基于斑馬魚行為變化監(jiān)測水體突發(fā)苯污染的研究

（西安工業(yè)大學，陜西 西安 710002）

一、引言

為了研究苯對于斑馬魚的行為影響，本實驗采用RTB和計算機視頻追蹤技術，通過監(jiān)測斑馬魚的游泳速度、深度、轉彎次數(shù)、總加速度、分散度、健康指數(shù)、分形維數(shù)和平均距離加速度8項指標的變化以正常水體中斑馬魚的行為變化為基礎，模擬了在汞影響下斑馬魚的行為變化。

二、實驗材料及方法

（一）斑馬魚的培養(yǎng)

斑馬魚由中國科學院武漢水生所提供，本實驗室飼養(yǎng)繁殖。采用流水式培養(yǎng)，養(yǎng)殖用水為脫氯自來水，水溫為(28±1)℃，溶解氧為(6.5±0.2)mgL－1，光照周期為10h:14h，每天投食2～3次。選擇魚齡為6～8個月，體長為(30±0.2)mm，體重為(300±0．2)mg的斑馬魚，每組實驗用魚5條，雌雄比例為3:2，實驗前24h不喂食。

（二）實驗試劑

汞，藥品先配制成母液，實驗室再稀釋到所需濃度。

（三）實驗設計

采用水質毒性在線檢測儀RTB進行汞突發(fā)性暴露下斑馬魚的個體和群體行為變化的定量監(jiān)測。在一個尺寸為400×75×300 mm的測試箱前設置一個CCD攝像頭，利用攝像追蹤和圖像分析技術，實時跟蹤記錄每條魚的多種行為變化。通過軟件轉換計算出5條魚在5 min內的個體行為參數(shù)游泳速度、深度、轉彎次數(shù)、總加速度、分散度、健康指數(shù)、分形維數(shù)和平均距離加速度。

1.本試驗采用筆架山原水,試驗共7小時，試驗的前兩小時均為空白，后5小時是加藥反應時間。

2.原水水質:溫度25.3℃，pH 7.52，濁度4.12NTU，余氯 0.01mg.L-1，電導率151.5us/cm，溶解氧8.21mg.L-1。

3.苯:采用分析純試劑，先用丙酮作溶劑，再用吐溫80溶解并配置母液。

4.流速：采用循環(huán)動態(tài)60升每小時。

5.斑馬魚：按照《GBT13267-91水質對斑馬魚的急性毒性方法》執(zhí)行培養(yǎng)馴化。

三、結果與討論

斑馬魚個體行為的變化：

在一定的水質和環(huán)境因素條件下斑馬魚的個體行為和群體行為都具有規(guī)律性，是用于突發(fā)性污染條件下斑馬魚行為變化的可靠依據(jù)。

從速度表中看出苯濃度為0.01ppm、0.2ppm和10ppm暴露于斑馬魚中，速度基本沒有多大的變化，都在30至60mm/s的正常范圍內，10ppm在加藥10分鐘之內有短暫的速度增加。苯濃度30ppm加藥之后出現(xiàn)速度快速增加，10分鐘之后又降到20mm/s附近，并持續(xù)2個小時，出現(xiàn)這種情況是因為魚剛剛接觸到污染物，為了躲避而增加速度，在中毒之后，速度降下來。50ppm反應非常明顯，剛接觸到污染物也是躲避而加速，但該濃度使斑馬魚致命，加藥1小時之后，魚都不動，并在試驗過程中逐漸死亡。

從實驗中看出，0.01和0.2ppm基本在150至200mm的正常范圍內，和空白基本一致，變化很小。10ppm在加藥之后魚高度較高在200mm以上。30ppm高度無明顯變化，50ppm則在加藥之后魚高度較低在50mm一下，這是魚中毒之后的癥狀。

從實驗中可以看出，0.01ppm、0.2ppm和10ppm在加藥之后和空白都無明顯變化。30ppm和50ppm在加藥10分鐘內轉彎次數(shù)增加明顯，將近一倍，然后快速降低，并在2次一下，基本不轉身。

總加速度10ppm和50ppm有20分鐘的快速增加和降低，波動較大。其余濃度無明顯變化。

分散度表中加藥之后的0.01ppm和0.2ppm基本和空表一樣在10至25之間。10ppm加藥之后有所增加，但不明顯。30ppm加藥之后增加幅度明顯變化。50ppm則增加之后快速下降到5以下。

平均距離表中0.01ppm、0.2ppm和10ppm在加藥之后都變化不明顯，在100至200之間，較正常。30ppm有20分鐘的短暫增加之后也逐漸在正常區(qū)間。50ppm則增加之后，快速降低，維持1.5小時之后，其變化幅度較大。

四、結論

斑馬魚的游動行為能靈敏、準確地反映突發(fā)性 氯化鎘和敵敵畏污染。實驗所監(jiān)測的 6 項指標中， 斑馬魚游動速度、深度、轉次和平均距離較為敏感， 在正常水質環(huán)境中變化穩(wěn)定，而在突發(fā)污染暴露下 短時間內就發(fā)生明顯的變化，是用于水質預警的可靠指標。 不同種類的脅迫因子對魚體造成一定程度的傷害有所不同，環(huán)境脅迫產(chǎn)生的應激行為反應機理十分復雜，它涉及到神經(jīng)系統(tǒng)、內分泌系統(tǒng)及免疫系統(tǒng) 等一系列活動，機體通過神經(jīng)和內分泌途徑幾乎動 員了所有的器官和組織來應付應激源的刺激[15]。 敵敵畏等有機磷農藥主要抑制生物的神經(jīng)毒性，而氯化鎘在生物體內有明顯的蓄積作用，能損傷魚類 的肝臟和腎臟等器官。在兩種不同種類的污染物脅迫下，斑馬魚的行為強度在急劇增大或減小后都出現(xiàn)了明顯的調節(jié)適應過程，基本符合環(huán)境壓力模型， 但斑馬魚對兩種物質的行為響應方式存在顯著差 異。在7 mg L －1的氯化鉻暴露下，斑馬魚的個體行 為參數(shù)調節(jié)明顯，接觸到污染物后有明顯的行為強 度增大過程，游動深度顯著下降。而在20 mg L －1的 DDVP 的暴露實驗中，斑馬魚則沒有過度活躍的行為現(xiàn)象，而是直接降低，魚在水面停留時間明顯增長。且魚群分布變化明顯

在后續(xù)的研究中，應從污染物作用機理和效果 入手，采用不同的模型和計算方法，根據(jù)斑馬魚的行 為反應差異區(qū)分污染物的類型，進一步提高在線生 物預警系統(tǒng)在水質預警中的應用。