分析流行性感冒病毒的微生物檢驗價值

武勝科

[摘要]目的：研究微生物檢驗在流行性感冒病毒檢測中的價值。方法：選取當?shù)剌爡^(qū)醫(yī)院2019年4月至2020年4月前來就診的148例表現(xiàn)流行性感冒癥狀病人進行微生物檢驗。觀察檢驗結(jié)果。結(jié)果：經(jīng)檢驗共100例患者確診，陽性率67.57%。結(jié)論：對流行性感冒患者進行微生物檢驗?zāi)苡行z出病原體，該檢驗方式具有顯著價值。

[關(guān)鍵詞]微生物檢驗;流行性感冒;流感病毒

[中圖分類號]R511.7;R446.5

[文獻標識碼]A

[文章編號]2096-5249（2021）24-0176-02

流行性感冒由流感病毒引起，該疾病在春季、冬季發(fā)病率較高。患者感染后表現(xiàn)出發(fā)熱、肌肉酸痛、全身無力、咳嗽等癥狀[1]?；颊吒腥竞?至14天內(nèi)可自愈，但也有重癥病人生命受到威脅[2]。經(jīng)微生物檢驗?zāi)軌蛎鞔_致病原因，為此本研究通過微生物檢驗技術(shù)進行檢測，分析其價值。

1資料與方法

1.1一般資料選取當?shù)剌爡^(qū)醫(yī)院2019年4月至2020年4月前來就診的148例表現(xiàn)流行性感冒癥狀病人為對象。男性70例，女性78例，年齡23-65歲，平均31.91±3.75歲。兩組基本資料具有可比性（P>0.05）。

1.2方法采集148例疑似患者咽拭子、鼻拭子等樣本，進行微生物檢驗。具體如下：（1）樣本處理：1在病人癥狀早期或者恢復(fù)階段采集血清樣本。采集份數(shù)兩份，樣本置于冰壺中保存以待檢測。48h內(nèi)接種，若不能在規(guī)定時間內(nèi)接種需將樣本置于低溫環(huán)境下保存。2生理鹽水處理棉拭子，將其放置5min。采集漱液，用無菌燒杯保存。3樣液充分震蕩后在4°C條件下靜置5至10min，使其沉淀。4樣液沉淀后取3ml上清液于燒杯中，添加青霉素以及鏈霉素。在4°C條件下靜置2h，準備接種。（2）培養(yǎng)：將病毒分離并進行培養(yǎng)。動物分離培養(yǎng)成本高，細胞、雞胚培養(yǎng)是最常見方法。1雞胚培養(yǎng)。將標本于羊膜腔、雞胚尿囊腔中進行接種，接種前需選擇日齡適當?shù)慕臃N物。孵育溫度控制在35°C，時間為2至3天。每天翻卵觀察孵育情況，頻率2次/d，若雞胚在2小時內(nèi)死亡內(nèi)死亡則應(yīng)當放棄。孵育成功后收集羊水以及尿囊液，開展血凝試驗。若實驗結(jié)果為血凝陽性，利用特異性抗體開展抑制試驗。通過抑制試驗鑒別病毒的類型、亞型。若血凝試驗結(jié)果為陰性，需要再一次在雞胚中盲傳。2細胞培養(yǎng)。將標本于傳代狗、猴的腎細胞之以及原代人的胚腎中進行接種。于35°C條件下進行孵育，時間為10至14天。孵育期間每天觀察培養(yǎng)情況，有無病變出現(xiàn)。若病變出現(xiàn)應(yīng)當開展血凝試驗。若無病變出現(xiàn)則將當每隔2小時進行檢測。若孵育時間周期內(nèi)依然無病變出現(xiàn)應(yīng)當開展盲傳一代。（3）病毒鑒定：在細胞聚集過程中，不同流行性感冒病毒經(jīng)對其對應(yīng)的紅細胞敏感。利用特異性抗體對血凝試驗為陽性結(jié)果的分離株進行抑制試驗。鑒別病毒的類型、亞型。

