聊一聊標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)

文丨曾春（四川省阿壩州壤塘縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科）

在生物醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)發(fā)展中，放射免疫分析成為重點(diǎn)，其存在較高的靈敏度，在操作中更方便，是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的重要技術(shù)。在反射免疫分析呈現(xiàn)后，一些非放射性標(biāo)記免疫技術(shù)也開始增加，尤其是酶免疫分析和時(shí)間分辨熒光免疫分析，得到新的發(fā)展。下面，對標(biāo)記免疫檢驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行聊一聊。

新一代RIA和免疫反射測量法

第一，固相材料。基于相關(guān)實(shí)驗(yàn)的分析，固相RIA和免疫放射測量法在實(shí)際期間，具有較強(qiáng)的靈敏度，測量范圍和穩(wěn)定性都好于其他方法。在實(shí)際操作期間，不需要使用分離機(jī)進(jìn)行分離，獲得的精密度更高，達(dá)到了技術(shù)的自動化發(fā)展。

第二，固相抗體包被技術(shù)。在對固相抗體進(jìn)行制備期間，不僅要分析載體的理化性質(zhì)，還需要對影響因素詳細(xì)分析。常規(guī)制備固相抗體，其使用的為塑料球或者管，在對試管研究的時(shí)候，可以進(jìn)行包被條件的研究。實(shí)際上，檸檬酸緩沖液結(jié)合抗原量較高。

第三，BAS-IRMA。BAS為生物素，在1986年，首次將IRMA技術(shù)引入，并成立了新一代的IRMA。固相抗體BASIRMA，是BAS與試管固相抗體原技術(shù)進(jìn)行結(jié)合，形成新的競爭法，在實(shí)際應(yīng)用期間，能達(dá)到多種小分子化合物的檢測，也可以達(dá)到長期保存。在管內(nèi)，能同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)和測量定工作，組裝試劑盒更方便，操作非常簡單，符合RIA分析技術(shù)的自動化發(fā)展需要。

第四，固相二抗RIA。RIA技術(shù)的引進(jìn)，開始應(yīng)用于甲胎蛋白、血栓燒和人絨膜促性腺激素等試驗(yàn)中，都獲得良好效果。對該模式進(jìn)行設(shè)計(jì)，能達(dá)到RIA的自動化發(fā)展。實(shí)際上，試管固相二抗也是一種對固相分離的方法，能活化塑料管，對其加膜處理后，也可以進(jìn)行長期保存。在測定期間，在二抗管中增加第一抗體，能促使管放射性的測量。該操作在整體上更簡單，在測定蛋白質(zhì)等大分子化合物和小分子半抗原中，都獲得較高的應(yīng)用價(jià)值。

第五，在一個(gè)管內(nèi)對兩種化合物的測定。在早期測定期間，因?yàn)楣滔噍d體受到一定條件的限制，還無法促使其應(yīng)用水平的提升。近幾年，隨著固相載體的研究，增加了成熟工藝。如：IRMA，能實(shí)現(xiàn)甲狀腺激素和卵泡激素的同時(shí)測定，可以在固相抗體管中，實(shí)現(xiàn)兩個(gè)激素濃度的測量。

新一代EIA

第一，酶聯(lián)免疫熒光測量法。該方法能夠達(dá)到有效的吸附試驗(yàn)和熒光免疫分析。在國外，出現(xiàn)了專門的測量儀器，獲得了較高的自動化程度。對于酶聯(lián)免疫熒光測量法的原理，其測量主要為底物和示蹤信號，尤其是標(biāo)記的堿性磷酸酶，在酶的作用下，將獲得較高強(qiáng)度的熒光物質(zhì)。

第二，BAS-ELISA。該方法是BAS和ELISA結(jié)合，該檢測方法在免疫后，通過酶標(biāo)親和素的增加，能在一段時(shí)間內(nèi)洗滌，增加底物后顯色。同時(shí)，其存在的一個(gè)抗體可以分解出多個(gè)生物素分子，結(jié)合一個(gè)酶標(biāo)親和素，將獲得較大效應(yīng)和靈敏度。

