異黃芪甲苷體外對(duì)淋巴細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞免疫功能的影響

阮 鳴，喻 斌，周 峰

異黃芪甲苷體外對(duì)淋巴細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞免疫功能的影響

阮 鳴1，喻 斌2，周 峰1

1. 南京曉莊學(xué)院食品科學(xué)學(xué)院，江蘇 南京 211171 2. 南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210023

研究異黃芪甲苷（6--β--葡萄糖基-環(huán)黃芪醇）對(duì)體外淋巴細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞功能的影響。培養(yǎng)巨噬細(xì)胞，觀察異黃芪甲苷對(duì)細(xì)胞吞噬中性紅能力和白細(xì)胞介素-1（interleukin-1，IL-1）、IL-2、IL-6分泌功能的影響。MTT法檢測(cè)異黃芪甲苷對(duì)原代培養(yǎng)脾淋巴細(xì)胞增殖的影響，并用流式細(xì)胞術(shù)通過(guò)檢測(cè)CD3、CD19水平，明確異黃芪甲苷分別對(duì)T、B淋巴細(xì)胞增殖的影響。進(jìn)一步觀察異黃芪甲苷對(duì)樹(shù)突細(xì)胞增殖和分泌IL-6、IL-12 p70能力的影響。異黃芪甲苷低、中、高3個(gè)劑量組可升高巨噬細(xì)胞的吞噬功能和分泌IL-6的能力，降低CD3+的比例，升高CD19+的比例，糾正T、B淋巴細(xì)胞的紊亂。中、高劑量組可顯著升高IL-2水平，增加淋巴細(xì)胞的增殖，提高增殖指數(shù)（SI），促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cells，DC）分泌IL-6和IL-12 p70。高劑量組還可升高巨噬細(xì)胞分泌IL-1的能力。異黃芪甲苷的免疫促進(jìn)作用機(jī)制與促進(jìn)非特異性免疫吞噬，促進(jìn)抗原遞呈、淋巴細(xì)胞增殖和樹(shù)突細(xì)胞分泌能力增強(qiáng)有關(guān)。

異黃芪甲苷；6--β--葡萄糖基-環(huán)黃芪醇；免疫促進(jìn)；淋巴細(xì)胞；樹(shù)突細(xì)胞

補(bǔ)氣藥黃芪為常用中藥，來(lái)源于豆科植物蒙古黃芪(Fisch.) Bunge var.(Bunge) Hsiao或膜莢黃芪(Fisch.) Bunge的干燥根。該藥首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，具有“補(bǔ)氣升陽(yáng)、益固表衛(wèi)，利水消腫，托瘡生肌”之功效，素有“補(bǔ)藥之長(zhǎng)”的美譽(yù)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)黃芪具有多種藥理學(xué)活性，而其對(duì)機(jī)體免疫功能的促進(jìn)作用，尤其受到學(xué)者的普遍關(guān)注。已有研究表明黃芪對(duì)機(jī)體免疫的調(diào)控作用機(jī)制涉及促進(jìn)抗體和免疫因子的生成[1]，此外黃芪多糖和黃芪甲苷被認(rèn)為是其免疫促進(jìn)的主要活性成分[2]。

本課題組前期以黃芪藥渣為培養(yǎng)基，選擇靈芝為發(fā)酵菌種，進(jìn)行雙向固體發(fā)酵，并在發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到了6--β--葡萄糖基-環(huán)黃芪醇，進(jìn)一步證實(shí)該化合物是黃芪甲苷的生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物[3]。6--β--葡萄糖基-環(huán)黃芪醇在結(jié)構(gòu)上是黃芪甲苷脫去1分子木糖形成，為了表示2個(gè)化合物的區(qū)別和聯(lián)系，將6--β--葡萄糖基-環(huán)黃芪醇命名為異黃芪甲苷（圖1）。該化合物國(guó)內(nèi)暫無(wú)其他報(bào)道，但國(guó)外學(xué)者在其他品種黃芪中已分離獲得[4]，并通過(guò)免疫學(xué)研究發(fā)現(xiàn)異黃芪甲苷在促進(jìn)白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、IL-1β和IL-8分泌方面優(yōu)于黃芪甲苷[5]，但至今未見(jiàn)該成分對(duì)其他免疫學(xué)指標(biāo)影響的報(bào)道。鑒于此，為了更全面地了解異黃芪甲苷的免疫促進(jìn)作用，本研究通過(guò)整體和離體實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步深入研究異黃芪甲苷的作用機(jī)制。

