黏液型銅綠假單胞菌不同時間的藥敏結果差異研究

王巧媚，陸丹倩，彭 明，鄧 沖，鄧聚輝

(廣東省中山市中醫院,廣東 中山 528400)

在臨床中銅綠假單胞菌是一種常見的條件致病菌，根據菌落形態可以分為黏液型和非黏液型，兩者在一定條件下可以相互轉換。在慢性呼吸道感染疾病中，如慢性阻塞性肺炎、支氣管擴張等患者中分離率較高。黏液型銅綠假單胞菌的表面可以產生大量黏液，且其黏液成分以多糖藻酸鹽為主，在持續定植之后形成生物膜，幫助細菌躲避機體的免疫清除，同時也增強對抗菌藥物的耐藥性，致使感染持續發生，經抗菌藥物治療后其效果并不是很理想[1-2]。針對藥物敏感性的檢測方法有ATB、儀器法等，但是均適用生長速度比較快的細菌，而黏液型銅綠假單胞菌則是生長比較慢的一種細菌，因此并不適用。紙片擴散法(K-B法)具有可靠、準確度高等優勢，適用于檢測黏液型銅綠假單胞菌的藥物敏感性，但是黏液型銅綠假單胞菌在孵育18～24 h后抑菌圈的直徑并不是很明顯，不僅增加了測量的難度，對檢測結果也造成一定的影響[2-5]。在此次研究中主要分析黏液型銅綠假單胞菌不同時間的藥敏結果差異，現報告如下。

1 材料與方法

1.1菌株來源：將2015年1月～2018年12月我院送檢的各類合格標本中分離到的黏液型銅綠假單胞菌收集起來，同一例患者多次分離得到的菌株不予以重復計算。將菌株置于-75℃的環境中保存，一共收得82株。

1.2儀器與試劑：所有菌株經過珠海迪爾半自動微生物分析儀鑒定為銅綠假單胞菌，M-H瓊脂培養基購自江門凱林，藥敏紙片買自英國OXOID公司。質控菌株ATCC27853來自國家衛生健康委臨床檢驗中心。

1.3試驗方法：所有標本接種及培養均嚴格按照《全國臨床操作規程》第4版進行。對痰液標本先進行涂片并篩查，經低倍鏡視野進行觀察，標本中鱗狀上皮細胞<10個且白細胞>25個為合格。采用統一的K-B法，藥敏結果判斷標準參照臨床和實驗室標準協會(CLSI)2018版。

1.4統計學處理：采用WHONET 5.6和SPSS 19.0進行數據統計處理，用率(%)來代表計數資料，進行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1黏液型銅綠假單胞菌的標本來源：在82株黏液型銅綠假單胞菌中，分離自呼吸道標本的有75株占91.5%，尿液標本的有5株占6.1%，血液標本1株占1.2%,分泌物標本1株占1.2%。

2.2不同時間藥物敏感性檢測結果的比較：24 h與48 h慶大霉素敏感率比較差異無統計學意義(P>0.05)，其他藥物比較差異有統計學意義(P<0.05)；48 h與72 h藥敏結果比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

3 討論

銅綠假單胞菌是醫院感染重要的條件致病菌，可引起呼吸道、泌尿道、傷口和血液等多部位的感染。根據菌落形態可分為黏液型和非黏液型，兩者在一定條件下可以相互轉換。黏液型銅綠假單胞菌24 h形成的菌落較小，容易被忽略，48 h后菌落呈透明、露滴樣融合為一片，可產或不產色素，因此原始平板應延長至48 h后以防漏檢。同樣，對于黏液型銅綠假單胞菌的藥敏方法多項研究證實K-B法比MIC法更可靠[2-5]。同時藥敏孵育時間應延長至48 h后結果更為合理[6-10]。從本研究可見，用K-B法對黏液型銅綠假單細胞的藥物敏感性進行檢測時，因其生長的速度比較慢，所以24 h檢測敏感率要比48 h檢測敏感率高，除了妥布霉素、慶大霉素、阿米卡星和美洛培南外，其他8種藥物差異有統計學意義(P<0.05)，當細菌培養時間至72 h時藥敏結果與48 h藥敏結果比較差異無統計學意義(P>0.05)，因此黏液型銅綠假單胞菌培養的時間應在48 h后讀取，以提高藥敏結果的精準度，與孫敬等報道的結果[11]相符。通過48 h藥敏檢測結果證實，黏液型銅綠對美洛培南與氨基糖苷類抗生素的敏感率比較高，對其他藥物的敏感性略差，因此在臨床用藥時應根據患者的情況使用，此外對哌拉西林、頭孢吡肟及左氧氟沙星的敏感性比較差，耐藥率均高于30%，因此應慎重使用。

表1 不同時間藥物敏感性檢測結果的比較[例(%)]

綜上所述，黏液型銅綠假單胞菌生長比較慢，培養的時間應適當延長，藥敏試驗結果的判讀則應延長至48 h后。