犬吉氏巴貝斯蟲病的診治分析

翟曉虎，張風榮，李 玲，趙學剛，賀衛華

(1.江蘇農牧科技職業學院，江蘇 泰州 225300；2.山東畜牧獸醫職業學院，山東 濰坊 261061)

巴貝斯蟲是由蜱蟲傳播的一種血液寄生蟲，全世界廣泛分布。筆者近期接診1例犬吉氏巴貝斯蟲感染的病例，使用阿托伐醌(Atovaquone)和阿奇霉素聯合治療，后期使用克林霉素和強力霉素聯合用藥方法進行鞏固，效果良好，診治過程介紹如下。

1 病例介紹

松獅犬，3歲，雄性未絕育，體重為26 kg，主述：該犬1周前開始出現精神不好，食欲減退，2 d前食欲廢絕，喝水量較之前減少，尿液呈棕褐色，不愿運動，嗜睡。

2 臨床檢查

聽診呼吸頻率為52 次/min，心率160 次/min，體溫40.1 ℃。視診可見該犬精神萎靡、喜臥、全身無力，鼻鏡干燥，被毛雜亂無光澤，可視黏膜蒼白、黃染。

3 實驗室檢驗

3.1 血常規檢測 頭靜脈采集血液，EDTA-K2(乙二胺四乙酸二鉀)抗凝。采用Mindray BC-5000 Vet獸用全自動血液細胞分析儀檢查血常規。結果顯示，紅細胞數(RBC)2.14× 1012/L(正常值5.5× 1012～8.5× 1012/L、紅細胞壓積(HCT)9.4%(正常值37%～55%)、血紅蛋白濃度(HGB)29 gL(正常值110～190 g/L)和血小板數(PLT)46× 109/L(正常值117× 109～490× 109/L)，均嚴重低于正常范圍，說明該犬有嚴重的貧血。其他檢測結果未見異常。

3.2 血涂片檢查 EDTA抗凝血制備血涂片，瑞氏吉姆薩染色鏡檢，結果見中插彩版圖1。在多個紅細胞內見淡藍色的環形蟲體，疑似為犬吉氏巴貝斯蟲。另外可見紅細胞大小不均，存在少量大紅細胞、球形紅細胞、多染性紅細胞和有核紅細胞。白細胞大小、著色良好。

3.3 血液生化檢測 頭靜脈采集血液，肝素鋰抗凝，采用斯馬特SMT-120V全自動生化分析儀檢測血液生化指標。血液生化結果顯示，總膽紅素升高，其他未見異常，提示該犬有溶血的可能。

3.4 PCR檢測 采用蛋白酶K裂解、苯酚抽提的方法從EDTA抗凝血中提取該犬血液中的DNA，根據犬巴貝斯蟲18S rRNA 基因設計的犬吉氏巴貝斯蟲和犬巴貝斯蟲通用引物，上游引物：5′-GTCTTGTAATTGGAATGATGGTGAC-3′，下游引物：5′-ATGCCCCCAACCGTTCCTATTA-3′，擴增目的片段339 bp，引物由英濰捷基(上海)貿易有限公司合成[1]。25 μL PCR反應體系：2×TaqPCR Master Mix 12.5 μL，10 mmol/L 上、下游引物各0.5 μL，模板DNA 2 μL，補水至25 μL。PCR 循環參數:94 ℃預變性5 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，重復10個循環，每個循環退火溫度降0.5 ℃；然后94 ℃變性15 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，重復25個循環；最后72 ℃延伸5 min。PCR產物用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳鑒定。鑒定結果如圖2所示，待檢樣品PCR擴增條帶大小為339 bp，與設計的理論值相符，與陽性對照一致，同時陰性對照沒有條帶擴增，說明沒有假陽性。因此可判定該犬感染了巴貝斯蟲。