圖1 異黃芪甲苷化學(xué)結(jié)構(gòu)

1 材料

1.1 動(dòng)物

ICR健康雄性小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～22 g，上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（滬）2013-0006。小鼠飼養(yǎng)在SPF級(jí)動(dòng)物房中，正常飲食。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（編號(hào)201701A006）。

1.2 藥品和試劑

異黃芪甲苷，實(shí)驗(yàn)室制備，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%；環(huán)磷酰胺，江蘇盛迪醫(yī)藥有限公司，批號(hào)15102825；無(wú)血清RPMI-1640培養(yǎng)液，美國(guó)Hyclone Laboratories公司，批號(hào)AB10190291；γ干擾素（interferon-γ，IFN-γ），北京晶美公司，批號(hào)171094；中性紅，北京索萊寶公司，批號(hào)506C041；IL-1、IL-2、IL-6 ELISA試劑盒，欣博盛生物科技有限公司；IL-6和IL-12 p70，上海碧云天生物技術(shù)研究所；抗小鼠分化簇19-異硫氰酸熒光素（cluster of differentiation 19-fluorescein isothiocyanate，CD19- FITC）、抗小鼠分化簇3-別藻藍(lán)蛋白（cluster of differentiation 3-allophycocyanin，CD3-APC），Biolegend公司；主要組織相容性復(fù)合體II-異硫氰酸熒光素（major histocompatibility complex II- fluorescein isothiocyanate，MHC II-FITC）試劑盒、分化簇11c-藻紅素（cluster of differentiation 11c-phycoerythrin，CD11c-PE）試劑盒，Ebioscience公司。

1.3 儀器

SynergyH1型全功能微孔板檢測(cè)儀（酶標(biāo)儀），美國(guó)BIOTEK公司；IX71型顯微鏡，日本奧林巴斯公司；MCO-5AC型CO2培養(yǎng)箱，日本三洋公司；FC 500MPL型流式細(xì)胞儀，美國(guó)Beckman Coulter公司；Allegra 64R型冷凍離心機(jī)，美國(guó)Beckman Coulter公司。

2 方法

2.1 異黃芪甲苷對(duì)巨噬細(xì)胞免疫功能的影響

2.1.1 巨噬細(xì)胞的制備、分組及給藥 取5只小鼠，ip無(wú)血清RPMI 1640培養(yǎng)液2 mL，15 min后頸椎脫臼處死小鼠，75%酒精浸泡15 min，收集腹腔內(nèi)液，1000 r/min離心5 min收集細(xì)胞，用含10%滅活胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度至1×106/L。取24孔培養(yǎng)板每孔加細(xì)胞懸液l mL，置CO2孵箱培養(yǎng)2 h，傾去上清液，用無(wú)酚紅RPMI 1640培養(yǎng)液洗去未貼壁細(xì)胞，培養(yǎng)孔內(nèi)為巨噬細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分5組，即對(duì)照組（PBS液）、陽(yáng)性對(duì)照組（1×105U/L IFN-γ）和終濃度為5、10、50 μmol/L的異黃芪甲苷組，各組分別加入1 mL含一系列濃度受試藥物的無(wú)酚紅RPMI 1640 10% FBS培養(yǎng)液。

