血清miR-141聯合PSA、NTx檢測對前列腺癌骨轉移的診斷價值

李紹武，李志霞，肖 華，卓 芬，黃娟娟

(海南省第三人民醫院檢驗科，海南三亞 572000)

前列腺癌(PCa)是一種發生在前列腺上皮的惡性腫瘤，其中前列腺腺癌占95%以上，隨年齡增長，尤其55歲以后男性發病率逐漸升高，在男性惡性腫瘤發病率中排第6位，嚴重威脅男性健康[1-2]。PCa發病隱匿，早期無明顯癥狀，常以骨轉移為最早、最常見就診病因，PCa合并骨轉移可引起骨痛、脊髓壓迫、病理性骨折等骨相關事件，嚴重影響患者生活質量及預后[3-5]，因此，早期診斷PCa骨轉移至關重要。目前，臨床常用前列腺特異性抗原(PSA)篩查診斷高危人群，但對于早期PCa患者存在一定局限，良性前列腺增生、前列腺炎患者血清PSA水平亦可升高，易造成假陽性，且不能區分侵略性及非侵略性癌癥。骨組織代謝十分活躍，Ⅰ型膠原氨基末端肽(NTx)是骨組織特異性溶解終產物，是目前理想評價早期轉移性骨腫瘤的靈敏、特異性指標[6]。微小RNA(miRNA)與多種癌癥發生、發展密切相關，血清miRNA作為疾病診斷標志物成為近來研究的熱點，其中miR-141可抑制PCa細胞的增殖和遷移，并通過靶向RUNX1誘導細胞凋亡，與PCa發生、發展密切相關[7]。因此，本研究擬探討血清miR-141聯合PSA、NTx對PCa骨轉移的診斷價值，以期為臨床PCa骨轉移早期診斷提供新的參考價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年3月至2019年6月本院收治的136例PCa患者，根據Gleason評分系統進行病理分級，低分化51例，中分化63例，高分化22例。納入標準：(1)符合轉移性PCa診斷標準[8]，且均經病理或細胞學確診；(2)年齡51～85歲；(3)臨床資料完整；(4)血液標本采集前未接受任何治療。排除標準：(1)合并其他惡性腫瘤；(2)有嚴重感染、內分泌及血液系統疾病或傳染性疾病；(3)近期服用激素等藥物。根據CT及MRI檢查結果將PCa患者分為兩組，骨轉移組62例，平均年齡(77.21±5.64)歲；非骨轉移組74例，平均年齡(72.94±3.28)歲。另匹配本院體檢健康者80例作為對照組，平均年齡(73.46±5.68)歲。收集患者治療前和健康者清晨空腹外周靜脈血血清標本(-80 ℃冰箱保存)及年齡、病理分級等相關資料，所有資料收集均取得患者及其家屬知情同意并簽字確認。本研究已通過本院倫理委員會批準。

1.2血清miR-141水平檢測 采用Trizol提取血清總RNA，用紫外分光光度計檢測其濃度及純度。反轉錄得到cDNA，置于-20 ℃保存備用。采用實時定量PCR(qPCR)擴增miR-141。miR-141上游引物序列(5′-3′)為：ACCCAGTGCGATTTGTCA，下游引物序列(5′-3′)為：ACTGTACTGGAAGATGGACC。內參U6上游引物序列(5′-3′)為：GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT，下游引物序列(5′-3′)為：CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT。反應條件：95 ℃，30 s；95 ℃，5 s；60 ℃，34 s，40個循環。具體操作參照試劑盒說明書進行。采用2-ΔΔCt法分析miR-141相對表達水平。

1.3血清PSA、NTx水平檢測 采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清PSA、NTx水平，ELISA試劑盒購自英國Abcam公司，貨號分別為ab188388、ab109414，具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

2 結 果

2.13組血清miR-141、PSA、NTx水平比較 骨轉移組血清miR-141、PSA及NTx水平高于非骨轉移組和對照組，非骨轉移組高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組血清miR-141、PSA、NTx水平比較

2.2血清miR-141、PSA及NTx對PCa骨轉移的診斷價值 以血清miR-141、PSA及NTx水平為檢驗變量，以是否發生骨轉移為狀態變量(非骨轉移=0，骨轉移=1)繪制ROC曲線，結果顯示，miR-141、PSA、NTx單獨檢測診斷PCa骨轉移的AUC分別為0.840、0.763、0.820，截斷值分別為2.152、31.769 ng/mL、195.46 mg/L，靈敏度分別為80.61%、64.52%、51.61%，特異度分別為83.78%、100.00%、100.00%。見表2、圖1。

圖1 血清miR-141、PSA及NTx單獨診斷PCa骨轉移的ROC曲線

2.3血清miR-141聯合PSA、NTx對PCa骨轉移的診斷價值 將PSA、NTx通過Logistic回歸模型建立方程，二者聯合檢測診斷PCa骨轉移的AUC為0.830，靈敏度、特異度分別為64.52%、100.00%。將miR-141、PSA、NTx通過Logistic回歸模型建立方程，三者聯合診斷PCa骨轉移的AUC為0.946，靈敏度、特異度分別為85.48%、97.30%。見表2、圖2。

