早期胃癌及癌前病變組織中LC3、Ki-67、SOX9的表達及臨床意義*

張興旺,馬艷梅,朱 靜

陜西省榆林市第一醫院病理科(榆林719000)

胃癌為我國高發疾病，調查顯示，我國每年約有35萬人因胃癌死亡，嚴重威脅患者的生命健康[1]。研究發現，胃癌患者的預后與病情進展密切相關，早期胃癌經及時診治后，5年生存率可高于90%[2]。目前認為，胃癌的發生發展過程中涉及到多種癌基因的活化，了解早期胃癌的發生機制，對患者治療方案的制定以及預后判斷具有十分積極的意義[3]。LC3能夠有效反映腫瘤組織中自噬的活性，有研究發現，其表達與胃癌的進展、浸潤程度等密切相關[4]。Ki-67能夠對腫瘤組織中細胞的增殖情況進行有效反映，在腫瘤惡性程度、復發等的判斷中具有較高的應用價值。SOX9屬于SOX家族的重要成員，在腫瘤干細胞增殖等方面具有重要的作用，研究發現，其與胃癌患者病情進展和預后密切相關[5]。本研究旨在明確LC3、Ki-67、SOX9在早期胃癌組織中的表達情況及與患者臨床特征的關系，以了解LC3、Ki-67、SOX9在早期胃癌發生、發展中的作用，現報告如下。

資料與方法

1 一般資料 納入2018年3月至2020年2月榆林市第一醫院收治的早期胃癌患者124例作為胃癌組，男82例，女42例，年齡36～73歲，平均(56.59±8.77)歲。納入同期收治的胃上皮內瘤變患者96例，其中低級別上皮內瘤變(LGIN)47例作為LGIN組，高級別上皮內瘤變(HGIN)49例作為HGIN組。LGIN組男30例，女17例，年齡34～70歲，平均(56.79±8.94)歲。HGIN組男33例，女16例，年齡38～75歲，平均(57.36±9.12)歲。同期收治的慢性胃炎患者40例作為胃炎組，男25例，女15例，年齡36～70歲，平均(56.42±8.61)歲。同期入院行胃鏡檢查的健康者40例作為對照組，男26例，女14例，年齡38～74歲，平均(57.12±9.03)歲。五組患者的年齡、性別等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經醫學倫理委員會審核后進行。病例納入標準：均經術后病理或者胃鏡檢查后，首次明確診斷；病歷資料完整；知情同意。排除標準：放化療史；胃部手術史；合并其他惡性腫瘤；免疫相關性疾?。唤诿庖咭种苿┦褂檬罚唤诩に厥褂檬?。

2 檢測方法 使用免疫組化法對五組胃黏膜組織中的LC3、Ki-67、SOX9表達情況進行檢測。取胃黏膜石蠟標本，在進行脫蠟、抗原修復后，添加LC3、Ki-67、SOX9一抗，工作濃度為1∶50，隨后置于4℃下過夜。洗滌封閉后，添加生物素化二抗，于37 ℃下進行孵育，持續30 min。使用DAB進行顯色，隨后進行復染、脫水、封片，置于顯微鏡下觀察。所有試劑均購買自艾博抗(上海)貿易有限公司。陰性對照選擇PBS代替一抗進行，陽性對照使用已知的LC3、Ki-67、SOX9陽性切片。切片中出現棕黃色顆粒代表檢測陽性。

3 觀察指標 ①LC3、Ki-67、SOX9的表達陽性率：對不同分組LC3、Ki-67、SOX9的表達陽性率進行比較；每個切片中隨機選擇10個視野進行分析，根據染色細胞占比和染色強度之積對陽性率進行判定，陰性為≤3分，陽性為>3分；其中染色強度分值范圍0～3分，分別為未染色(0分)、淺黃(1分)、棕黃(2分)以及棕褐色(3分)；染色細胞占比評分分值范圍0～3分，分別為全陰性或染色細胞占比低于5%(0分)；5%<染色細胞占比≤25%(1分)；25%<染色細胞占比≤50%(2分)；50%<染色細胞占比(3分)。②胃癌組不同臨床特征患者LC3、Ki-67、SOX9的陽性率：臨床特征包括年齡(≥60歲和<60歲)，性別(男和女)，腫瘤直徑≥2 cm，分化程度(高分化和中低分化)，浸潤范圍(局限至黏膜和浸潤至黏膜下層)，淋巴結轉移(是和否)等。