2.1.2 中性紅實(shí)驗(yàn)檢測(cè)巨噬細(xì)胞吞噬功能 取上述培養(yǎng)24 h的細(xì)胞，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，每孔加入中性紅生理鹽水，使終質(zhì)量濃度為1 g/L，繼續(xù)培養(yǎng)20 min。PBS洗細(xì)胞3次，每孔加入細(xì)胞溶解液（乙酸-無(wú)水乙醇50∶50）1 mL，室溫放置2 h，待細(xì)胞溶解后，吸取上清液0.2 mL于酶標(biāo)儀上540 nm處測(cè)定吸光度（），以該值表示巨噬細(xì)胞吞噬功能的強(qiáng)弱。

2.1.3 巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-1、IL-2、IL-6的測(cè)定 取上述培養(yǎng)24 h的細(xì)胞培養(yǎng)上清液，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，按照IL-1、IL-2、IL-6的ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。

2.2 異黃芪甲苷對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

取“2.1.1”項(xiàng)同一批5只小鼠，用75%乙醇浸泡5 min，無(wú)菌操作取脾臟，用完全RPMI 1640培養(yǎng)基制備2.0×106/mL的脾細(xì)胞懸液，臺(tái)盼藍(lán)染料檢測(cè)細(xì)胞活力＞95%以上。實(shí)驗(yàn)分組同“2.1.1”項(xiàng)，將各組100 μL脾細(xì)胞懸液分別加入96孔培養(yǎng)板中，再分別加入刀豆蛋白A（ConA，終質(zhì)量濃度為5 μg/mL）及終濃度為5、10、50 μmol/L的異黃芪甲苷，總體積200 μL。對(duì)照組只加200 μL培養(yǎng)基。每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。加液后將培養(yǎng)板置于微量振蕩器上振蕩2 min混勻，于37 ℃含5% CO2培養(yǎng)箱中溫育72 h，然后用MTT法于酶標(biāo)儀490 nm處測(cè)。計(jì)算淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)（SI）。

SI＝異黃芪甲苷/ConA

2.3 異黃芪甲苷對(duì)淋巴細(xì)胞CD3+和CD19+比例的影響

2.3.1 分組和給藥 將40只ICR小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為對(duì)照組，模型組，異黃芪甲苷低、中、高劑量（10、20、40 mg/kg）組，每組6只。異黃芪甲苷組每日給藥1次，連續(xù)ig 1周。其他組ig等體積的生理鹽水，在第7天給模型組和異黃芪甲苷組小鼠ip 100 mg/kg的環(huán)磷酰胺。

2.3.2 細(xì)胞懸液制備和檢測(cè) 脫頸椎處死小鼠，分離小鼠脾臟，置于盛有預(yù)冷PBS的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，用研磨棒加適度力度輕輕研磨，于200目篩網(wǎng)濾過(guò)，收集細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液，以冷PBS洗滌細(xì)胞2次（1200 r/min，5 min），脾細(xì)胞以低滲法裂解紅細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞稀釋至1×107/mL。按上述方法收集淋巴細(xì)胞懸液100 μL（1×106/mL）于流式管中，加入抗小鼠CD3、CD19單克隆抗體各0.5 μg，混勻后，4 ℃避光放置30 min。然后用PBS洗滌2次（1200 r/min，5 min），經(jīng)流式細(xì)胞儀分析，檢測(cè)CD3+和CD19+細(xì)胞比例。

2.4 異黃芪甲苷對(duì)小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cells，DC）免疫功能的影響

2.4.1 DC的體外培養(yǎng) 取25只小鼠并采集小鼠的外周血單個(gè)核細(xì)胞5×108～5×109，加入淋巴細(xì)胞分離液，使成界面，其體積比為3∶2，1500 r/min，離心15 min，由上到下可分出4層：血清、單個(gè)核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞分離液、紅細(xì)胞。收集單個(gè)核細(xì)胞（中間云霧層）于45 mL離心管中，用生理鹽水稀釋，分別以1500、1000、800 r/min離心10 min，洗盡血小板后計(jì)數(shù)。以無(wú)血清RPMI 1640懸浮沉淀細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為5×106/mL，接種于培養(yǎng)瓶中，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中溫育2 h，輕輕吸出非貼壁細(xì)胞，貼壁細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，用完全RPMI 1640調(diào)整細(xì)胞密度為5×106/mL后接種于6孔培養(yǎng)板。

