安康市生豬屠宰企業非洲豬瘟自檢中存在的問題及應對措施

李 曼，陳少謀，魏小麗，邱孝萌

（1.安康市畜牧獸醫中心，陜西 安康 725000；2.白河縣畜牧獸醫中心，陜西 安康 725800）

非洲豬瘟（African Swine Fever, ASF）是由非洲豬瘟病毒（African Swine Fever Virus, ASFV）感染家豬和各種野豬（非洲野豬、歐洲野豬等）引起的一種急性、出血性、烈性傳染病。世界動物衛生組織（OIE）將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。2018年8月，遼寧省沈陽市確診我國首例非洲豬瘟，至今全國所有省份都已出現非洲豬瘟疫情，對我國生豬產業帶來重創。為降低非洲豬瘟擴散風險、切斷病毒傳播途徑、有效防范非洲豬瘟，保障生豬產品的有效供給和質量安全，農業農村部要求自2019年7月1日起，各屠宰場須自行開展非洲豬瘟檢測工作。從安康屠宰企業實施情況看，各屠宰企業均能夠按照要求購買熒光定量PCR儀和診斷試劑，配備檢測技術人員，能夠按照“批批檢、全覆蓋”的要求開展非洲豬瘟自檢，企業生物安全意識明顯增強。但由于屠宰場實驗室檢測環境條件、儀器設備條件、實驗室檢測人員等各方面條件參差不齊，在檢測過程中仍然發現一些問題。因此，規范開展非洲豬瘟熒光PCR檢測，提高檢測結果的準確性和可信度，是當前工作中面臨的重要任務。

1 存在問題

1.1 樣品采集方式

按照要求，屠宰企業應按照生豬不同來源實施分批屠宰，樣品采集可在入場前也可在入場后，但應確保批批檢，頭頭檢。安康市各屠宰企業多選擇入場后從血池或血液儲存器具中采樣，此種采樣方法較進場前采樣簡便、易于操作，不需要投入過多人力，但卻存在一旦檢出陽性樣品需停產消毒的風險。而且在實際操作中存在采集樣品數量不均、混合不充分、無法控制混樣比例的問題，影響檢測的準確度，極易漏檢。

1.2 混樣比例問題

目前采用的熒光PCR方法的最低檢出量一般在10個病毒拷貝左右，按照要求同一張檢疫合格證需為同一來源，混樣比例不要超過1∶50，混樣比例越高，漏檢風險越大。在實際操作中我們也發現由于樣品采集過程中不能保證每份血清樣品等量混合，從而導致部分血清超過規定稀釋倍數，造成漏檢。還有部分屠宰企業為了節約檢測成本隨意提高混樣比例，極大地降低了檢測的準確性。同時還存在部分待宰散戶僅有十幾只甚至幾只生豬，按要求采樣檢測成本較高，散戶難以承受等問題。

1.3 實驗室環境簡陋設施不完善

熒光PCR方法靈敏度高、特異性強，但對設施和環境要求也高，一般的PCR檢測室設置為配液、核酸提取、擴增3個功能室，且需有緩沖間物理屏障、空氣流向等要求以防止核酸污染。目前，安康市大部分屠宰企業沒有進行合理分區，甚至整個檢測過程混在一個區域進行，極易造成實驗室核酸污染。此外，實驗室恒溫設備、超凈工作臺、生物安全柜、高壓滅菌器等設備不全，甚至有些實驗室連基本的個人防護工具也沒有配備，既不能保障樣品及人員安全，也無法保障環境安全。

1.4 儀器設備和檢測試劑質量參差不齊

目前市售的熒光PCR儀價格從幾萬到幾十萬元不等，檢測通道有2、3、4通道，種類五花八門。檢測試劑廠家繁多，質量和靈敏度參差不齊。屠宰企業在選購熒光PCR儀和檢測試劑時更多的是考慮降低成本，而忽略了檢測精度和使用有效期等問題。有些儀器公司買儀器送試劑，但儀器只能使用配備的專用試劑，常常遇到檢測精度不足、通量不夠等問題。部分企業購買的檢測試劑中還存在試劑量不足、試劑保質期臨期甚至過期等問題。

1.5 檢測人員專業水平有待提升

檢測人員是確保檢測結果準確的最核心要素。對安康市開展的屠宰企業非洲豬瘟檢測比對結果進行分析發現，即使是相同的儀器設備、相同的試劑耗材，相同的檢測樣品，檢測結果卻差異顯著。很多屠宰企業配備了專職檢驗員，經過專業培訓后檢測準確率較高，而個別屠宰企業臨時抱佛腳，僅僅經過儀器設備廠家的簡單培訓就上崗，操作不規范，檢測結果差異性大。

2 應對措施

2.1 做好樣品采集和試劑管控

在樣品采樣過程中要避免交叉污染，保證采樣的均一性，不要超比例混樣。檢測樣品可以根據不同的對象和要求進行混樣檢測。樣本送達實驗室后要及時進行分離和制備，盡快進行檢測，如不能馬上進行檢測要放置于-20 ℃保存。采購的非洲豬瘟病毒診斷用品應當取得農業農村部核發的產品批準文號，要嚴格按試劑盒的要求妥善保存試劑，避免使用偽劣、過期或失效試劑。

2.2 完善實驗室基礎設施

非洲豬瘟檢測實驗室應進行分區，合理劃分配液、核酸提取、擴增3個獨立工作區域，從而形成單向流程的保護屏障，避免試驗之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對試驗過程造成污染。實驗室必須配備熒光PCR儀、低溫離心機、核酸提取儀、生物安全柜、冰箱、移液器等主要儀器設備，并嚴格按照操作規程進行維護，保證其在規定參數內正常運行。

2.3 強化人員培訓，實行專人專崗

獸醫實驗室必須配備具有畜牧獸醫專業相關學歷的專職檢測人員，經專業的檢測技術、生物安全培訓，獲得上崗資格后方可開展熒光PCR檢測工作。同時要制定并執行定期考核和培訓制度，定期參加實驗室培訓，以提升檢測人員的檢測技能。

2.4 有效規范開展檢測工作

采用農業農村部批準的非洲豬瘟病毒診斷制品進行檢測，不同廠家試劑盒其檢測方法略有不同，應嚴格按說明書的要求操作。用于非洲豬瘟檢測的樣品，應根據不同的要求做好留樣。檢測結果為疑似陽性的樣品應進行復檢，復檢后仍為疑似或陽性的樣品應及時報告當地畜牧獸醫主管部門或動物疫病預防控制機構。如果需要留樣的，應單獨保存，并在樣品復核和送檢完成后對樣品及時進行無害化處理。熒光PCR試驗完畢后，為避免病毒通過污染的用具、廢棄的物品進行傳播，要做好人員和物品進出的管控，檢測接觸的器械及時消毒，檢測后的廢棄物及時進行無害化處理。

生豬屠宰企業非洲豬瘟自檢對于切斷非洲豬瘟傳播途徑、降低流通環節傳播風險意義重大。目前來看安康市屠宰企業自檢在實驗室配備、檢測人員、試劑及耗材、規范操作等方面上還有待進一步的改善和提高，屠宰企業應該充分認識，及早完善實驗室建設，建立相關管理體系，確保非洲豬瘟檢測工作順利準確進行。