第三，增強(qiáng)發(fā)光EIA。該方法是EIA和發(fā)光免疫分析方法的結(jié)合，解決了信號不穩(wěn)定問題。該技術(shù)是將穩(wěn)定增強(qiáng)劑增加到酶催化發(fā)光體系中，促使發(fā)光信號更穩(wěn)定。該方法和ELEIA體系獲得的效果相同。

第四，磁顆粒ELISA。ELISA的改良為酶標(biāo)可磁化抗體免疫測量，通過標(biāo)記酶，制成可磁化固相分離機(jī)。在進(jìn)行測定工作中，是在試管中增加McAb和可磁化抗FITC顆粒分離劑，形成夾心免疫復(fù)合物。

第五，競爭性固相夾心EIA測半抗原。對于小分子的競爭性固相夾心EIA測半抗原，使用的為液相競爭法，在該方法執(zhí)行期間，實(shí)際的操作較為復(fù)雜，存在的重復(fù)性較差。在國外對其研究中，發(fā)現(xiàn)一種雙半抗原夾心競爭法，將其與化合物進(jìn)行結(jié)合后，會形成穩(wěn)定的雙半抗原結(jié)合物。在測定期間，隨著兩者的結(jié)合和洗滌完成后，獲得加酶標(biāo)抗體。

時(shí)間分辨熒光免疫測定技術(shù)

第一，基于EU3+標(biāo)記物的TrFIA。EU3+鏈親和素，形成了新的BAS-TrFIA技術(shù)，獲得了更高的靈敏度。在對其制備期間發(fā)放更簡單，獲得的穩(wěn)定性和通用性較強(qiáng)，適合對乙型肝炎病毒、胰島素等進(jìn)行檢測。EU3+蛋白，在和IgG進(jìn)行結(jié)合后，可以發(fā)揮通用示蹤劑的作用，在固相抗原中，增加樣品和抗體后，會獲得一定反應(yīng)。

第二，基于固相TrFIA。在對樣品進(jìn)行測定期間，對抗免血清實(shí)施化學(xué)處理，在洗滌后，增加增強(qiáng)液給予震蕩，促使熒光強(qiáng)度的檢測。該方法在實(shí)際應(yīng)用期間，方法更為簡單，適合廣泛應(yīng)用。固相鏈親和素，在微量滴條孔壁上，應(yīng)用SA包被，測定期間，給予抗體和樣品的標(biāo)記，并在洗滌后增加增強(qiáng)液給予震蕩。該方法和固相結(jié)合更為牢靠，在具有較強(qiáng)牢固性基礎(chǔ)上，使用的成本也更高。

第三，雙標(biāo)記TrFLA1。該技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用期間，是在一個(gè)孔內(nèi)進(jìn)行兩種物質(zhì)的測定，如：AFP和CEA的測定，將其放在固相抗體孔中，觀察其反應(yīng)，同時(shí)，輸入不同的參數(shù)信息，促使AFP和CEA的濃度的獲取。

第四，不用增強(qiáng)TrFIA，該技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用，是在復(fù)合物受到紫外光激發(fā)后，發(fā)射出較強(qiáng)的熒光，并結(jié)合該原理，對樣品和生物素化進(jìn)行測定，該方法不僅不會受到環(huán)境污染的影響，也具有較強(qiáng)的敏感度，是當(dāng)前的一項(xiàng)新技術(shù)，為現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)發(fā)展指明方向。

綜上所述，基于對標(biāo)記免疫分析技術(shù)的研究，發(fā)現(xiàn)該技術(shù)向著簡單化、自動化發(fā)展方向進(jìn)步，具有的靈敏度更高。在現(xiàn)代化社會發(fā)展下，要促使其目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)，都開始加大力度研究固相抗體和抗原，增加了新一代的檢測方法。尤其是非放射性免疫技術(shù)的發(fā)展，在多樣化的檢測方法下，應(yīng)用中獲得較高的自動化和靈敏度，也為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步提供重要條件。