2.4.2 DC的鑒定 采用流式細(xì)胞術(shù)直接免疫熒光標(biāo)記法測(cè)定細(xì)胞免疫表型，在DC培養(yǎng)的第11天收集細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106/mL，每管取懸液100 μL，分別加入FITC標(biāo)記的CD11c及PE標(biāo)記的MHC II單抗各10 μL直接染色，充分混勻后置室溫下暗室反應(yīng)15 min。加PBS液，1000 r/min離心5 min，洗滌后以1%多聚甲醛固定進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，用CellQuest軟件計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞比率。

2.4.3 分組和給藥 細(xì)胞分為5組：異黃芪甲苷低、中、高劑量（5、10、50 μmol/L）組，對(duì)照組（等體積PBS）和陽(yáng)性對(duì)照組 [10 μg/mL脂多糖（LPS）]，各組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，于37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)24 h。

2.4.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) 收集經(jīng)藥物處理24 h后的DC細(xì)胞，以PBS洗2遍，于4 ℃下用10%的羊血清封閉細(xì)胞表面抗體15 min，然后加入FITC標(biāo)記的CD11c或MHC II單抗各10 μL直接染色，于4 ℃下溫育30 min，用PBS洗2遍，然后用PBS重懸細(xì)胞置于流式細(xì)胞儀上檢測(cè)。

2.4.5 DC細(xì)胞分泌功能檢測(cè) 取細(xì)胞培養(yǎng)上清液，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求檢測(cè)IL-6和IL-12 p70的濃度。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 異黃芪甲苷對(duì)巨噬細(xì)胞免疫功能的影響

由表1可見(jiàn)，與對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照組（IFN-γ）可見(jiàn)中性紅值、IL-2和IL-6水平顯著升高（＜0.05、0.01）；異黃芪甲苷低、中、高3個(gè)劑量組亦可見(jiàn)中性紅值、IL-6水平顯著升高（＜0.05、0.01），中、高劑量組IL-2水平顯著升高（＜0.05、0.01），高劑量組IL-1水平明顯升高（＜0.05）。以上結(jié)果提示異黃芪甲苷的免疫促進(jìn)效應(yīng)與提高巨噬細(xì)胞吞噬功能，增加白介素類免疫介質(zhì)的釋放有關(guān)。

3.2 異黃芪甲苷對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

與對(duì)照組比較，ConA可顯著促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖（＜0.01）。在ConA促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)上，異黃芪甲苷還可進(jìn)一步促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖（＜0.05），提高SI，其中、高劑量組可進(jìn)一步增加29%。結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 異黃芪甲苷對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬和分泌功能的影響(±s,n=6)

與對(duì)照組比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01control group

表2 異黃芪甲苷對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響(±s,n=6)

與對(duì)照組比較：**＜0.01；與ConA組比較：#＜0.05

**< 0.01control group;#< 0.05ConA group

3.3 異黃芪甲苷對(duì)淋巴細(xì)胞CD3+和CD19+比例的影響

T淋巴細(xì)胞表面表達(dá)CD3，不表達(dá)CD19，而B(niǎo)細(xì)胞相反。由表3和圖2所示，與對(duì)照組比較，模型組小鼠淋巴細(xì)胞CD3+比例顯著升高，CD19+比例顯著降低（＜0.01），提示環(huán)磷酰胺的免疫抑制作用與抑制B淋巴細(xì)胞有關(guān)。與模型組比較，異黃芪甲苷低、中、高3個(gè)劑量組均可降低CD3+的比例，升高CD19+的比例（＜0.05、0.01），使它們趨于正常，提示異黃芪甲苷具有糾正T、B淋巴細(xì)胞紊亂的作用。

