覆盆子中幾種黃酮類成分活性研究進展*

蔡妙婷 劉雯 袁源見 曾慧婷 何小群 王小青 李晶

（江西省中醫藥研究院 南昌330046）

覆盆子始載于《名醫別錄》，用藥歷史悠久，具有益腎固精縮尿、養肝明目的功效[1]。近年來有大量研究發現覆盆子中含有黃酮、萜類、揮發油等多種化合物，具有抗氧化、抗腫瘤、降血糖及降血壓等生物活性。《中國藥典》2015 版采用鞣花酸及山奈酚-3-O-蕓香糖苷（KOR）含量作為質量控制指標，但目前對覆盆子藥理作用研究還停留在提取部位的活性上，其藥效物質基礎及活性機制還不明確。本研究對其中幾種黃酮類有效成分藥理研究進行綜述，為開發覆盆子潛在的藥理活性及相關作用機制研究提供依據。現報道如下：

1 KOR 藥理活性研究進展

1.1 保肝、抗肝毒性作用 肝臟是人體內代謝所有外來化合物的器官，受損后易導致各種疾病，如肝炎、肝硬化或肝癌等。多項研究表明KOR 具有保肝作用，且與其抗氧化活性有關。Wang Y 等[2]在研究紅花中KOR 的保肝作用時發現，KOR 能提高血清總蛋白（TP）水平，抑制四氯化碳（CCl4）誘導的血清天冬氨酸轉氨酶（AST）、血清堿性磷酸酶（ALP）和肝丙二醛（MDA）水平的升高，此外，KOR 能顯著恢復小鼠谷胱甘肽（GSH）水平，使小鼠體內過氧化氫酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）維持正常活性，從而有效降低CCl4誘導的小鼠氧化性肝損傷。山奈酚-3-O-蕓香糖苷同時也是維藥雪白睡蓮（Nymphaea Candida C.Presl）中的活性成分，Zhao J等[3]運用刀豆蛋白A（Con A）和D-半乳糖胺誘導的小鼠急性肝損傷模型研究其抗肝炎活性時發現，KOR 能顯著降低Con A 誘導產生的肝損傷，抑制肝損傷引起的血清標志物AST 和丙氨酸轉氨酶（ALT）變化，抑制白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-6（IL-6）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的升高。KOR 對D-半乳糖胺誘導的化學性肝損傷也有保護作用，能顯著降低血清酶和細胞因子水平，促進肝勻漿抗氧化指標恢復到正常水平。

1.2 神經保護作用 KOR 對治療和預防中樞神經系統疾病具有較強的生物活性。Mira A 等[4]研究發現KOR 能顯著降低Aβ25-35 誘導的神經毒性，其對神經細胞的保護機制與DJ-1 的特異性結合有關。深入研究后發現，KOR 的神經保護作用還與線粒體膜的穩定和活性氧的減少有關，且KOR 可以在胃腸道中以相對適中的比例被吸收并輸送到大腦，因此，其可能是預防和治療帕金森病等神經退行性疾病的有效藥物[5～6]。Hu GQ 等[7]為探明KOR 的神經保護作用機制，采用腦中動脈缺血/再灌注建立腦缺血/再灌注損傷模型研究了KOR 是否通過JAK2/STAT3 通路保護腦缺血/再灌注損傷誘導的細胞凋亡。結果表明，KOR 能夠改變受損神經元的形態和結構，減少凋亡細胞數量，下調p-JAK2、p-STAT3、Caspase-3、Bax 的表達，降低Bax 的免疫反應活性，增加Bcl-2 蛋白的表達和免疫反應活性，提示KOR 可通過JAK2/STAT3 通路保護腦缺血/再灌注損傷誘導細胞凋亡。

