淋巴細胞主動免疫治療對原因不明性復發性流產患者Treg及Th17細胞因子的影響

張小玲 王娟

(西安大興醫院產科，陜西 西安 710002)

復發性流產主要是指持續出現兩次或兩次以上自然流產[1]。在全部復發性流產患者中，有50%左右的患者無法準確了解其發病原因[2]。主動免疫治療理念認為，出現不明原因性反復性流產通常與孕婦機體缺乏保護胎兒的抗體有關，從而引起母胎免疫識別紊亂，孕婦機體內免疫系統將胎兒作為“侵入者”，進而使得孕婦流產[3]。本文分析對原因不明性復發性流產患者實施淋巴細胞主動免疫治療的效果，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年10月至2018年10月本院原因不明性復發性流產患者50例，患者年齡30～38歲，平均(34.27±2.11)歲。納入標準[4]：(1)≥2次不明原因自然流產病史；(2)超聲檢查無排卵異常；(3)患者及其丈夫染色體檢查正常；(4)自身抗體檢查均為陰性；(5)無淋巴細胞主動免疫治療史；(6)患者及其家屬知情同意，簽署知情同意書。排除標準[5]：(1)家族遺傳病史；(2)內分泌系統異常；(3)自身抗體檢查陽性。

1.2方法 分別于治療前以及治療后3周采集患者空腹上臂靜脈血樣本5 mL，使用乙二胺四乙酸二鈉進行抗凝處理，將其中2 mL血液樣本放置在3 000轉/min的離心機中進行持續10 min離心處理，選擇血清標本，并放置在冰箱中保存。將其中3 mL血液樣本進行淋巴細胞分離。每位患者均實施一個療程(共3次)淋巴細胞主動免疫治療，每次治療后暫停3周，隨后繼續開始治療。其中淋巴細胞治療濃度30～50×106個/L，細胞懸液劑量1.5～2.0 mL。淋巴細胞分離液采購至上海融禾醫藥科技發展有限公司，逆轉錄試劑盒采購至杭州主諾生物技術有限公司，聚合酶聯反應試劑盒采購至上海聯邁生物工程有限公司，酶聯免疫吸附試劑盒采購至上海恪敏生物科技有限公司。提取血液樣本中RNA總量，并進行DNA合成。使用逆轉錄—聚合酶鏈反應方法檢測患者血液樣本中Foxp3和ROR-γt的RNA水平，同時使用酶聯免疫吸附測定法檢測血液樣本中IL-17A和IL-35水平，全部操作均嚴格依據試劑盒使用說明開展。鼓勵全部患者在治療后3個月內再次妊娠。

1.3觀察指標 (1)觀察并比較患者治療前后Foxp3、ROR-γt、EBi3以及IL-17A因子中總RNA表達量[6]。(2)觀察并比較治療前后患者血清樣本內中IL-17A以及IL-35水平。(3)對比妊娠成功以及妊娠失敗孕婦治療前后上述指標進行比較。持續隨訪，了解患者妊娠情況，對于妊娠的孕婦持續隨訪28周，28周后無流產情況發生即可判定為妊娠成功[7]。

2 結 果

2.1Foxp3、ROR-γt、EBi3及IL-17A中總RNA表達量 治療前患者Foxp3以及EBi3總RNA表達量均低于治療后，差異有統計學意義(P<0.05)，治療前患者ROR-γt以及IL-17A總RNA表達量均高于治療后，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 治療前后Foxp3、ROR-γt、EBi3以及IL-17A中總RNA表達量對比

2.2IL-17A以及IL-35水平 治療前患者IL-17A(16.23±4.19)ng/L，治療后(14.51±1.92)ng/L；IL-35(11.55±2.24)ng/L，治療后(26.37±2.72)ng/L。治療前患者IL-17A水平高于治療后，IL-35水平低于治療后(均P<0.05)。

2.3妊娠成功及妊娠失敗孕婦各因子總RNA表達量和水平 隨訪發現，30例患者妊娠成功，20例患者妊娠失敗，兩組IL-35、Foxp3以及EBi3比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 妊娠成功及妊娠失敗孕婦各因子總RNA表達量和水平對比

3 討 論

在正常孕婦機體內，存在一種與配偶淋巴細胞發生抵抗作用的特異性IgG抗體，其可對淋巴細胞反應產生抑制作用，避免孕婦機體內淋巴細胞對胚胎滋養層細胞進行殺滅，從而降低孕婦機體免疫系統對胚胎的攻擊，其被稱作封閉抗體[8]。對于正常孕婦而言，在妊娠早期即可在機體內檢測出封閉抗體，并且在妊娠中期其水平可達到峰值。不明原因性反復性流產患者機體內人類白細胞抗原水平較高，因此封閉抗體水平偏低，極易導致孕婦機體免疫系統對胎兒形成攻擊，進而出現流產情況[9]。CD4+T淋巴細胞中包含Treg細胞以及Th17細胞兩個亞群，Treg細胞對自身T細胞所介導的免疫反應具有抑制作用，從而確保機體內環境平穩[10];Foxp3則是Treg細胞調節因子，Treg細胞可產生IL-35，而IL-35具有調節T淋巴細胞活性的作用，從而發揮抑制免疫反應作用，同時其還可增強Treg細胞增殖能力[11]。Th17細胞轉錄因子是ROR-γt，其可生成IL-17A，其可通過多種形式對炎癥的發生以及發展形成促進作用，并且其還可促進血管生成[12]。

本研究結果中，治療前患者Foxp3以及EBi3總RNA表達量均低于治療后(P<0.05)，治療前患者ROR-γt及IL-17A總RNA表達量均高于治療后(P<0.05)。治療前患者IL-17A水平高于治療后，IL-35水平低于治療后(均P<0.05)。30例患者妊娠成功，20例患者妊娠失敗，兩組IL-35、Foxp3及EBi3差異顯著(P<0.05)。對患者實施主動免疫治療可升高Foxp3以及IL-35水平，并且還可降低IL-17A以及ROR-γt水平，說明在發生流產進程中，Th17細胞因子發揮促炎效果，導致機體形成免疫殺傷狀態。通過實施主動免疫治療，使機體形成免疫耐受，從而改善流產情況。