈉溶液1 ml（n=6），放置0，1，2，3，5，7，9 h后按2.1項下色譜條件測定，計算得RSD為0.59 %，0.69 %，0.38 %，表明蘭索拉唑在加入氫氧化鈉溶液后的pH 4.5，pH 6.0和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中放置9 h穩定性良好。

2.3 溶出度考察

2.3.1 不同介質中的穩定性考察 分別以pH 4.5，pH 6.0，pH 6.8磷酸鹽緩沖液為溶媒制備一定濃度的對照品溶液，將制備好的對照品溶液放置0，15，30，45，60 min后，按2.1項下色譜條件測定，考察其在不同介質中的穩定性，結果表明，蘭索拉唑在3種介質中的穩定性符合測定要求，因此pH 4.5，pH 6.8和pH 8.0的磷酸鹽緩沖液可作為蘭索拉唑腸溶膠囊的溶出介質，見表1。

2.3.2 溶出介質的制備 按表2量取試劑置入1000 ml量瓶，蒸餾水稀釋至刻度，搖勻即得。

2.3.3 pH 1.2鹽酸溶液中溶出度考察 取蘭索拉唑腸溶膠囊放入轉籃，按溶出度與釋放度測定法（通則0931第一法 方法2）測定[10]（n=12），以37 ℃1000 ml pH 1.2鹽酸溶液為溶出介質，轉速為100 r/min，120 min時，取出轉籃，按2.1項下方法測定籃內蘭索拉唑的剩余量，間接計算蘭索拉唑腸溶片在pH 1.2鹽酸溶液中的溶出度，繪制溶出曲線，結果表明，蘭索拉唑腸溶膠囊在pH 1.2鹽酸溶液中無溶出行為，見圖2。

表1 蘭索拉唑在不同pH溶出介質中的穩定性

表2 不同pH溶出介質的制備

2.3.4 磷酸鹽緩沖液中溶出度考察 取蘭索拉唑腸溶膠囊放入轉籃（n=12），以37 ℃ 1000 ml pH 1.2鹽酸溶液為溶出介質，轉速為100 r/min，120 min時，將鹽酸溶液棄去，加入預熱至37 ℃的磷酸鹽緩沖液1000 ml（pH 4.5或pH 5.5或pH 6.0或 pH 6.4或pH 6.8），轉速不變，分別于5，10，15，20，30，45 min取溶液3 ml濾過，同時補充相同pH、溫度和體積的磷酸鹽緩沖液，精密量取續濾液2 ml，立即加入0.1 mol/L氫氧化鈉溶液1 ml，搖勻，按2.1項下色譜條件測定，記錄峰面積，按標準曲線計算藥物濃度，計算藥物溶出度并繪制藥物溶出曲線，結果見圖2。由結果可見，蘭索拉唑腸溶膠囊原研藥與仿制藥在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中有較快的溶出行為，15 min的溶出量達85 %以上；而在pH 5.5，pH 6.0和pH 6.4磷酸鹽緩沖液中仿制藥的溶出行為偏慢，且與原研藥有不同程度差異，在pH 4.5磷酸鹽緩沖液中仿制藥無溶出行為，原研藥僅有少量的藥物溶出。

圖2 蘭索拉唑腸溶膠囊在不同介質中的溶出曲線

2.3.5 溶出曲線相似性比較 采用f2相似因子法比較溶出曲線的相似性[11]，當f2≥50時，認為兩條溶出曲線具有相似性，結果見表3。另外，當原研藥和仿制藥在15 min內的藥物溶出量≥85 %時，可認為兩者溶出行為相似，無需進行f2比較。本實驗中，蘭索拉唑腸溶膠囊原研藥和仿制藥在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中15 min時的藥物溶出量在85 %以上，因此認為該仿制藥與原研藥在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中溶出行為一致。由結果可見，蘭索拉唑腸溶膠囊仿制藥在pH 1.2鹽酸溶液和pH 4.5磷酸鹽緩沖液中均無藥物釋放，與原研藥的溶出行為一致。在pH 5.5，pH 6.0和pH 6.4磷酸鹽緩沖液中僅有F廠家仿制藥的溶出曲線與原研藥相似，其余仿制藥與原研藥的溶出曲線均有較大差異。因此，在7個仿制藥中僅有F廠家的溶出行為與原研藥一致。

3 討論

pH 6.0磷酸鹽緩沖液能較好地區分不同廠家蘭索拉唑腸溶膠囊的溶出行為，仿制藥在pH 6.0磷酸鹽緩沖液的溶出量比原研藥少，溶出速率慢，可能與該制劑的輔料和制備工藝有關。原研藥在pH 6.0、pH 6.4和pH 6.8介質中均能較快釋藥，而仿制藥在兩種介質中的釋藥行為有較大差異，表明該仿制藥腸溶衣的臨界溶點可能接近或高于pH 6.0[12]，因此在pH 6.0介質中該腸溶衣溶解慢或不溶解導致釋藥量減少。

表3 溶出曲線相似性比較結果

機體正常腸道環境一般為pH 6.8，但在胃酸分泌過多等不同疾病狀態下可能使部分腸道環境的pH降低[13]。因此，本實驗以pH 5.5，pH 6.0，pH 6.4磷酸鹽緩沖液模擬不同人群的腸道環境。在不同介質中蘭索拉唑腸溶膠囊仿制藥的釋藥量和釋藥速率與原研藥有不同程度的差異，表明該藥在同樣條件腸道中的釋藥行為也可能不同，可能是導致該仿制藥治療效果與原研藥存在差異的原因之一。因此，建議蘭索拉唑腸溶膠囊仿制藥廠家重視體外溶出行為在一致性研究中的重要作用，深入研究制劑工藝輔料應用，早日達到一致性評價的制劑標準。