1.3 抗氧化、抗衰老作用 衰老是人類生活中的必經過程，是由自由基（ROS）的存在引發的。Liana 等[8]對火龍果果皮提取物（DFPE）和KOR 對清除過氧化氫（H2O2）和抑制透明質酸酶的抗氧化活性進行了測定和比較。分別以15.63 μg/ml、31.25 μg/ml、62.50 μg/ml、125.00 μg/ml、250.00 μg/ml、500.00 μg/ml 和 5.21 μg/ml、10.42 μg/ml、20.83 μg/ml、41.70 μg/ml、83.33 μg/ml、166.67 μg/ml 系列濃度進行實驗，結果顯示，DFPE 和KOR 均具有抗氧化活性和抗衰老能力。因此認為DFPE 和KOR 能夠清除H2O2和抑制透明質酸酶活性，有抗氧化和抗衰老作用。

2 金絲桃苷（HS）藥理活性研究進展

2.1 保肝作用 對乙酰氨基酚（APAP）具有一定的肝毒性，Xie W 等[9]用APAP 誘導的肝損傷模型研究HS 對小鼠肝毒性的影響。在APAP（300 mg/kg）注射前3 d，分別用HS（10 mg/kg、50 mg/kg 及100 mg/kg）灌胃處理小鼠。APAP 誘導的肝損傷特征表現為血清轉氨酶升高，MDA 和3-硝基酪氨酸（3-NT）的形成，及肝SOD、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和GSH 的降低。最終結果顯示，HS 以劑量依賴性顯著減輕APAP 誘導的肝損傷，100 mg/kg為最佳有效劑量。其可能的作用機制為通過增加尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶（UGTs）和硫酸基轉移酶（SULTs）的活性及信使核糖核酸（mRNA）表達，抑制CYP2E1 基因的活性，從而抑制毒性中間產物的形成，促進APAP 肝臟解毒。這一研究證明HS 可以作為一種潛在的天然的肝臟保護劑。

2.2 抗氧化作用 氧化應激可導致多種疾病的發生，包括糖尿病、心血管疾病、神經退行性疾病，甚至癌癥。HS 可通過防止氧化損傷進而發揮治療及預防疾病的作用。為了進一步了解其抗氧化防御機制，Gao Y 等[10]系統研究了HS 對酵母中H2O2、CCl4和鎘氧化損傷的調節作用。在野生型菌株（WT）和突變體gtt1 和gtt2 中，HS 可顯著提高細胞活力，降低脂質過氧化，降低細胞內ROS 水平。同時，在H2O2和CCl4的刺激下，經HS 處理后的ctt1 菌株表現出不同的細胞活力和清除細胞內ROS 的能力。結果表明，啤酒酵母中HS 的抗氧化反應依賴于細胞間ROS 解毒系統。廣義的酶抗氧化防御系統包括NADH：醌氧化還原酶1、超氧化物歧化酶和血紅素氧合酶-1（HO-1）。Park JY 等[11]研究從HO-1 誘導的角度研究HS 對人晶狀體上皮細胞系HLE-B3 H2O2誘導氧化應激的保護作用。結果顯示，HS 可劑量依賴性增加HO-1 的mRNA 和蛋白表達。同時，HS 還可提高由細胞外調節蛋白激酶（ERK）上游調控的核轉錄因子Nrf2 水平及其抗氧化反應元件的結合活性。此外，HS 還可激活ERK，恢復H2O2導致的細胞活力降低。表明HS 是一種可有效通過HO-1 誘導保護細胞免受氧化應激的化合物。