圖2 PCR檢測電泳圖

結合臨床癥狀、血常規檢查、血涂片鏡檢可見紅細胞內巴貝斯蟲蟲體和PCR可檢測到犬巴貝斯蟲基因片段，診斷為犬吉氏巴貝斯蟲感染。

4 治療與轉歸

治療犬吉氏巴貝斯蟲病的原則為殺蟲、補血、保肝、防止繼發感染。因該犬貧血情況較嚴重，危及生命，需要先給該犬輸血。采集健康犬血液進行交叉配血試驗。根據該交叉配血結果，輸入200 mL新鮮血液[2]，肌內注射促紅細胞生成素5.0 mL(1 000 IU/mL)和右旋糖酐鐵3.0 mL(0.1 g/mL)以促進血液的生成。該病例使用阿托伐醌[13.3 mg/(kg·bw·d)，口服]和阿奇霉素[10 mg/(kg·bw·d)，口服]聯合治療，連用2周。

治療過程中需要不斷監控患犬的血液學指標，紅細胞數量、血紅蛋白濃度和紅細胞壓積。治療第2天患犬出現嘔吐，皮下注射止吐寧0.1 mL/(kg·bw)(10 mg/mL)。治療第7天，患犬恢復食欲，血常規檢查紅細胞數4.3×1012/L、紅細胞壓積22.4%、血紅蛋白濃度77 g/L。治療第14天，紅細胞參數恢復到正常范圍。為防止復發，使用克林霉素[12.5 mg/(kg·bw·d)，口服]、強力霉素[10 mg/(kg·bw·d)，口服]聯合用藥方法進行鞏固治療1周。1個月后，該犬所有血液指標正常，PCR檢測呈陰性。

5 討論

巴貝斯蟲病在世界廣泛分布，在熱帶、亞熱帶和溫帶地區特別嚴重。犬感染吉氏巴貝斯蟲的臨床癥狀主要表現為高熱、黏膜蒼白、黃染、尿液深黃色或暗褐色。發病時間主要集中在春夏之交和夏秋之交，這也正是巴貝斯蟲的傳播者蜱蟲的活躍期[3]。近年來由于藥物的長期使用，部分巴貝斯蟲對藥物產生耐藥，導致該病治療周期較長[1]。目前在我國流行的犬巴貝斯蟲主要為犬吉氏巴貝斯蟲[4-5]。吉氏巴貝斯蟲感染是一種蜱傳播疾病，感染犬可能出現免疫介導性溶血性貧血，治療不及時可能迅速死亡[6]。該病的致病機理是蟲體會在紅細胞內繁殖，破壞紅細胞引起溶血性貧血，并引起黃疸[7]。患犬常表現精神不佳、喜臥、貧血、發熱、黃疸、血紅蛋白尿、可視黏膜蒼白等癥狀。急性感染或初次感染巴貝斯蟲的犬，血涂片不一定發現蟲體，但作為傳染原會使感染擴散，只有嚴重患犬通常可通過血涂片鏡檢發現蟲體而確診。PCR技術為準確地診斷感染早期的病犬和帶蟲犬提供了敏感性高、特異性好、試劑容易獲得、檢測速度快的診斷方法[8]。18S rRNA基因常用于犬巴貝斯蟲的PCR檢測，結合PCR產物限制性多態性分析(PCR-RFLP)可以鑒別不同種的犬巴貝斯蟲[1]。因此，通過結合血涂片血液寄生蟲檢查和PCR檢測可大大提高巴貝斯蟲病的檢出率，并能區分所感染巴貝斯蟲的類型。

治療犬巴貝斯蟲病的殺蟲藥通常使用抗梨形蟲的藥物。貝尼爾被視為傳統上最為有效的治療犬巴貝斯蟲病的藥物，過去臨床使用較多。由于貝尼爾的肝毒性較大，使用該藥物殺蟲的同時需要使用保肝藥物，即便如此劑量掌控不好也容易導致患犬死亡。阿托伐醌是抗原蟲動物藥，用于治療人類肺孢子蟲感染，對于抗巴貝斯蟲感染也有一定效果，阿托伐醌聯合阿奇霉素治療吉氏巴貝斯蟲最有效，是目前使用較多的治療犬巴貝斯蟲病的藥物。近年來，有報道顯示，貝尼爾治療后患犬的復發率較高，阿托伐醌聯合阿奇霉素治療后為了降低復發率，最好使用克林霉素和強力霉素進行鞏固治療。鑒于犬巴貝斯蟲很難被完全清除，復發率較高，因此做好疾病的預防十分重要，尤其是生活于犬巴貝斯蟲病流行地區或是經常在戶外運動的犬一定要定期體外驅蟲，切斷傳播途徑。