核仁小分子RNA宿主基因6在乳腺癌組織中的表達情況及與患者臨床特征和預后的關系

宋寧寧，梁冰

鄭州大學第二附屬醫院乳腺外科，鄭州 450012

乳腺癌作為威脅女性健康的最常見的惡性腫瘤，發病率呈上升趨勢，且發病年齡日益年輕化[1]。盡管手術、放化療、內分泌治療及靶向治療等治療方案日益完善，但乳腺癌患者總體預后依然不佳，多數患者死于轉移、復發或化療耐藥[2]。因此，深入探討與乳腺癌轉移、復發或化療耐藥密切相關的敏感基因或標志物已成為臨床研究重點。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）作為一類廣泛存在于機體內的內源性RNA，長度大于200個核苷酸，其蛋白編碼功能缺失或僅能編碼小分子多肽[3]。近年來研究發現，lncRNA不僅參與了多種生理、病理過程，而且與人類惡性腫瘤的發生發展密切相關[4-5]。核仁小分子RNA宿主基因6（small nucleolar RNA host gene 6，SNHG6）作為SNHG家族成員，是一種具有重要調控功能的lncRNA。研究發現，SNHG6在骨肉瘤組織中高表達，是一種涉及骨肉瘤進展的新型分子[6]。亦有研究指出，SNHG6在前列腺癌中表達上調且與不良預后有關[7]。本研究分析了乳腺癌組織和正常乳腺組織中SNHG6mRNA的表達情況，探討其與患者臨床特征及預后的關系，以期為判斷乳腺癌的預后提供理論依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年3月至2015年3月于鄭州大學第二附屬醫院接受改良根治性手術的乳腺癌患者。納入標準：①首次就診，術前未接受過放化療、內分泌治療及靶向治療；②術后病理證實為乳腺浸潤性導管癌；③臨床資料及隨訪資料完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②合并心、肝、腎等重要臟器嚴重功能障礙；③發生遠處轉移。依據納入和排除標準，本研究共納入112例患者。患者的年齡為29～75歲，平均年齡為（52.04±9.92）歲；組織學分級：Ⅰ級34例，Ⅱ級38例，Ⅲ級40例；TNM分期：Ⅰ期38例，Ⅱ期50例，Ⅲ期24例；病理分級：Ⅰ級16例，Ⅱ級49例，Ⅲ級47例；發生淋巴結轉移51例。術中留取乳腺癌組織及距離腫瘤邊緣＞2 cm的正常乳腺組織，放入凍存管內，置于液氮中，-80℃保存。

1.2 實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測乳腺癌組織和正常乳腺組織中SNHG6mRNA 的相對表達量

取乳腺癌組織和正常乳腺組織，切碎，研磨，加入細胞裂解液，參照總RNA提取試劑盒（購自美國Invitrogen公司）說明書提取總RNA，利用紫外分光光度計檢測其純度，參照逆轉錄試劑盒（購自美國Promega公司）說明書將RNA逆轉錄為cDNA。參照聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）擴增試劑盒說明書，采用StepOne實時熒光定量PCR儀（購自美國ABI公司）對引物進行擴增，引物及內參β-actin均由生工生物工程（上海）股份有限公司設計合成。SNHG6上游引物為5'-ATACTTCTGCTTCGTTACCT-3'，下游引物為5'-CTCATTTTCATCATTTGCT-3'；β-actin上游引物為5'-CAGGAAGGAAGGCTGGAAG-3'，下游引物為5'-CGGGAAATCGTGCCTGAC-3'。反應條件：95 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共36個循環，各樣品分別設6個復孔。以β-actin為內參，采用2-△△Ct法計算組織中SNHG6mRNA的相對表達量。

1.3 隨訪方法

患者出院后，采取門診復查、電話、微信等方法進行隨訪，隨訪截止時間為2019年3月31日，以乳腺癌相關死亡作為終點事件，記錄患者的總生存時間（overall survival，OS）。

1.4 統計學分析

采用SPSS 21.0軟件對數據進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，組間比較采用Logrank檢驗；采用Cox比例風險回歸模型進行多因素分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌組織和正常乳腺組織中SNHG6 mRNA相對表達量的比較

乳腺癌組織中SNHG6mRNA的相對表達量為（2.23±0.14），明顯高于正常乳腺組織的（1.02±0.12），差異有統計學意義（t=72.175，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征乳腺癌患者乳腺癌組織中SNHG6mRNA 相對表達量的比較

