梅花鹿花盤粉對(duì)小鼠股骨性能、雌性生殖器官及激素的影響

胡金軒，龍析宇，路 通，何玉華，孫學(xué)釗

(1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院 反芻動(dòng)物精準(zhǔn)營(yíng)養(yǎng)及智慧養(yǎng)殖科技創(chuàng)新中心，吉林 吉林 132109；2.吉林省反芻動(dòng)物精準(zhǔn)營(yíng)養(yǎng)與智慧生態(tài)養(yǎng)殖跨區(qū)域合作科技創(chuàng)新中心，吉林 吉林 132109)

梅花鹿是一種具有很高藥用、肉用價(jià)值的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，主要分布在我國(guó)吉林、黑龍江、遼寧、內(nèi)蒙古等省市[1]。梅花鹿花盤，又稱珍珠盤、鹿角帽，或因其形狀稱為鹿角脫盤、鹿脫盤或盤角盤，是梅花鹿收割完鹿茸之后在鹿茸的鋸口上生長(zhǎng)起來(lái)的平臺(tái)狀角盤，隨著生長(zhǎng)逐漸骨化，到鹿茸生長(zhǎng)的下一個(gè)周期前角盤脫離角柄，成為鹿花盤[2]。鹿花盤的藥用歷史悠久，藥用價(jià)值主要體現(xiàn)在強(qiáng)筋健骨，對(duì)乳腺炎、乳腺增生、活血消腫、子宮虛寒有很好的療效[3-4]，對(duì)陽(yáng)痿、遺精等癥狀有很好的緩解效果，還能夠改善腎臟功能。梅花鹿花盤含有鈣、磷、鉀、鈉、鎂、鐵、鋅、錳等礦物元素，還含有谷氨酸、天門冬氨酸、賴氨酸、絲氨酸等氨基酸，也含有蛋白質(zhì)和膠原蛋白質(zhì)、多肽、脂類和多糖等活性成分[5-6]，因此，梅花鹿花盤的功能開(kāi)發(fā)具有非常廣闊的市場(chǎng)[7]。

本試驗(yàn)將不同水平的梅花鹿花盤粉添加到小鼠的日糧中，監(jiān)測(cè)其對(duì)小鼠的生長(zhǎng)性能、股骨性能、生殖器官指數(shù)、血清性激素水平、抗炎因子的影響，探討梅花鹿花盤在小鼠上應(yīng)用的效果，為梅花鹿花盤產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)，為梅花鹿花盤的藥用功能提供更加精準(zhǔn)的數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 梅花鹿花盤粉，由吉林敖東鹿業(yè)有限公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理 選擇150只體重為(20±2)g的4周齡清潔級(jí)昆明系雌性小鼠，購(gòu)自江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司。飼養(yǎng)室的溫度為25 ℃，濕度為30%～45%，自由采食和飲水。

1.3 試驗(yàn)儀器 超微粉粹機(jī)(CWJ-63，浙江豐利粉碎設(shè)備有限公司)；顆粒飼料機(jī)(yx-60型，隆堯縣燁祥機(jī)械制造廠)；電子分析天平(JY3002，上海衡平儀器儀表廠)；離心機(jī)(TD5A，常州金壇三和儀器有限公司)；原子吸收光譜儀(AAS-2000型，北京元素?zé)艨倧S)；恒溫鼓風(fēng)干燥箱(KH-35T，深圳市瑞鑫達(dá)科教儀器貿(mào)易部)；懸掛式小鼠籠(HL-XG，合力科創(chuàng))；小鼠籠架(HL-XG，合力科創(chuàng))；小鼠用耳標(biāo)；耳號(hào)鉗(ST101，美國(guó) CLARKBIO)；手術(shù)剪(9.5 cm直頭，上海紅尊醫(yī)療器械有限公司)；采血管(10 mL，泰州民健醫(yī)療器械有限公司)；游標(biāo)卡尺、手術(shù)刀、移液器等實(shí)驗(yàn)室常用器械。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 將150只4周齡雌性小鼠隨機(jī)分成A、B、C、D、E共5組，每組30 只，A組作為對(duì)照組，B、C、D、E為試驗(yàn)組，梅花鹿花盤粉按0%、2%、3%、4%、5%添加的比例，與基礎(chǔ)日糧混合均勻，再用顆粒飼料機(jī)制成顆粒飼料，直徑為12 mm。飼養(yǎng)時(shí)間63 d，前7天為預(yù)飼期，后56天為正式期，小鼠日糧組成見(jiàn)表1。