2.3 抗腫瘤作用 肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一。非小細胞肺癌（NSCLC）約占所有肺癌的85%。Fu T 等[12]在體外研究了自噬是否參與了人非小細胞肺癌細胞中HS 的抗癌機制。通過比較人非小細胞肺癌細胞株A549 和支氣管上皮細胞BEAS-2B 發現HS 劑量依賴性地增加了A549 細胞LC3-Ⅱ和自噬體數量的表達，但在BEAS-2B 細胞中沒有這種作用。此外，HS 可劑量依賴性地抑制Akt、mTOR、p70S6K 和4E-BP1 的 磷酸 化，增 加A549 細胞ERK1/2 的磷酸化。HS 預處理可逆轉胰島素（200 nmol/L）導致的Akt 的磷酸化水平升高，A549 細胞LC3-Ⅱ表達的降低，而MEK1/2 抑制劑U0126（20 μmol/L）對HS 誘導的LC3-Ⅱ表達無作用。HS 劑量依賴性地抑制A549 細胞的存活，誘導細胞凋亡，自噬抑制劑甲基腺嘌呤（2.5 mmol/L）預處理后，自噬活性明顯減弱。說明HS 在體外可誘導人非小細胞肺癌細胞的自噬和凋亡。自噬是通過抑制 Akt/mTOR/p70S6K 信號通路誘導的，Akt/mTOR/p70S6K 信號通路參與了HS 的抗癌作用。蔣參等[13]探究HS 對人肝癌HepG2 細胞增殖和凋亡的作用及作用機制時發現，HS（20 nmol/L）處理細胞4 d 能明顯抑制HepG2 細胞增殖（P＜0.05），HS（50 nmol/L）處理細胞3、4 d 能顯著降低細胞增殖倍數（P＜0.05），與HepG2 組比較，HS（10、20、50 nmol/L）組細胞凋亡率明顯升高（P＜0.05），凋亡細胞數明顯增多（P＜0.05），HS（20、50 nmol/L）處理細胞 后，HepG2 細 胞 通 路 蛋 白P53、Caspase-9 和Caspase-3 表達水平明顯升高（P＜0.05）。表明HS 能抑制肝癌HepG2 細胞增殖、促進細胞凋亡，其機制可能與誘導P53/Caspase 信號通路激活有關。

3 異槲皮苷藥理活性研究進展

3.1 抗氧化、抗炎作用 黃酮苷的6'-OH（ω-OH）具有明顯的抗氧化活性。Li X 等[14]選擇槲皮素和異槲皮素苷作為模型化合物，研究6'-OH 基團在幾種抗氧化途徑中的作用，包括Fe2+結合、供氫和電子轉移（ET）。結果表明，槲皮苷和異槲皮苷均具有劑量依賴性的抗氧化活性。然而，在鐵離子結合、基于ET的鐵離子還原抗氧化能力和基于多通道的超氧陰離子清除實驗中，異槲皮苷比槲皮苷表現出更高的活性。在基于氧化損傷間充質干細胞（MSC）模型的指標物質檢測中，異槲皮苷作為細胞保護劑的作用比槲皮苷更有效。表明異槲皮苷可以間接并直接參與ROS 的清除，且異槲皮苷對ROS 的清除活性高于槲皮苷，能增強對MSCs 的保護作用，保護MSCs 不受ROS 誘導的氧化損傷，與槲皮苷相比，異槲皮苷中的6'-OH 基團通過空間位阻或氫鍵作用增強了ET 和Fe2+的螯合能力，降低了施氫能力。肥大細胞和嗜堿性細胞是細胞質中含有豐富分泌顆粒的多功能效應細胞。這兩種類型的細胞都參與各種炎癥和免疫事件，產生一系列炎癥介質，如細胞因子。Li L等[15]通過研究異槲皮苷是否能調節人類嗜堿細胞KU812 的過敏和炎癥反應，以闡明其對蛋白激酶（MAPK）磷酸化和核轉錄因子（NF）-κB 激活的影響。結果顯示，異槲皮苷可顯著降低組胺和促炎細胞因子的產生，降低ERK 磷酸化水平，證明異槲皮苷具有潛在治療炎癥和過敏反應的作用。