3.4 異黃芪甲苷對(duì)小鼠DC免疫功能的影響

CD11c和MHC II普遍被認(rèn)為是DC的表面分子標(biāo)志，其高表達(dá)表明DC的增殖和成熟。由表4和圖3、4可見(jiàn)，與對(duì)組比較，LPS處理后不僅DC表達(dá)的CD11c和MHC II顯著增加，而且分泌的IL-6和IL-12 p70也顯著升高（＜0.05、0.01），提示LPS可明顯促進(jìn)DC的分化、成熟，提高其分泌功能。與對(duì)照組比較，異黃芪甲苷中、高劑量組CD11c和MHC II的表達(dá)水平差異不顯著，IL-6和IL-12 p70水平顯著升高（＜0.05），提示異黃芪甲苷對(duì)DC的影響主要是增強(qiáng)其分泌功能，而不是促進(jìn)其增殖和成熟。

表3 異黃芪甲苷對(duì)淋巴細(xì)胞CD3+和CD19+比例的影響(±s,n=6)

與模型組比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01model group

4 討論

芝芪菌質(zhì)（以黃芪藥渣為培養(yǎng)基，靈芝為發(fā)酵菌種，雙向固體發(fā)酵而成）作為本實(shí)驗(yàn)室的自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)產(chǎn)品，在促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、提高機(jī)體免疫方面已證明具有顯著優(yōu)勢(shì)。研究發(fā)現(xiàn)芝芪菌質(zhì)作為飼料添加劑能顯著促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)、提高肉雞機(jī)體的免疫力，其血清禽流感H5亞型抗體的滴度和雞新城疫抗體滴度分別比對(duì)照組升高2.5、2.4個(gè)[6]。此外，還能增加小鼠負(fù)重游泳的持續(xù)時(shí)間，提高運(yùn)動(dòng)后血清尿素氮水平、肝糖元含量及平均體質(zhì)量，表現(xiàn)出較好的抗疲勞及促生長(zhǎng)作用[7]。

1998年，異黃芪甲苷首次從分離得到[8]，隨后又相繼在[9]、[10]、[11]、species endemic from Egypt[4]被發(fā)現(xiàn)，然而國(guó)內(nèi)未曾從植物中分離得到。Yesilada等[5]研究報(bào)道，異黃芪甲苷和黃芪甲苷均具有顯著的生物活性，如在植物血凝素（phytoheagglutinin，PHA）刺激下，它們均能顯著誘導(dǎo)IL-2的生成，活性指數(shù)分別為80.9%和66.0%，顯著高于對(duì)照組的51.1%，并且在LPS刺激下，異黃芪甲苷誘導(dǎo)產(chǎn)生IL-1β和IL-8的能力甚至強(qiáng)于黃芪甲苷。本實(shí)驗(yàn)獲得的異黃芪甲苷來(lái)源于以黃芪藥渣為培養(yǎng)基進(jìn)行固體發(fā)酵獲得的芝芪菌質(zhì)產(chǎn)物。前期研究已對(duì)發(fā)酵時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵25 d和30 d的芝芪菌質(zhì)免疫功能增強(qiáng)效果最為明顯[12]。此外還對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物的不同極性部分進(jìn)行了免疫活性篩選，發(fā)現(xiàn)芝芪菌質(zhì)水提液、水浸液和40%乙醇洗脫液對(duì)免疫功能的促進(jìn)作用最為明顯[13]。而本次實(shí)驗(yàn)不僅進(jìn)一步明確了該發(fā)酵產(chǎn)物的免疫活性物質(zhì)基礎(chǔ)為異黃芪甲苷，還通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證明該成分的免疫促進(jìn)作用機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)異黃芪甲苷低、中、高3個(gè)劑量組可提高巨噬細(xì)胞吞噬功能和分泌IL-6的能力，降低CD3+的比例，升高CD19+的比例；中、高劑量組可顯著提高IL-2含量，增加淋巴細(xì)胞的增殖，提高SI；高劑量組還可提高巨噬細(xì)胞分泌IL-1的能力。免疫低下往往與T、B淋巴細(xì)胞比例密切相關(guān)。最近有研究發(fā)現(xiàn)免疫抑制劑環(huán)磷酰胺和氫化可的松均可導(dǎo)致CD19+與CD3+的比值降低[14]，這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，而異黃芪甲苷3個(gè)劑量均可使它們的比值恢復(fù)，通過(guò)糾正淋巴細(xì)胞比例，展示了其較好的特異性免疫促進(jìn)作用。