表1 小鼠日糧組成與營(yíng)養(yǎng)成分

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能 試驗(yàn)開(kāi)始的前3天每天早上8：00飼喂前稱重，取平均值作為初始體重，試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天飼喂前再次稱重。根據(jù)試驗(yàn)初體重和試驗(yàn)?zāi)w重及試驗(yàn)天數(shù)計(jì)算平均日增重。

每天早晨8：00飼喂前稱量飼喂的飼料量和前1天剩余的飼料量，根據(jù)采食量和試驗(yàn)天數(shù)計(jì)算平均日采食量。

平均日采食量(ADI)=試驗(yàn)期采食量/試驗(yàn)天數(shù)

平均日增重(ADG)=(試驗(yàn)?zāi)w重-試驗(yàn)初體重)/試驗(yàn)天數(shù)

料重比(F/G)=日采食量/日增重

1.5.2 血清生化指標(biāo) 試驗(yàn)結(jié)束的最后1天早上6：00在小鼠處死剖檢前采血。每組隨機(jī)取4只小鼠摘眼球釆血，采血管置4 ℃冰箱過(guò)夜，第2天3 000 r/min離心5 min，用移液器吸取血清裝入1.5 mL的離心管，-20 ℃保存。

抗炎因子的測(cè)定：白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子(TNF-a),采用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked immnosorbent assay, ELISA)測(cè)定。

性激素的測(cè)定：雌二醇(E2)、孕酮(P)的測(cè)定，采用小鼠雌二醇檢測(cè)試劑盒和小鼠孕酮檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自武漢賽培生物科技有限公司。

1.5.3 器官指數(shù) 試驗(yàn)結(jié)束的最后1天早上8：00用頸椎脫臼法處死150只小鼠，立即剖檢并釆集肝臟、腎臟、脾臟、卵巢、子宮，剔除其上的結(jié)締組織及脂肪組織后稱重，計(jì)算各器官指數(shù)。

器官指數(shù)(mg/g)=器官重/體重

1.5.4 股骨性能 剖檢后采集小鼠的兩側(cè)股骨，放入自封袋，置于-20 ℃冰箱中冷凍保存。(1)待剖檢取樣的過(guò)程完成之后，將股骨上的肌肉和脂肪處理干凈，然后在電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中65 ℃烘干，制備成風(fēng)干樣品，放在電子天平上稱量其重量，然后放在4 ℃的冰箱中保存?zhèn)溆谩?2)用游標(biāo)卡尺測(cè)量股骨長(zhǎng)度、股骨橫徑。(3)將左側(cè)股骨的骨髓取出放液氮中保存，原子吸收光譜儀測(cè)定股骨中鈣含量。

1.6 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用 SPSS 22.0 軟件進(jìn)行單因子方差分析，所得結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 梅花鹿花盤粉對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能的影響 見(jiàn)表2。從表2可知，在小鼠的日糧中添加梅花鹿花盤粉后，末重隨著添加水平的增加先升高后降低，其中D組最高，與其余各組相比差異顯著(P<0.05)；平均日增重試驗(yàn)組和對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)，各試驗(yàn)組之間差異不顯著(P>0.05)；平均日采食量隨著添加水平的增加先升高后降低，其中D組最高，與其余各組相比差異顯著(P<0.05)；料重比降低，其中D組最低。

表2 梅花鹿花盤粉對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能的影響

2.2 梅花鹿花盤粉對(duì)小鼠股骨性能的影響 見(jiàn)表3。從表3可知，股骨重量和股骨鈣含量隨著梅花鹿花盤粉添加量的增加而增加，D組、E組最高，與A組、B組、C組相比差異顯著(P<0.05)；股骨長(zhǎng)度E組最高，與其余各組相比差異顯著；股骨橫徑無(wú)顯著變化(P>0.05)。

