傳統口蹄疫滅活疫苗效力檢測方法對動物替代方法應用效果研究

張常鎖 張金鳳 呂魯杰 陳 君 聶培婷

（天康生物股份有限公司制藥事業部，新疆烏魯木齊 830032）

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的傳染病，嚴重危害各國的畜牧業。防控口蹄疫疫病的方式，主要采取強制免疫口蹄疫滅活疫苗。我國在檢測口蹄疫滅活疫苗效力中規定為疫苗50%動物保護劑量（PD50）。我國強制免疫口蹄疫疫病，保證防控的效果，需要大量的本動物進行效力檢驗。檢驗動物的獲取比較困難，成本高，勞動強度大，周期長。國內外在口蹄疫滅活疫苗效力檢驗研究中，積極探索可替代本動物方法。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物：從試驗動物廠獲取400只普通級豚鼠，300-400 g。從定點動物基地，獲取136只健康非免疫牛，6-12月齡。

病毒：從公司中獲取FMDV Asia-1/JSL MF8BF2細胞毒，FMDV Asia-1/JSL MF8乳鼠毒。

疫苗：選取6批牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗。

建立豚鼠發病模型：隨機選取8只豚鼠，平均分為兩組。一組FMDV Asia-1/JSL MF8BF2細胞毒進行攻毒。一組用FMDV Asia-1/JSL MF8乳鼠毒進行攻毒。

豚鼠免疫劑量試驗：選取四組豚鼠，每組15只。三組為免疫組，一組為空白對照組。分別選取0.5 ml、1 ml、1.5 ml的免疫劑量。四周后，四組豚鼠均接種FMDV Asia-1/JSL MF8BF2細胞毒。

1.2 試驗口蹄疫滅活疫苗效力

60只豚鼠隨機分為四組，每組15只。分別選取0.125 ml、0.25 ml、0.5 ml、1 ml的免疫劑量，檢測牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗。免疫四周后。全部FMDV Asia-1／JSL MF8BF2細胞毒攻毒。觀察10 d，計算疫苗的PD50。

選取健康非免疫牛18只，隨機分為三組，每組6只。牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗分別免疫0.22 ml、0.67 ml、2 ml。三周后，全部進行FMDV Asia-1／JSL MF8BF2攻毒。觀察10 d，計算疫苗的PD50。

1.3 血清學試驗

在免疫第一周、第二周、第三周、第四周，分別在每組隨機選取豚鼠，進行心臟采血，檢測FMDV Asia-1型抗體效價。

2 結果與分析

細胞毒、乳鼠毒攻毒后，豚鼠均出現典型臨床癥狀，并且更明顯的是乳鼠毒，豚鼠四肢趾部有明顯的水泡。根據豚鼠的發病情況，計算豚鼠的半數感染量105.67/0.2ml。通過細胞毒感染，對照組、108發病率為0。107、106的發病率為25%。105的發病率為75%。103、104的發病率為100%。

豚鼠免疫后四周，進行細胞毒攻毒。使用1.5 ml劑量組的豚鼠，保護率為100%。1 ml劑量組也為100%。0.25ml劑量組的為0。0.5ml劑量組的為70%。因此，最適免疫劑量為1 ml。

進行PD50效力試驗，結果如下。N010與N007實驗結果多次重復沒有大的差距，具有良好的重復性和穩定性。

表1 牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗效力檢驗

對照組第四周后抗體陰性。在免疫第一周后，豚鼠出現抗體，在第二周后，0.25 ml劑量組、1 ml劑量組的抗體水平有所減少，隨后增加，到第四周后，達到最高的抗體水平。抗體水平與攻毒后保護率呈現正向關系。攻毒保護與抗體效價無明顯的臨界值。豚鼠PD50與牛PD50有明顯的線性關系。

圖1 豚鼠PD50預測牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗效力

3 總結

本次研究的試驗動物使用豚鼠，對口蹄疫滅活疫苗的效力進行評價，替代本動物牛，檢測牛口蹄疫Asia-1型滅活疫苗的效力。結果顯示牛PD50與豚鼠PD50檢測結果明顯相關，具有顯著的線性關系。免疫劑量不同，抗體效價也有不同，呈現正相關的關系。但也有幾乎檢測不到抗體的動物，受到保護，有抗體效價高的，仍然發病，說明血清學方法檢測穩定性較差，需要盡量增加試驗動物的數量。