3.2 抗腫瘤作用 異槲皮苷對結腸癌、肝癌、胰腺癌、膀胱癌等多種癌細胞均有抑制作用[16～19]，Kangawa Y 等[20]在小鼠偶氮甲烷/右旋糖酐硫酸鈉誘導的結直腸癌模型中，比較了酶改性異槲皮苷及雷公藤紅素的化學預防作用，并與著名的抗癌天然植物色素花青素進行了比較。同時以急性右旋糖酐鈉誘導結腸炎為模型，研究其對結腸癌細胞系和黏膜上皮細胞增殖活性的影響。研究發現，酶改性異槲皮苷通過抑制炎癥和細胞增殖，改善了偶氮甲烷/右旋糖酐硫酸鈉誘導的結直腸癌，表明酶改性異槲皮苷及雷公藤紅素首先在結腸炎初期表現出抗右旋糖酐硫酸鈉作用，在隨后的炎癥相關癌癥發展階段表現出了抗腫瘤作用。揭示了酶改性異槲皮苷的抗炎活性及其對腫瘤的影響。異槲皮苷還對卵巢癌細胞具有抑制作用。Michalcova K 等[21]運用OVCAR-3 細胞系統研究了其在人卵巢癌細胞中的作用機制，觀察了不同濃度異槲皮苷（5、10、25、50、100 μg/ml）對OVCAR-3 細胞的活力、存活量、細胞凋亡，人轉化生長因子-β1（TGF-β1）和TGF-β1受體的釋放，細胞內ROS 生成的影響，結果表明異槲皮苷對卵巢癌細胞的作用可能是通過抑制細胞內ROS 生成的抗氧化途徑介導，從而限制氧化應激產生。

3.3 神經保護作用 自由基引起的神經退行性病變可導致帕金森病（PD）及阿爾茲海默癥（AD）等疾病，異槲皮苷能通過降低6-羥基多巴胺（6-OHDA）誘導的細胞膜脂質過氧化來保護神經細胞。異槲皮苷通過其較好的抗氧化能力對6-OHDA 誘導的神經毒性有保護作用。此外，神經突的形成和突觸模式是功能性神經系統發育的基礎。黃酮類化合物通過多種分子途徑對大腦產生有益影響。在神經發生和突觸形成過程中發生的細胞骨架改變通常涉及Rho GTP 酶家族。因此，異槲皮苷具有潛在的治療PD 作用[22]。某些天然產物可以降低患AD 的風險。Carmona V 等[23]利用淀粉樣毒性模型（MC65 細胞）檢測異槲皮苷單體化合物對AD 的作用，研究了異槲皮苷抑制β-分泌酶、γ-分泌酶活性和乙酰膽堿酯酶的活性，以改善β-淀粉樣沉淀。此外，它們作為ROS 的清 除 劑、Caspase-3、Caspase-8 和Caspase-9激活的抑制劑及泛素-蛋白酶系的胰凝乳蛋白酶樣活性的調節劑，常被用來抑制谷氨酸誘導的氧化，表明異槲皮苷有一定的抗AD 活性。

4 討論

覆盆子作為臨床常用藥，其藥理活性研究一直受到廣大學者的關注，本研究通過綜述覆盆子中研究較多的幾種有藥理活性的黃酮類單體化合物的研究進展及相關藥理作用機制，發現覆盆子含有的3種黃酮類化合物均具有較強的抗氧化能力，且具有保護神經系統的活性，故而對自由基引起的神經退行性疾病或有一定作用，如AD 及PD 等，尤其是AD，隨著世界人口老齡化加速以及缺少有效的治療藥物，AD 已成為嚴重威脅老年健康的疾病之一，覆盆子中黃酮類成分的抗氧化及神經保護作用的研究為今后研究覆盆子抗AD 藥理活性及作用機制提供了理論參考。但隨著中藥提取分離技術的進步，更多活性化合物將從覆盆子中分離得到，覆盆子化學成分復雜，其他成分如萜類、揮發油及鞣花酸等的藥理作用同樣需要進一步研究，因此，更深層次地挖掘覆盆子的化學成分與其藥理活性的聯系，對于覆盆子的臨床用藥與制劑開發具有重要意義。