表3 梅花鹿花盤粉對(duì)小鼠股骨性能的影響

2.3 梅花鹿花盤粉對(duì)小鼠生殖器官指數(shù)的影響 見(jiàn)表4。從表4可知，梅花鹿花盤粉使子宮指數(shù)增加，E組最高，與其余各組相比差異顯著(P<0.05)；對(duì)小鼠卵巢指數(shù)無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表4 梅花鹿花盤粉對(duì)小鼠生殖器官指數(shù)的影響

2.4 梅花鹿花盤粉對(duì)小鼠血清性激素水平的影響 見(jiàn)表5。從表5可知，小鼠血清中雌二醇的含量逐漸降低，E組最低，與其余各組相比差異顯著(P<0.05)；孕酮的含量逐漸升高，E組最高，與其余各組相比差異顯著(P<0.05)。

表5 梅花鹿花盤粉對(duì)小鼠血清性激素水平的影響

2.5 梅花鹿花盤粉對(duì)小鼠血清抗炎因子的影響 見(jiàn)表6。從表6可知，IL-6的濃度有所降低，但試驗(yàn)組和對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)；IL-8、TNF-α的濃度降低，D組、E組與A組、B組、C組相比差異顯著(P<0.05)。

表6 梅花鹿花盤粉對(duì)小鼠血清抗炎因子的影響

3 討論

梅花鹿花盤中含有的多種生長(zhǎng)素等有效成分，對(duì)動(dòng)物機(jī)體具有很好的保健作用[8]。研究表明，鹿花盤中的蛋白和多肽等可以通過(guò)調(diào)整機(jī)體的代謝來(lái)促進(jìn)機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育[3]。本試驗(yàn)在小鼠的日糧中添加梅花鹿花盤粉之后，平均日增重試驗(yàn)組和對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)，各試驗(yàn)組之間差異不顯著(P>0.05)，這種體重的增加可能與花盤粉中的成分有關(guān)。本試驗(yàn)中平均日采食量也增加，可能是由于梅花鹿花盤粉本身的骨香味使得飼料的適口性增加。

骨質(zhì)疏松是很多原因引起的一種骨病，骨組織有正常的鈣化，鈣鹽與基質(zhì)呈正常比例，以單位體積內(nèi)骨組織量減少為特點(diǎn)的代謝性骨病變[9]。在多數(shù)骨質(zhì)疏松中，骨組織的減少主要由于骨質(zhì)吸收增多所致，容易導(dǎo)致骨骼的疼痛，而且還會(huì)增加骨折的風(fēng)險(xiǎn)[10]。梅花鹿花盤中含有大量的無(wú)機(jī)物，含量大約為58%，有機(jī)物的含量大約為42%，有機(jī)物要比無(wú)機(jī)物的含量少[11]。本試驗(yàn)中股骨重量、股骨長(zhǎng)度和股骨鈣含量增加，正因?yàn)槊坊够ūP中含有大量的鈣、磷等礦物質(zhì)，同時(shí)還有很多蛋白與膠原蛋白存在，促進(jìn)小鼠股骨的生長(zhǎng)發(fā)育，膠原蛋白和鈣的共同作用使得股骨中鈣的沉積作用較好，同時(shí)使血清中的鈣、磷的濃度保持在一定的比例和水平，為骨的生長(zhǎng)提供一個(gè)有效的內(nèi)環(huán)境，且效果明顯，可以起到預(yù)防骨質(zhì)疏松的作用[12]。梅花鹿花盤粉具有促進(jìn)生長(zhǎng)、增加骨密度，鹿花盤中含有的膠原蛋白，大部分是Ⅱ型膠原蛋白，骨關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎都是因失去合成和維持Ⅱ型膠原蛋白的能力造成的[13]。王權(quán)等[14]用鹿骨粉治療大鼠卵巢摘除后所致的骨質(zhì)疏松，試驗(yàn)結(jié)果表明，鹿骨粉可以改善由卵巢摘除所導(dǎo)致的骨質(zhì)微結(jié)構(gòu)及血清學(xué)指標(biāo)的變化，提示其能夠預(yù)防及治療雌激素下降所致的骨質(zhì)疏松。單純的依靠補(bǔ)鈣來(lái)預(yù)防或治療骨質(zhì)疏松是不行的，還需要補(bǔ)充骨蛋白質(zhì)，梅花鹿花盤中含有的蛋白和膠原蛋白的協(xié)同作用，在骨質(zhì)疏松方面也許將會(huì)開(kāi)啟新的研究?jī)?nèi)容。