圖2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD3+、CD19+比例

表4 異黃芪甲苷對(duì)小鼠DC增殖和分泌功能的影響(±s,n=6)

與對(duì)照組比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01control group

圖3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD11c含量

圖4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MHCII含量

1973年Steinman和Cohn首次發(fā)現(xiàn)DC，其對(duì)抗原的攝取、加工和遞呈作用對(duì)于特異性免疫的形成至關(guān)重要[15]。CD11c和MHC II是DC的生物標(biāo)志物，并且成熟后表達(dá)進(jìn)一步增加，故常常用于檢測(cè)DC的增殖和成熟狀態(tài)[16]。

由于DC有許多突起結(jié)構(gòu)，后者大大增加了表面積，從而允許其與周圍大量細(xì)胞（如T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、上皮細(xì)胞等）密切接觸。DC活性極大，一個(gè)成熟的DC可刺激100～3000個(gè)T細(xì)胞，并且即使沒(méi)有明顯的感染或炎癥，它們也可以通過(guò)上皮細(xì)胞的緊密連接來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)抗原的捕獲[17]。而其通過(guò)Toll樣受體（Toll-like receptors，TLRs）分泌的IL-6和IL-12對(duì)T細(xì)胞活化的誘導(dǎo)具有重要意義，也是反映其活化功能的關(guān)鍵指標(biāo)之一[18-19]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)異黃芪甲苷雖然對(duì)DC的增殖沒(méi)有顯著促進(jìn)作用，但中、高劑量組可顯著促進(jìn)DC分泌IL-6和IL-12 p70，從而促進(jìn)T細(xì)胞活化，提高特異性免疫功能。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Effect of iso-astragaloside VI on immunologic function of lymphocytesand dendritic cells

RUAN Ming1, YU Bin2, ZHOU Feng1

1. School of Food Science, Nanjing Xiaozhuang University, Nanjing 211171, China 2. School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China

To study the effect of iso-astragaloside VI (6--β--glucosyl-cycloastragenol) on the function of lymphocytesand dendritic cells.The macrophages were cultured, and the effects of iso-astragaloside VI on helping to devour neutral red and secrete IL-1, IL-2 and IL-6 were also observed. Its effects on proliferating of primary cultured spleen lymphocytes were measured, along with the measurements of CD3 and CD19 by flow cytometry to determine its effects on T and B lymphocytes proliferations. In addition, its effects on promoting the proliferation and secretion of IL-6 and IL-12 p70 in dendritic cells (DC) were also observedThe three groups (low, medium and high doses) of iso-astragaloside VI increased the abilities of macrophages on phagocytosis and secretion of IL-6, improved T and B lymphocytes ratios by decreasing CD3+and enhancing CD19+. Medium and high doses of iso-astragaloside VI elevated IL-2 level, lymphocyte proliferation and SI and promoted secretion of IL-6 and IL-12 p70 from DC. Additionally, the high dose group had the ability to increase the production of IL-1.The potential mechanisms of iso-astragaloside VI on immunoenhancement can promote nonspecific immune phagocytosis, antigen presentation, lymphocyte proliferation and DC secretion.

iso-astragaloside VI; 6--β--glucosyl-cycloastragenol; immunoenhancement; lymphocyte; dendritic cells

R285

A

0253 - 2670(2021)01 - 0196 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.01.023

2020-03-15

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2019YFC1605800）；國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81973726）；江蘇省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（BK20150088）

阮 鳴（1979—），女，博士，副教授，主要從事中藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究。Tel: (025)86178311 E-mail: 1169195814@qq.com

[責(zé)任編輯 潘明佳]