厚樸炮制藥材的GC-MS聯用技術快速鑒別研究

邱常萍

【摘要】目的：探討與研究厚樸炮制藥材的氣相色譜-質譜（GC-MS）聯用技術快速鑒別的方法與效果。方法：建立厚樸炮制藥材中厚樸酚的氣相色譜-質譜聯用測定方法，并對5批生厚樸和6批姜厚樸的相似度進行分析。結果：通過多次實驗得出了最好的鑒別條件，具體如下。將萃取池的溫度一直保持在50℃的溫度，在壓力是20 Mpa的環境下試驗，解析時溫度控制在40℃;動態萃取環節耗時1小時15分鐘，靜態萃取環節耗時10 min，二氧化碳的流量控制為每分鐘1.0 L。生厚樸和姜厚樸所測的厚樸酚在實驗濃度范圍內線性關系良好，生厚樸和姜厚樸中厚樸酚的精密度與穩定性RSD值分別為0.29%和0.27%、0.59%和1.35%;平均回收率均為98.7%和102.8%。6批姜厚樸樣品相似度在0.71-0.84之間，5批生厚樸相似度在0.84～0.96之間。結論： GC-MS 聯用技術在厚樸炮制藥材的應用能快速鑒別生厚樸和姜厚樸，具有很高的精密度、穩定性與加樣回收率，具有很好的實際使用價值。

【關鍵詞】氣相色譜-質譜聯用技術;厚樸;炮制藥材;厚樸酚;快速鑒別

【中圖分類號】R943【文獻標識碼】A 【文章編號】2096-5249（2021）20-0045-02

厚樸（Magnolia O?cinalis Rehd）為臨床上常用的中藥組方藥物，可用于治療消化道感染、便秘、消化不良等疾病[1]。中藥炮制是根據中醫藥相關的理論、各個藥材自身的特性以及對藥物的需求情況所實施的一種制藥技術，中藥材炮制的目的在于“增效減毒”[2]。但是在炮制過程中，很多中藥藥材容易發生結合、水解、絡合等不合理的反應，導致中藥的藥效受到較大的影響，進而影響服用此藥的患者的治療效果，甚至給其帶來很大的安全隱患[3]。厚樸的主要炮制方法為姜制，姜制可以加強其溫中下氣的作用，也可發發揮去油、去除刺激性、消除過敏等作用[4]。氣相色譜-質譜（Gas Chromatography-Mass Spectrometer，GC-MS）聯用具有靈敏度高、前處理簡單、消耗溶劑少、分辨率佳等優點，當前在藥物鑒定中應用比較多。本文探討了厚樸炮制藥材的 GC-MS 聯用技術快速鑒別方法與效果。

1資料與方法

1.1一般資料

使用賽默飛世爾科技公司的TRACE 1300型號的氣相色譜儀（色譜柱是VF-waxms型的色譜柱，長度是30[u3]cm，內徑為0.32μm）、美國應用生物系統公司生產的型號為3200 QTRAPTM 的質譜儀（其中含有 Turbo V離子源）、梅特勒公司生產的 TOLEDO XS105DV 電子天平。

使用的甲酸和乙酸為色譜純，整個實驗使用的水均為純凈水，其他試劑均為分析純。厚樸酚（購于北納生物有限公司），5批生厚樸和6批姜厚樸樣品購于當地中藥批發市場。1.2氣相色譜-質譜聯用條件

氣相色譜條件：載氣利用氦氣來進行，注意純度要很高才可以，進入樣品的地方將溫度調整為220℃，傳輸線調整為230℃的溫度，樣品的流速設置為每分鐘2.50 mL。進樣的方式為不分流，進樣量1μL，離子源溫度調整為200℃，設置升溫程序是開始溫度在100℃，3 min后，不斷升溫，一分鐘升高15℃，直到200℃，維持10 min。

質譜的條件：電噴霧離子化源，正離子監測模式，采集范圍50～500 m/z。

1.3樣品處理

利用精密的天平準確稱取厚樸酚對照品2.50 mg，先用少量的醇溶解后，在繼續加醇直到10 mL 的刻度線為止，作為標準品溶液的儲備液，濃度是250?m。用粉碎機將生厚樸和姜厚樸打成粉末，選擇3號目篩來過篩，準確稱取0.04 g的粉末放置到容量是50 mL的試管中，往里倒入甲醇10 mL，之后再超聲15min后，在轉數為1000轉的離心機中離心后分離上清液，之后利用0.45?m膜再次過濾，然后行 GC-MS分析。

（1）精密度試驗。精密量取較低質量濃度的生厚樸和姜厚樸溶液10μL，進行色譜-質譜分析，連續重復3次，記錄各峰面積，計算4種糖皮質激素的RSD值。

（2）穩定性試驗。精密量取較低質量濃度的生厚樸和姜厚樸溶液10μL，分別在0、2、4、8 h 按實驗條件進樣，記錄各峰面積。

（3）加樣回收率試驗。精密稱取已知含有量的生厚樸和姜厚樸，平均分為3組，精加高質量濃度對照品混合溶液1 mL、2 mL 和6 mL，平行操作處理，使其成低、中、高質量濃度的加標溶液，進樣10μL，記錄各峰面積。