表2 血清miR-141、PSA及NTx對PCa骨轉移的診斷價值

圖2 PSA、NTx聯合及miR-141、PSA、NTx三者聯合診斷PCa骨轉移的ROC曲線

2.4Logistic回歸分析血清miR-141、PSA及NTx與PCa骨轉移的關系 以是否發生骨轉移為因變量(非骨轉移=0，骨轉移=1)，以PCa患者血清miR-141、PSA及NTx水平為自變量進行Logistic回歸分析，結果顯示，血清miR-141、PSA及NTx水平升高均是PCa骨轉移發生的獨立危險因素(P<0.05)，見表3。

表3 Logistic回歸分析血清miR-141、PSA及NTx水平與PCa骨轉移的關系

3 討 論

PSA與PCa轉移及預后有關，但與PCa骨轉移狀態無直接相關，盡管PSA是診斷PCa的血清學生物標志物，但它并不總是與疾病的嚴重程度一致。有研究顯示，PSA聯合影像學檢查可提高PCa骨轉移的早期診斷效能[9]。但因骨組織代謝活躍，X射線檢測骨轉移需持續觀察1～3個月，全身核素骨顯像檢查雖靈敏度高，但特異度低，且存在放射性，診斷較滯后，均具有一定局限性，因此，急需尋找靈敏度、特異度高且便捷的血清學指標[10]。另有研究報道，血清PSA聯合尿NTx和血清Ⅰ型膠原羧基末端肽(CTx)檢測對乳腺癌骨轉移患者早期診斷、療效監測及判斷骨相關事件發生具有重要意義[11]。雖然有研究發現，血清miR-141可作為非侵入性診斷PCa的潛在標志物，但需要聯合其他指標增加診斷準確性[12]，目前關于miR-141、PSA及NTx三者聯合診斷PCa骨轉移的研究很少，因此，本研究探討血清miR-141聯合PSA、NTx對PCa骨轉移的診斷價值，以期為臨床PCa骨轉移診斷提供新方案。

研究報道，PCa患者血清中miR-141水平明顯高于對照組，且與總PSA水平呈正相關[13]，還可通過調節成骨細胞活性促進前列腺癌成骨細胞轉移[14]。而另有研究結果顯示，miR-141在PCa組織中水平較低，其水平升高可通過靶向抑制RUNT相關轉錄因子1抑制PCa細胞增殖、遷移，并抑制其凋亡[7]。本研究結果顯示，與健康者比較，PCa患者血清miR-141水平明顯升高，其中與非骨轉移組比較，骨轉移組血清miR-141、PSA水平明顯升高，與上述文獻報道結果不完全一致，推測其原因可能與研究對象選取及PCa發展階段不同有關，提示血清miR-141、PSA水平升高可能與PCa發生及骨轉移有關。膠原蛋白簡稱膠原，是一種含糖蛋白質，共有4種類型，主要分布于結締組織，其中骨組織主要含Ⅰ型膠原，由兩端非三股螺旋區部分及中間連續三重體螺旋區構成，其中兩端非三股螺旋區部分為末端肽，由氨基構成的稱NTx，由羧基構成的稱之為CTx。PCa骨轉移多數表現為成骨型，少數表現為溶骨性，而兩個過程一定條件下可相互轉化，溶骨發生時可產生NTx及CTx，NTx是近來發現的骨轉移標志物，對PCa骨轉移早期診斷具有重要價值[15]。本研究結果顯示，與健康者比較，PCa患者血清NTx水平明顯升高，其中與非骨轉移組比較，骨轉移組血清NTx水平明顯升高，提示NTx水平升高可能與PCa骨轉移有關。

本研究ROC曲線結果顯示，血清miR-141、PSA及NTx單獨檢測診斷PCa骨轉移的AUC分別為0.840、0.763、0.820，當截斷值分別為2.152、31.769 ng/mL、195.46 mg/L，靈敏度分別為80.61%、64.52%、51.61%，特異度分別為83.78%、100.00%、100.00%。PSA、NTx二者聯合檢測診斷PCa骨轉移的AUC為0.830，靈敏度、特異度分別為64.52%、100.00%。三者聯合診斷PCa骨轉移的AUC為0.946，靈敏度、特異度分別為85.48%、97.30%。提示，血清miR-141聯合PSA、NTx診斷PCa骨轉移的效能最佳，可能更具有臨床應用價值。本研究進一步分析血清miR-141、PSA及NTx與PCa骨轉移的關系發現，三者水平升高均是PCa骨轉移發生的獨立危險因素，提示監測血清miR-141、PSA及NTx水平可能對PCa骨轉移診斷及病情進展評估具有一定參考價值。

4 結 論

綜上所述，血清miR-141、PSA、NTx水平升高與PCa骨轉移有關，三者聯合檢測對PCa骨轉移早期診斷及病情評估的臨床應用價值更高。但本研究尚存在一定局限性，關于血清miR-141、PSA、NTx診斷PCa骨轉移的最佳截斷值及對PCa骨轉移的作用機制有待進一步深入探究。