不同年齡、腫瘤直徑、組織學分級、分子分型和孕激素受體表達情況乳腺癌患者乳腺癌組織中SNHG6mRNA的相對表達量比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。TNM分期為Ⅲ期、病理分級為Ⅲ級、雌激素受體陰性、Ki-67水平≥14%、有淋巴結轉移的乳腺癌患者乳腺癌組織中SNHG6mRNA的相對表達量分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、病理分級為Ⅰ～Ⅱ級、雌激素受體陽性、Ki-67水平＜14%、無淋巴結轉移的患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1）

2.3 生存情況的比較

隨訪時間為3～72個月，中位隨訪時間為44個月。以乳腺癌組織中SNHG6mRNA相對表達量的P25值為界值，將患者分為SNHG6mRNA低表達組（n=29）和SNHG6mRNA高表達組（n=83）。結果顯示，SNHG6mRNA低表達組患者的平均OS為（58.62±4.15）個月，長于SNHG6mRNA高表達組患者的（41.12±2.86）個月。SNHG6mRNA低表達組患者的累積生存率為72.4%，明顯高于SNHG6mRNA高表達組患者的38.6%，差異有統計學意義（χ2=8.793，P=0.003）（圖1）。

表1 不同臨床特征乳腺癌患者乳腺癌組織中SNHG6 mRNA相對表達量的比較（n=112）

圖1 SNHG6mRNA低表達組（n=29）和SNHG6mRNA高表達組（n=83）乳腺癌患者的生存曲線

2.4 乳腺癌患者預后影響因素的多因素分析

以TNM分期、病理分級、雌激素受體表達情況、Ki-67水平、淋巴結轉移情況和SNHG6mRNA相對表達量為自變量，以患者預后作為因變量進行Cox比例風險回歸分析，結果顯示，TNM分期、病理分級和SNHG6mRNA相對表達量均是乳腺癌患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。（表2）

表2 乳腺癌患者預后影響因素的多因素分析（n=112）

3 討論

乳腺癌作為威脅中國女性生命安全的主要疾病之一，早期缺乏典型癥狀而導致多數患者確診時已處于進展期。雖然現有的以手術切除為主，術后化療、內分泌治療、靶向治療為輔的綜合治療方案在改善乳腺癌患者生存質量及延長患者生存時間中發揮了重要作用，但由于患者預后的影響因素涉及臨床、病理特征等多個方面，特別是隨著分子生物學技術的進展，一些生物分子對患者預后的影響越來越受到重視，因此積極探討影響乳腺癌患者預后的生物學指標以指導臨床實踐已成為臨床研究重點[8-9]。lncRNA作為一類非編碼調控RNA，可與其他分子（如DNA、金屬離子、RNA、蛋白質）等相互作用，從而在基因轉錄及翻譯、染色質重編程、表觀遺傳、RNA轉換等多種生物學過程中扮演重要角色[10-11]。進一步研究發現，多種腫瘤組織中出現lncRNA表達異常，且與腫瘤的發生、進展、轉移、化療耐藥等關系密切[12-13]。SNHG6作為SNHG家族重要成員，與溶酶體結構整合及翻譯過程關系密切[14]。研究發現，SNHG6可促進結直腸癌發生，且參與了結直腸癌細胞的增殖、遷移及侵襲過程[15-16]。本研究結果顯示，乳腺癌組織中SNHG6mRNA的相對表達量明顯高于正常乳腺組織，說明SNHG6在乳腺癌組織中表達上調。本研究結果還顯示，TNM分期為Ⅲ期、病理分級為Ⅲ級、有淋巴結轉移的乳腺癌患者乳腺癌組織中SNHG6mRNA的相對表達量較高，說明SNHG6可能參與了乳腺癌的發展、轉移過程，同時，本研究還發現，雌激素受體陰性及Ki-67高表達的乳腺癌患者乳腺癌組織中SNHG6mRNA的相對表達量較高。

有研究指出，SNHG6表達上調預示腎細胞癌預后不良[17]。Yan等[18]研究發現，SNHG6與胃癌患者的不良預后有關。本研究的生存分析結果顯示，SNHG6mRNA低表達組患者的OS長于SNHG6mRNA高表達組，累積生存率高于SNHG6mRNA高表達組，說明SNHG6mRNA表達情況與乳腺癌患者預后有關，SNHG6mRNA相對表達量越高預示患者預后越差。本研究的Cox比例風險回歸分析結果顯示，TNM分期、病理分級和SNHG6mRNA相對表達量均是乳腺癌患者預后的獨立危險因素，進一步說明SNHG6mRNA表達情況與乳腺癌患者預后有關，SNHG6mRNA高表達是患者預后的高危因素。

綜上所述，SNHG6mRNA在乳腺癌組織中表達上調，且與乳腺癌的發生、發展及不良預后有關，是患者預后的獨立危險因素，但其具體作用機制尚待進一步研究。