1.3觀察指標本研究觀察指標為微生物檢驗結(jié)果。記錄樣本檢出的陽性率，陽性率=陽性例數(shù)/總樣本數(shù)*100%。

1.4統(tǒng)計方法SPSS17.0軟件分析數(shù)據(jù)，率計數(shù)資料采用c2檢驗，并以率（%）表示，（P<0.05）表示數(shù)據(jù)差異明顯，有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

經(jīng)檢驗共100例患者確診，陽性率67.57%，具體結(jié)果如表1所示。

3討論

流行性感冒在春冬季節(jié)較為常見，該疾病任何年齡皆可見，幼兒、體質(zhì)薄弱者感染風險較高。流感易控制，治療難度低，且多數(shù)病人可自愈，但重癥流感對病人的生命健康有危險隱患[3]。學(xué)齡前兒童是重癥流感危險人群，該疾病也是導(dǎo)致6個月以下嬰兒死亡的原因之一。此外老年患者、合并基礎(chǔ)疾病人群感染流感后病情加重，促進基礎(chǔ)疾病的發(fā)展。Frederick等人[4]通過實驗證實Alere試驗、Liat試驗均不能同時確保對甲流、乙流具有較高的敏感度，早期診斷有利于開展對癥治療。通過微生物檢驗?zāi)軌蛎鞔_致病原因，流行性感冒病毒感染是引起流行性感冒的重要原因，飛沫傳播是流感病毒的主要傳播方式。飛沫中攜帶流感病毒，而其在空氣中能夠生存約30分鐘。當與病人處于同一環(huán)境或接觸其私人物品后流感病毒會從口鼻、眼睛黏膜處經(jīng)呼吸系統(tǒng)進入人體。流感病毒侵犯呼吸道黏膜的上皮細胞，因此病人在感染后會表現(xiàn)出呼吸道反應(yīng)。

流感病毒分A、B、C三種類型，A型病毒容易引起抗原性發(fā)生變異，B型病毒低致病性，通常不會造成流感大面積的暴發(fā)，C型病毒抗原性穩(wěn)定，不會造成流感大面積的暴發(fā)，但嬰幼兒、免疫能力低下人群是患病高危人群[5]。流感病毒屬于RNA病毒。其具有包膜大多數(shù)呈球形。新分離流感病毒形態(tài)也可表現(xiàn)為絲狀。核心、基質(zhì)蛋白以及外層包膜是病毒構(gòu)成。核酸、核蛋白（NP）組成其核心。在其核心中存儲了病毒信息遺傳物、酶。病毒信息遺傳物為單鏈RNA，其節(jié)段中能夠編碼結(jié)構(gòu)、功能蛋白。A型、B型、C型流感病毒中前兩種病毒的基因組可分成8個節(jié)段，而后者可分成7個節(jié)段。這一特征導(dǎo)致了病毒復(fù)制過程中發(fā)生基因重組的幾率較高，易產(chǎn)生新病毒株。此外不同亞型的病毒對同一細胞的敏感性存在差異，因此在微生物檢驗的病毒分離培養(yǎng)環(huán)節(jié)中培養(yǎng)結(jié)果會受到影響。NP包裹病毒RNA的每一個節(jié)段，其作為病毒衣殼表現(xiàn)為對稱的螺旋形狀?；颊弑涣鞲胁《靖腥竞笈R床癥狀較多，以發(fā)熱、畏寒、肌肉酸痛、頭痛、咳嗽等癥狀為主。流感具有易傳染、發(fā)病率、治療難度低的特點。0至4°C條件下流行性感冒病毒存活時間較長，可達數(shù)周之久，為此春季、冬季為流感高發(fā)季。病毒在56°C條件下生存之間不超過30分鐘，耐熱性差，同時對紫外線較為敏感。而在-70°C的低溫環(huán)境中流行性感冒病毒能夠長期生存。患者在感染后癥狀表現(xiàn)的時間存在差異性，這是由于病人的免疫能力、身處環(huán)境以及侵入機體的病毒量影響潛伏期[6]。免疫能力低下的人群更容易患病且更容易表現(xiàn)出癥狀。病毒經(jīng)呼吸道進入機體，會感染呼吸系統(tǒng)上皮細胞。在其進入機體后若免疫體系統(tǒng)不能及時分泌抑制物將其消滅將會引起細胞變形，使其進入臨近細胞并產(chǎn)生子代病毒，因此臨床中有部分病人腸粘膜遭受損傷。根據(jù)病人體質(zhì)、病毒侵入量等潛伏期通常在1至4天，雖然流感疾病容易控制且治愈率高，但若發(fā)展為重癥、危重癥則將威脅生命，嬰幼兒、慢性基礎(chǔ)疾病、老年人等患病后風險更大。臨床中有大量關(guān)于微生物檢驗技術(shù)檢測流感病毒的研究，均證實該項技術(shù)的可靠性。韓志國等人[7]提出經(jīng)微生物檢驗對病毒的分離培養(yǎng)的分離鑒定效果更好，該檢測技術(shù)優(yōu)于PCR核酸檢測。同時通過微生物檢驗還能進行抗原性分析，為臨床治療提供了可靠的依據(jù)。邢軍華團隊[8]表明流感病人傳染性強，容易從呼吸道侵入，經(jīng)微生物檢查能夠快速確診，對病人進行對癥治療。在邢軍華團隊研究中疑似病人經(jīng)微生物檢驗陽性率高達67.86%。其團隊證實了微生物檢驗的價值。須注意的是機體在感染流感病毒后的排毒時間約為5天，感染后的半天至1天內(nèi)排毒量達到最高[9]。因此病人在出現(xiàn)流行性感冒癥狀后應(yīng)當早期進行診斷采集樣本，確保病毒存活率。同時采樣時間與收樣時間之間間隔過長會影響病毒的培養(yǎng)分離效果，因此醫(yī)院在采樣后應(yīng)當及時培養(yǎng)，患者需要提高就診意識盡早到院檢查，提高診斷效率。