關(guān)晴等[15]用鹿角盤的水提物治療乳腺增生的大鼠，使得乳腺增生的大鼠子宮指數(shù)恢復(fù)到正常組的狀態(tài)，說(shuō)明鹿花盤粉能夠?qū)ψ訉m的生長(zhǎng)發(fā)育有促進(jìn)的作用。本試驗(yàn)中梅花鹿花盤粉使子宮指數(shù)增加，E組最高，與其余各組相比差異顯著(P<0.05)；對(duì)小鼠卵巢指數(shù)無(wú)顯著影響(P>0.05)，與關(guān)晴等的報(bào)道一致。本草綱目記載鹿角盤對(duì)治療陰證瘡瘍、乳癰初起紅腫熱痛及各種腺體炎癥，子宮寒冷、崩漏帶下等癥，兒童痄腮、婦女乳房腫脹、乳腺炎、乳腺增生，預(yù)防子宮肌瘤、乳腺癌等有明顯的效果[16]。梅花鹿花盤粉能夠活血化瘀，用具有消散作用，梅花鹿花盤作為保健品開(kāi)發(fā)具有廣闊的市場(chǎng)前景。

鹿花盤對(duì)婦女產(chǎn)后乳房炎、乳頭皸裂、乳腺增生能起到預(yù)防和治療的作用。雌激素含量過(guò)多會(huì)導(dǎo)致乳腺增生，雌激素含量過(guò)多的食物勢(shì)必會(huì)引起乳腺增生的加重。乳腺增生模型大鼠的血清雌二醇水平升高，孕酮水平降低[17]。本試驗(yàn)中小鼠血清中雌二醇含量隨鹿花盤粉添加量增加而逐漸降低，E組最低，與其余各組相比差異顯著(P<0.05)；孕酮的含量逐漸升高，E組最高，與其余各組相比差異顯著(P<0.05)。添加鹿花盤粉降低了雌二醇水平，可能起到預(yù)防乳腺增生的作用。

白細(xì)胞介素是由多種細(xì)胞產(chǎn)生并作用于多種細(xì)胞的一類細(xì)胞因子[18-19]，IL-6、IL-8是白細(xì)胞介素家族中的主要成員。白細(xì)胞介素在傳遞信息，激活與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞，介導(dǎo)T、B細(xì)胞活化、增殖與分化及在炎癥反應(yīng)中起重要作用[20-21]。TNF-α是腫瘤壞死因子，可以促進(jìn)T細(xì)胞產(chǎn)生各種炎癥因子，進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，是一種能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)明顯毒性的細(xì)胞因子[22-24]。IL-6、IL-8及TNF-a能夠誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生炎癥，三者的水平反應(yīng)機(jī)體的炎癥狀況[25]。梅花鹿花盤粉有預(yù)防炎癥發(fā)生的作用。本試驗(yàn)中IL-6的濃度有所降低，但試驗(yàn)組和對(duì)照組相比差異不顯著；IL-8、TNF-α的濃度降低，D組、E組與A組、B組、C組相比差異顯著(P<0.05)。鹿花盤粉能有效降低這些細(xì)胞炎性因子的濃度，從而起到調(diào)控自身內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，使機(jī)體的炎癥趨于降低[26-28]，但其機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究。通過(guò)本試驗(yàn)得出梅花鹿花盤粉在小鼠日糧中的添加比例以4%～5%為宜。