酶聯免疫吸附法與冷凝集試驗在早期肺炎支原體感染中的診斷比較

孫娟子，孫蘇娟，白嬌紅，李園園

（1.河南科技大學第一附屬醫院 檢驗科，河南 洛陽471000 2.洛陽市婦女兒童保健中心 檢驗科，河南 洛陽 471000）

支原體肺炎是由肺炎支原體感染引起的一種流行性疾病，多發于兒童，臨表現為發熱、咳嗽、咽痛、頭痛等癥狀［1］。肺炎支原體主要通過呼吸道飛沫方式傳播，具有一定的潛伏性，在早期并無明顯臨床癥狀，導致早期診斷難度較大［2］。實驗室檢查是目前臨床檢測早期肺炎支原體感染的主要手段，以往，臨床常采用冷凝集試驗（CAT）進行診斷，但其操作較為復雜。而酶聯免疫吸附法（ELISA）為近年來實驗室檢查常用的檢測方法之一，具有操作簡單、檢測時間短等優點。基于此，本研究選旨在分析ELISA 在早期肺炎支原體感染診斷中的應用價值，以為臨床提供參考。具體信息如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018 年2 月至2019 年12 月河南科技大學第一附屬醫院收治的80 例疑似為肺炎支原體感染患兒作為研究對象，其中男37 例，女43 例；年齡2～8 歲，平均（5.36±1.21）歲；病程4～10 d，平均（7.02±2.05）d。本研究經河南科技大學第一附屬醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 入選標準

納入標準：①X 線檢查顯示肺部存在片狀陰影；②支原體培養陽性，白細胞計數（WBC）≥12.0×109，紅細胞沉降率（ESR）≥15 mm/h；③均行CAT 及ELISA 兩種方法檢測患者；④患兒監護人簽署知情同意書。排除標準：①伴有先天性心臟病者；②凝血功能障礙者；③過敏體質者；④合并傳染性疾病者；⑤合并肝、腎等器官功能衰竭者。

1.3 方法

采集樣本：采集患兒空腹靜脈血2 mL，以3 000 r/min 轉速離心10 min，取上層清液保存待檢。檢測方法：①ELISA：使用上海市海天醫療器械生物有限公司生產的肺炎支原體免疫球蛋白M（IgM）抗體試劑盒進行檢測，檢測的具體步驟嚴格按照說明進行，若患兒血清標本吸光度值與標準品的吸光度值的比值≥1.1，即可判定為陽性。②CAT：常溫下，使用患兒自身紅細胞與5 倍0.9%氯化鈉溶液配置人紅細胞懸液，取相同10 支試管，分別標上1～10 號，分別加入0.1 mL 血清與0.9%氯化鈉溶液，并搖晃使兩者融合，然后吸取第1 支試管0.1 mL 放置第2 支試管中，按照此方法加至第9 支試管，以第10 支試管為對照，分別在10 支試管中加入0.1 mL 配置好的紅細胞懸液，放置在4℃下冷置60 min，若出現紅細胞凝集，立即加入37℃水浴中，若凝集消失即可判定為陽性，滴度>1∶32 即有參考意義。

1.4 評價指標

以痰培養檢查結果作為金標準，記錄ELISA與CAT 檢測結果，并計算ELISA 與CAT 診斷該疾病的準確度［（a+b）/n］、靈敏度［a/（a+c）］、特異度［d/（b+d）］、陽性預測值［a/（a+b）］、陰性預測值［d/（c+d）］；其中a 為ELISA 與CAT 檢測結果與痰培養均為陽性；b 為ELISA 與CAT 檢測結果為陽性，痰培養為陰性；c 為ELISA與CAT 檢測結果為陰性，痰培養為陽性；d 為ELISA 與CAT 檢測結果與痰培養均為陰性；n為總例數。

1.5 統計學方法

采用SPSS 24.0 軟件進行數據處理，計數資料用百分率（%）表示，采用χ2檢驗，采用Kappa一致性檢驗分析CAT、ELISA 診斷肺炎支原體感染與痰培養的一致性，Kappa≥0.74 提示一致性好，0.4～0.74 提示一致性一般，<0.4 提示一致性差。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ELISA 診斷早期肺炎支原體感染的效能分析

本研究80 例患兒中，有58 例痰培養結果為陽性，占比72.50%（58/80），22 例痰培養結果為陰性，占比27.50%（22/80）。CAT 診斷早期肺炎支原體感染的準確度、靈敏度、特異度，陽性預測值、陰性預測值分別為81.25%（65/80）、86.21%（50/58）、68.18%（15/22）、87.72%（50/57）、65.22%（15/23）。ELISA 診斷早期肺炎支原體感染的準確度、靈敏度、特異度，陽性預測值、陰性預測值分別為91.25%（73/80）、96.55%（56/58）、77.27%（17/22）、91.80%（56/61）、89.47%（17/19），高于CAT。見表1。

2.2 一致性分析

經Kappa 一致性檢驗結果顯示，CAT 診斷肺炎支原體感染與痰培養的一致性一般，Kappa 值為0.536；ELISA 診斷肺炎支原體感染與痰培養的一致性較好，Kappa 值為0.771，優于CAT。

3 討論

肺炎支原體通過空氣中的飛沫傳播后可侵入患兒呼吸道黏膜，并大量增殖，引起支氣管紅細胞增多、局部水腫，進而發展為支原體肺炎［3］。支原體肺炎不僅會對患兒呼吸系統造成損傷，且會引起腎炎、心肌炎、腦膜炎等其他系統并發癥，對患兒生命健康造成一定影響，若未得到及時治療，將嚴重影響患兒預后［4］。因此，尋找準確、快捷的方式診斷該疾病具有重要意義。

臨床用于肺炎支原體感染輔助診斷的監測方法較多，包括明膠顆粒凝集法、CAT、ELISA、金標斑點法、支原體培養法等［5］。其中明膠顆粒凝集法診斷肺炎支原體感染的敏感性最高，且檢測方法簡單，不需使用儀器設備，但該方法檢測試劑成本較高，無法在臨床得到廣泛推廣及應用；金標斑點法敏感度較低，臨床很少采用此方法，痰培養為診斷肺炎支原體感染的金標準，但由于其培養條件苛刻，且培養時間較長（約為6 周），而患兒的病情需及時治療，導致無法盡早診斷肺炎支原體感染，導致臨床早期快速鑒別診斷受限［6-7］。而CAT、ELISA 為目前臨床診斷肺炎支原體感染常用的兩種方法，具有檢測時間短、操作簡單特點，但臨床對于哪種方法更適合在臨床推廣尚存在一定爭議［8］。本研究結果顯示，ELISA診斷肺炎支原體感染的準確度、靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值均高于CAT，且經一致性檢驗結果顯示，ELISA 診斷肺炎支原體感染與痰培養的一致性優于CAT，提示ELISA 可作為臨床診斷早期肺炎支原體感染的首選方式，以提高診斷準確度，降低漏診、誤診率。

綜上所述，ELISA 檢測診斷早期肺炎支原體感染具有較高的臨床價值，可為臨床早期治療提供可靠的參考依據。