（4）樣品含量測定。共檢查了5批生厚樸和6批姜厚樸，比較樣品與對照品中各色譜峰的色譜-質譜行為。

1.4觀察指標

研究鑒別厚樸炮制藥材的氣相色譜-質譜（GC-MS）技術最佳條件并對5批生厚樸和6批姜厚樸的相似度進行分析。1.5統計學方法

采用 SPSS021.0分析。計數資料用（%）表示，比較采用χ2檢驗;計量資料用（±s）表示，比較用 t檢驗。當 P<0.05表示有顯著差異。

2結果

2.1 GC-MS條件優化

通過多次實驗得出了最好的鑒別條件，將萃取池的溫度一直保持在50℃的溫度，在壓力是20 Mpa的環境下試驗，解析時溫度控制在40℃;動態萃取環節耗時1小時15分鐘，靜態萃取環節耗時10 min，二氧化碳的流量控制為每分鐘1.0 L。

2.2標準曲線方程

將峰面積與其相對應的組分質量濃度進行線性回歸，生厚樸和姜厚樸所測的厚樸酚在實驗濃度范圍內線性關系良好（R2≥0.99），見表1。

2.3精密度、穩定性與加樣回收率結果

生厚樸和姜厚樸中厚樸酚的精密度與穩定性RSD值分別為0.29%和0.27%、0.59%和1.35%。厚樸酚在生厚樸和姜厚樸中平均回收率均為98.7%和102.8%，見表2。

2.4鑒別分析

6批姜厚樸樣品相似度為0.71～0.84，5批生厚樸相似度為0.84～0.96。

3討論

隨著國內外社會對天然藥物需求日益擴大，也為我國中藥的發展提供了廣闊而美好的發展空間。但是現階段我國對于中藥的炮制過程的標準化以及質量控制方面的工作情況還不是很健全，因此各種藥材的質量情況有好有壞，嚴重影響者中藥的使用[5]。如今已經有很多已學者等對厚樸的炮制方法及工藝流程進行深入研究，目的是使其更加規范，但是多集中于提取方法的優化、檢測方法的改善，很少進行厚樸炮制藥材的快速鑒別[6]。厚樸的組成成分很多，包括揮發油成分可達到幾十種、生物堿類物質、多種酚類物質以及其他，藥理作用包括抗潰瘍、緩解疼痛、抵抗病毒、細菌等侵犯，另外對治療腫瘤也發揮一定的作用。厚樸酚為厚樸的主要生物活性成分，對機體胃腸運動功能有正面促進影響，且能刺激成骨細胞功能并抑制骨疏松，也具有保護神經系統免受損害的功能。中藥炮制當前在藥學分析上比較常見，其主要作用如下。（1）潔凈藥物、保證用量;（2）矯正不良氣味以利于服用;（3）利用藥物貯藏及保存療效;（4）便于調劑和制劑，保證藥物質量;（5）改變藥性和功能，提高藥物療效;（6）降低或消除毒副作用，保證中藥的安全性。不過受炮制溫度、輔料、炮制工藝的影響，其實際應用效果也不同。GC-MS 聯用技術具有靈敏度高、分辨率佳等優點，且對于樣本的處理比較簡單迅速，可實現對目標化合物進行準確迅速的定性分析[7]。本次研究通過多次實驗得出了最好的鑒別條件，將萃取池的溫度一直保持在50℃的溫度，在壓力是20 Mpa的環境下試驗，解析時溫度控制在40℃;動態萃取環節耗時1小時15分鐘，靜態萃取環節耗時10 min，二氧化碳的流量控制為每分鐘1.0 L。

《中國藥典》厚樸項下炮制品為姜厚樸，姜厚樸的目的是為了去除刺激性，消除過敏與去油，增強寬中和胃之功效。不過炒干的程度有所不同，姜有鮮干之分，用量不盡相同，有炒干、炒至深黃色，微帶焦斑、炒至褐色等，厚樸藥材切制規格及凈制中的個別環節也有不同之處[8]。傳統的色譜技術具有良好的重現性及定性定量能力，但無法對藥材直接分析，且方法耗時耗力[9]。 GC-MS 聯用技術可應用于檢測小分子與易揮發化合物，可對目標標記物進行準確的定性分析[10]。并且該方法具有潛在信息的強大挖掘能力，提高了分離效率和掃描速度，有利于對已知的和未知的標記物進行模式判斷分析。本研究顯示 GC-MS 聯用技術在厚樸炮制藥材的應用能使得生厚樸和姜厚樸中的厚樸酚能得到良好的分離，在實驗濃度范圍內線性關系良好，平實驗方法精密度符合要求，且伴隨有穩定性良好。同時本研究檢測了11個批次的生厚樸與姜厚樸相似度計算等都可將生藥材與姜制品分為兩類，鑒別的準確性較好，并且速度也很快。當然研究依然存在一些不足，沒有對不同產地的厚樸炮制藥材進行分析，也沒有進行更加詳細的精密度、穩定性分析，將在后續研究中進行探討。

綜上所述， GC-MS 聯用技術在厚樸炮制藥材的應用能快速鑒別生厚樸和姜厚樸，具有很高的精密度、穩定性與加樣回收率，具有很好的實際使用價值。

參考文獻

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（收稿日期：2021-03-23）