T淋巴細胞亞群分析在免疫缺陷病患者中的應用及臨床意義

姚 夢，劉 鵬，蒲 鳳，張 兵

（南充市中心醫院，四川 南充 637000）

細胞免疫缺陷可分為遺傳性與獲得性兩種，后者主要為艾滋病（AIDS）患者與強烈放化療后的腫瘤患者。免疫缺陷患者由于細胞免疫功能缺失導致對病原體抵抗力下降，常并發感染性疾病，特別是正常人群中少見的機會致病菌感染[1]。AIDS是人類免疫缺陷病毒（HIV）感染后出現的以細胞免疫缺陷、惡性腫瘤或反復感染為臨床表現的綜合征。腫瘤患者接受較強的放化療后除腫瘤細胞被殺滅外，機體正常組織細胞也可被殺滅，其中也包括免疫細胞。上述獲得性免疫缺陷病患者體內T淋巴細胞數量及動態平衡對病情的進展有重要影響，也是疾病診治的重要環節[2]。因此，本研究采用流式細胞術監測AIDS患者與腫瘤放化療后患者外周血T淋巴細胞亞群的種類和數量，探討其臨床意義。

1 對象與方法

1.1 對象

我院2016—2018年收治的各類晚期惡性腫瘤放化療后患者48例（CA組）、AIDS晚期患者47例（AIDS組），其中AIDS組均由本市疾病預防控制中心確認，43例健康對照者為門診健康體檢者。AIDS患者采集治療前、安靜狀態下的外周靜脈血，惡性腫瘤患者采集放化療后、癥狀緩解后的外周靜脈血。

1.2 主要試劑與儀器

Beckman Coulter原裝進口試劑，Beckman Coulter FC-500流式細胞儀。

1.3 檢測方法

（1）標記CA管、AIDS管和對照管；（2）每管加CD45/CD3/CD4/CD8 熒光試劑 5 μl；（3）每管加待測樣本全血 50 μl，混勻，室溫避光放置 15 min；（4）加 OptiLyse C 溶血素 300 μl，混勻，室溫避光放置 10 min；（5）加 PBS 試劑 300 μl，混勻，室溫避光放置 10 min；（6）加 Flow-Count Fluorospheres 50 μl，混勻，上機分析。

1.4 統計學分析

采用SPSS 19.0軟件對數據進行統計學分析，T淋巴細胞亞群比例以（±s）表示，組間差異采用成組t檢驗，P＜0.05 為差異有顯著性；T淋巴細胞亞群計數以箱式圖進行描述統計，以Shapiro-Wilk法檢驗各組數據是否服從正態分布，若不服從正態分布，則進行中值檢驗統計分析。

2 結果

2.1 3組T淋巴細胞亞群比例分析

與對照組相比，AIDS組外周血CD3+、CD4+細胞比例均下降（P＜0.05），CD8+細胞比例明顯升高（P＜0.05），CD4+/CD8+值出現倒置；CA組外周血 CD3+細胞比例下降（P＜0.05），CD4+、CD8+細胞比例及CD4+/CD8+值與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）；與CA組相比，AIDS組 CD4+細胞比例均下降（P＜0.05），CD8+細胞比例明顯升高（P＜0.05），CD4+/CD8+值明顯下降（P＜0.05），見表1。

表1 3組T淋巴細胞亞群比例比較（±s）

表1 3組T淋巴細胞亞群比例比較（±s）

注：與正常對照組相比，*P＜0.05；與 CA組相比，#P＜0.05

n C D 3+（%）6 4.8 1±1 1.3 7*6 7.8 3±9.5 2*7 2.5 1±6.6 0 A I D S組C A組對照組組別C D 4+（%）3.1 3±2.5 9*#3 6.3 4±6.4 9 3 7.3 7±5.4 3 4 7 4 8 4 3 C D 8+（%）5 7.0 9±1 1.7 8*#2 6.6 8±7.1 4 2 8.8 2±5.8 6 C D 4+/C D 8+0.0 6±0.0 5*#1.4 4±0.5 1 1.3 8±0.3 7

