子宮蛻膜細胞Ang-1、Ang-2表達水平與稽留流產的相關性研究

郭維娟 張亞云

(1.西安市第五醫院婦產科，陜西 西安 710018；2.西安未央正泰醫院婦產科，陜西 西安 710016)

稽留流產(MA)是流產中一種特殊類型，指胎兒、胚胎已死亡而滯留宮腔內，未及時自然排出[1]?；袅鳟a主要發病人群是初產婦、室外職業者、貧血、自然流產病史、乙肝病毒攜帶者，環境因素及其他未知因素也是稽留流產的主要發生原因[2]。據相關研究表明[3]，受精卵著床至形成胎盤的妊娠過程和新生血管生成有著密切關系，血管抑制素(AS)及血管生成素(Ang)參與這一過程。本研究探討子宮蛻膜細胞Ang-1、Ang-2表達水平與稽留流產的相關性，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2020年2月我院稽留流產患者80例為MA組，另選取同期自愿終止妊娠的孕婦80例為對照組。MA組年齡25～41歲，平均(30.51±4.32)歲；孕周5～9周，平均(5.80±1.29)周；孕次1～4次，平均(1.32±0.22)次。對照組年齡23～39歲，平均(29.53±4.29)歲；孕周6～10周，平均(5.91±1.40)周；孕次1～3次，平均(1.28±0.17)次。兩組患者一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經我院倫理委員會批準，患者及其家屬均簽署知情同意書。納入標準：身體健康，無自然流產、死產、死胎史；經B超顯示胚胎發育正常，該次妊娠沒有先兆流產體征及癥狀；平素月經規律；依從性好，自愿參加；病歷資料完整。排除標準：停經孕周和超聲孕周相差>2周；合并各類慢性疾??；合并免疫系統疾??；精神疾病及意識障礙。

1.2方法 兩組孕婦行人工流產手術后，在刮出物中，取蛻膜組織，然后將其放置在滅菌凍存管中，采用液氮進行存儲，然后檢測Ang-1、Ang-2、VEGF、CD31及AS水平。取兩組患者的蛻膜組織，加入適量RNA提取劑，室溫靜置5min，然后加入20%RNA，提取劑體積量氯仿，搖勻，室溫放置5 min，離心，取上清液，轉移新離心管中，加入和上清液相同體積的異丙醇，室溫靜置10 min，離心，加入1 mL乙醇(濃度75%)于沉淀中進行清洗，離心，保留沉淀，干燥，然后溶解在適量DEPC(焦碳酸二乙酯)水中，固定1～2d，常規脫水處理，石蠟包埋。

1.3觀察指標 對石蠟進行切片，采取免疫組化法測定子宮蛻膜細胞Ang-1、Ang-2、VEGF、AS表達水平，其中試劑盒均由美國Origene，嚴格按照說明書進行操作。采取數字切片掃描儀掃描組織切片，用Pannoramic viewer打開，densito quant 識別，切片上所有細胞內深棕色設為強陽性，棕黃色設為中度陽性，淺黃色設為弱陽性，藍色設為陰性。識別分析每個組織，施行H-score評分。采取免疫組化法測定CD31，CD31蛋白表達陽性是將血管內皮細胞棕黃色、棕色染色為標準，被染色的細胞團、單個內皮細胞，界限清楚，作為可計數微血管。

2 結 果

2.1蛻膜組織中Ang-1、Ang-2、VEGF、CD31、AS表達水平 MA組蛻膜組織中Ang-1、Ang-2、VEGF、CD31呈低表達，明顯低于對照組(P<0.05)；MA組蛻膜組織中AS呈高表達，明顯高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組蛻膜組織中Ang-1、Ang-2、VEGF、CD31、AS表達水平對比

2.2Ang-1、Ang-2水平和 VEGF水平相關性分析 Pearson相關分析結果顯示,Ang-1和Ang-2水平與VEGF呈正相關(P<0.05)，見表2。

表2 兩組蛻膜組織中Ang-1、Ang-2水平和VEGF相關性分析

3 討 論

稽留流產屬于早期流產一種病理妊娠類型，多見于妊娠20周內?；袅鳟a發病機制復雜，涉及方面有很多，包括子宮胎盤循環障礙、內分泌異常、胚胎染色體異常、環境因素及細胞凋亡異常等，至今為止，還有很多地方不明確[4]。血管重塑在妊娠過程中起到關鍵作用，在諸多血管生成因子的影響下，母體子宮融入滋養細胞，侵入子宮螺旋小動脈，促使母體和胎兒之間建立血管網，進而進行母胎營養交換[5]。VEGF在調節血管生成中起到至關重要的作用，若未能及時充分發生，將不利于胚胎正常發育，嚴重者會造成流產。

VEGF屬于內皮細胞有絲分離原，在一系列生理病理過程中，VEGF在其中發揮重要作用[6]。據相關研究[7]表明，VEGF最初是在胚胎種植前出現的，其表達水平于孕16周達到最高峰。胎盤發育的過程中，VEGF通過旁分泌方式推進胎盤血管網形成，調節胎盤血管通透性，確保母胎之間實現營養交換[8]。Ang家族是分泌性蛋白生長因子，包括四種類型，分別是Ang-1、Ang-2、Ang-3、Ang-4，對新生血管形成、重塑及成熟等占有重要位置 Ang-1、Ang-2在胚胎發育、滋養細胞、胎盤血管重建等方面具有重要作用，對于女性正常生殖功能起到維持作用。Ang-1、Ang-2和VEGF同時存在時，可保持血管可塑狀態，促使內皮細胞出芽，有助于血管生成，促進血管重建[9-13]。本研究結果顯示，MA組蛻膜組織中Ang-1、Ang-2、VEGF、CD31呈低表達，明顯低于對照組(P<0.05)；MA組蛻膜組織中AS呈高表達，明顯高于對照組(P<0.05)。胚胎種植區域無法形成血管網，無法為胚胎發育提供充足血液供應，致使流產的發生。蛻膜內微環境改變是MA發生最關鍵的因素，本研究的結果進一步為MA發病原因及臨床治療提供新的思路。在早孕時，血管形成正負因子保持動態平衡狀態，促使血管生成，正常妊娠。本研究結果顯示，Ang-1水平與VEGF呈正相關(P<0.05)，Ang-2水平與VEGF呈正相關(P<0.05)，提示在妊娠早期，蛻膜血管生成的Ang-1、Ang-2起到抑制作用，增強負性因子AS，破壞動態平衡，減少血管生成，不利于早期胚胎氧氣及營養物質的供應，進而發生MA。

綜上，子宮蛻膜細胞 Ang-1、Ang-2表達和血管生成有直接關系，均參與稽留流產胚胎血管生成障礙，影響子宮內膜血液供應，導致子宮內膜血液供應不充分，進而造成稽留流產。