重組大腸桿菌分泌表達鼠源羧肽酶B及其培養基優化

於瑞梅，辛 瑜，顧正華，吳 松，李由然，丁重陽，石貴陽，張 梁

(1.江南大學 糧食發酵工藝與技術國家工程實驗室，江蘇 無錫 214122；2.江南大學 生物工程學院，江蘇 無錫 214122；3.蘇州鯤鵬生物技術有限公司，江蘇 蘇州 215300)

羧肽酶B(carboxypeptidase B,CPB,EC 3.4.17.2)是一類含有鋅離子的外肽酶，分子量為3.5×104，能夠特異性地切除蛋白質或多肽C末端的堿性氨基酸，尤其是精氨酸和賴氨酸[1]。羧肽酶原B(proCPB)是羧肽酶B的酶原形式，胰蛋白酶通過在Arg95處切除前導肽可將羧肽酶原B激活，得到有活性的羧肽酶B[2]。羧肽酶B作為一個工具酶，在生物學、醫學診斷和藥物生產中有著重要的作用，已廣泛應用于蛋白質、多肽的末端修飾[3]，急性胰腺炎及胰腺植皮排斥的血清標記[4-6]，尤其在胰島素原活化為胰島素的過程中，羧肽酶B是不可缺少的雙酶之一[7]。此外，羧肽酶B的表達水平與一些疾病有關[8-9]。

早期常從胰腺組織中直接提取CPB，獲得的CPB不僅產量低、成本高，而且還可能混有感染物質或其他蛋白酶[10]?；蚬こ炭梢杂行У亟鉀Q上述問題。CPB作為一種蛋白水解酶，對表達宿主存在蛋白毒性，而且在沒有前導肽輔助的情況下正確折疊率低，因此常以proCPB的形式進行重組表達。Eaton等[11]和Ventura等[12]在巴斯德畢赤酵母中分別表達了人血漿羧肽酶原B和豬胰腺羧肽酶原B；王德解[13]在畢赤酵母中利用pAOX1系統表達了鼠羧肽酶原B，比酶活可達110 U/mg；汪海洋[14]在粟酒裂殖酵母中表達了人源羧肽酶B，但表達量和酶活均很低。

除了在真核系統中進行異源表達，也有研究利用大腸桿菌進行原核表達。……