一株抗氧化酵母的分離、鑒定及抗氧化轉錄譜分析

王夢飛，朱 紅，焦宏亮,周 華，蔡 恒

(南京工業大學 生物與制藥工程學院，江蘇 南京 211800)

ROS作為信號因子調控細胞多個代謝過程，同時它又是造成氧化損傷的“罪魁禍首”。因此，細胞內ROS水平的穩態受多種途徑嚴格控制。為維持ROS處于較低水平，細胞發展了酶系和非酶系兩大類抗氧化途徑：酶系包括超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶與硫氧還蛋白過氧化物酶(PRX)等[9]；非酶系如抗壞血酸(Vc)、還原型谷胱甘肽(GSH)以及一些微量元素(Se、Zn等)。哺乳動物和酵母抗氧化反應是相似的，且酵母基因表達調控和信號轉導機制與高等生物具有高度同源性，被人們視為現代分子和細胞生物學中的真核模式生物[10]。

隨著測序技術日益發展和研究的深入，更加方便科研工作者對具有優良抗逆性的野生酵母進行基因挖掘。本研究中，筆者以一株從自然界篩選獲取的具有較強抗氧化能力的酵母為研究基礎，對其進行菌種鑒定及性狀檢測，隨后通過RNA-seq技術研究外源添加H2O2誘導的氧化脅迫對該酵母基因表達轉錄的影響，以深入了解該酵母抗氧化能力優良的分子機制。

1 材料與方法

1.1 材料

NCY33，一株具有較強抗氧化能力的野生酵母，以H2O2為篩選物從自然界獲取。釀酒酵母BY4741(MATa;his3Δ1;leu2Δ0;met15Δ0;ura3Δ0)，中國普通微生物菌種保藏管理中心。

酵母培養使用YPD培養基：葡萄糖20 g/L、胰蛋白胨10 g/L、酵母膏5 g/L；固體加入20 g/L瓊脂，如有需要加入不同濃度H2O2。121 ℃滅菌20 min。

1.2 方法

1.2.1 酵母的分離

從含有2 mmol/L H2O2的YPD培養基內獲取3株活力最強的酵母，測定抗……