2.2 3組T淋巴細胞亞群細胞計數分析

由于各組人數均少于50例，故以Shapiro-Wilk法進行正態分布檢驗。各組正態分布檢驗均P＜0.20，故認為不服從正態分布。以中位數及箱式圖對各組數據描述統計（見表2、圖1）后，中值檢驗發現，AIDS 組、CA 組外周血 CD3+、CD4+、CD8+細胞總數均下降，差異有顯著性（P＜0.05）；與CA組相比，AIDS組CD3+、CD4+細胞總數下降，而CD8+細胞總數升高，差異有顯著性（P＜0.05）。

圖1 3組T淋巴細胞亞群細胞計數

3 討論

HIV病毒造成人類細胞免疫功能損傷，惡性腫瘤晚期患者接受不同劑量放化療后的常見副作用之一是免疫抑制。利用流式細胞術監測T淋巴細胞亞群已被廣泛運用于AIDS患者與惡性腫瘤患者疾病進展與療效的評估，T淋巴細胞亞群的數量及動態平衡決定著人體免疫功能狀況。AIDS患者體內的HIV病毒可選擇性侵犯細胞表面含有CD4分子受體的細胞，其中最重要的是CD4+T淋巴細胞。該細胞的減少可引起細胞因子釋放減少與B淋巴細胞活化率下降，使細胞免疫與體液免疫功能均下降，患者易并發機會性感染[3-4]；CD8+細胞除受CD4+細胞調控產生細胞介導的細胞毒作用外，還可分泌抑制因子，負反饋抑制CD4+細胞調控。當CD8+細胞比例明顯升高后，會明顯減弱或抑制免疫應答[5]。因此，CD4+/CD8+值明顯降低提示體內T細胞亞群失常，可導致機體免疫監視功能下降，易并發惡性腫瘤。另外，CD3是具有轉導抗原識別信號并存在于所有T淋巴細胞的表面分子，是T細胞的特有標志。CD3細胞數量的減少代表機體免疫功能下降，故可用于評價AIDS患者及腫瘤患者放化療后機體整體免疫功能狀態[6]。

表2 3組T淋巴細胞亞群細胞計數比較

3.1 AIDS患者細胞免疫功能低下且失衡

在本組收集的各類病例中，T淋巴細胞亞群均存在不同程度的失常。兩類免疫缺陷患者均存在CD3細胞總數下降，提示整體免疫功能下降。在以CD4+細胞為攻擊對象的AIDS患者中，CD4+細胞總數及比例明顯下降，盡管CD8+細胞數量有所下降但不及CD4+細胞明顯，故出現CD4+/CD8+值倒置的結果[7]。上述結果提示，AIDS患者T淋巴細胞亞群數量及比例均發生異常，細胞免疫功能受到抑制。

3.2 惡性腫瘤患者整體免疫功能低下但免疫自穩正常

惡性腫瘤患者放化療后，其CD3+、CD4+、CD8+細胞數量下降，但CD4+、CD8+細胞比例及CD4+/CD8+值均在正常范圍。可見，放化療后的惡性腫瘤患者呈整體免疫抑制狀態，而機體免疫內環境的相對穩定狀態未發生明顯改變[8]。同時，在對腫瘤患者放化療后的免疫監測中，與T細胞比例相比，患者的T淋巴細胞亞群計數更能直觀反映機體內T淋巴細胞亞群的變化。

綜上所述，本研究中的兩組獲得性免疫缺陷患者的T淋巴細胞亞群均發生明顯改變，AIDS晚期患者T淋巴細胞亞群改變程度及復雜程度均高于晚期惡性腫瘤放化療后的患者。動態監測T淋巴細胞亞群對疾病的療效、復發與預后判斷具有重要臨床意義。