研究證實，對流行性感冒患者進行微生物檢驗?zāi)苡行z出病原體，確?；颊咴缙诖_診，及時治療，該檢驗方式具有顯著價值。

參考文獻

[1]趙佩娟，蔡宏津.流行性感冒的快速診斷檢驗[J].感染控制雜志，2019，29（1）：23-28.

[2]韓志國，薛娜，樊旭成，等.流行性感冒病毒細胞培養(yǎng)陽性相關(guān)影響因素分析[J].微生物學(xué)免疫學(xué)進展，2018，46（02）：56-59.

[3]王旭，馬可佳，江云飛，等.流行性感冒病毒的微生物檢驗[J].中國衛(wèi)生標準管理，2016，7（07）：157-158.

[4] Frederick， S， Nolte， et al. Direct Comparison of Alere i and cobas Liat Influenza A and B Tests for Rapid Detection of Influenza Virus Infection[J]. Journal of Clinical Microbiology， 2016， 54（1）： 2763- 2766.

[5]田鶴，張進強，郭家胤，等.2015年至2018年兒童流行性感冒樣疾病的病毒病原學(xué)監(jiān)測[J].中華傳染病雜志，2020，38（08）：489-494.

[6] BruningAHL，LeeflangMMG，VosJMBW，etal.RapidTestsfor Influenza， Respiratory Syncytial Virus， and Other Respiratory Viruses： A Systematic Review and Meta-analysis[J]. Clinical Infectious Diseases An Official Publication of the Infectious Diseases Society of America， 2017， 8（6）： 6-6.

[7]劉述華.流行性感冒病毒的微生物檢驗[J].醫(yī)學(xué)信息，2013，26（08）：521-521.

[8]邢軍華，文蔚，尹明.流行性感冒病毒的微生物檢驗要點分析[J].中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2020，12（19）：101-103.

[9]張麗杰，宋會榮.流行性感冒病毒的微生物檢驗要點分析[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2019，19（02）：161+168.