4 統計學方法 采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據處理，不同分組LC3、Ki-67、SOX9的表達陽性率以及胃癌組不同臨床特征患者LC3、Ki-67、SOX9的表達陽性率以[例(%)]表示，使用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 不同分組LC3、Ki-67、SOX9的表達陽性率比較 對照組、胃炎組、HGIN組、LGIN組、胃癌組的LC3表達陽性率逐漸增加，胃癌組LC3、Ki-67、SOX9的表達陽性率均明顯高于對照組、胃炎組、HGIN組和LGIN組(P<0.05)，見表1。

表1 不同分組LC3、Ki-67、SOX9表達陽性率比較[例(%)]

2 胃癌組不同臨床特征患者LC3的表達陽性率比較 胃癌組高分化患者LC3表達陽性率明顯高于中低分化患者(P<0.05)。年齡、性別、腫瘤直徑、浸潤范圍、淋巴結轉移與LC3表達陽性率均無明顯關系(P>0.05)。見表2。

表2 胃癌組不同臨床特征患者LC3陽性表達率比較[例(%)]

3 胃癌組不同臨床特征患者Ki-67的表達陽性率比較 年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、浸潤范圍、淋巴結轉移與Ki-67表達陽性率均無明顯關系(P>0.05)。見表3。

表3 胃癌組不同臨床特征患者Ki-67表達陽性率比較[例(%)]

4 胃癌組不同臨床特征患者SOX9的表達陽性率比較 胃癌組浸潤至黏膜下層的SOX9表達陽性率明顯高于局限至黏膜(P<0.05)。年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、淋巴結轉移與SOX9表達陽性率均無明顯關系(P>0.05)。見表4。

表4 胃癌組不同臨床特征患者SOX9表達陽性率比較[例(%)]

討 論

胃癌的發展需要經過復雜的癌前病變過程，在這個過程中，腫瘤細胞性質的轉變優先于形態學的變化。研究發現，在癌前病變向胃癌轉變的過程中，腫瘤組織存在多種癌基因的活化[6]。其中自噬為腫瘤發生發展的重要生理過程，可通過對受損腫瘤細胞的降解，促進腫瘤組織的代謝平衡和生長。LC3為自噬的主要調控基因，研究發現，其表達水平可對腫瘤組織自噬的活性進行有效反映，并與腫瘤分期具有密切的關系[7]。Ki-67為機體中關鍵的核增殖基因，能夠對細胞增殖動態進行有效反映。有研究發現，Ki-67可隨胃部病變的進展，表達陽性率逐漸增強[8]。SOX9參與細胞生長、分化等多個生理過程，據報道，SOX9表達水平過高時，可通過參與Wnt/β-連環蛋白的激活，對腫瘤細胞的增殖進行有效調控[9]。通過了解癌前病變向早期胃癌的轉化機制，對胃癌發病率的降低，以及患者預后的改善可能具有積極的意義。

本研究發現，LC3、Ki-67和SOX9的表達陽性率因胃部病變類型不同而表現出較大的差異，其中早期胃癌組織中LC3、Ki-67和SOX9的表達陽性率均明顯高于其他分組。其中正常組織中，為了維持細胞功能的穩定，自噬水平往往較低，胃炎患者的病變組織中，由于細胞的萎縮以及數量的降低，使自噬泡等細胞器聚集于細胞膜下，使LC3多在細胞膜或膜下表達，表達水平較低[10]。在上皮內瘤變中，病變組織的增殖活動開始增強，自噬活性逐漸增加。隨著病情的進展，當處于早期胃癌階段時，由于細胞代謝及增殖的進一步旺盛，自噬活性明顯增強，使LC3可在細胞質和細胞膜下進行表達，進而使早期胃癌患者腫瘤組織中的LC3水平明顯高于其他病變組織[11]。對LC3與早期胃癌患者臨床特征的關系進行分析發現，LC3表達陽性率與分化程度有關，這可能是由于隨著腫瘤分化程度的下降，侵襲能力上升，使基因發生突變積累，導致多個抑癌基因失去表達能力，進而使腫瘤細胞的自噬水平下降，LC3表達陽性率下降等因素相關[12]。

Ki-67作為臨床常用的腫瘤標志物，與腫瘤細胞增殖情況具有一定的相關性，本研究發現，隨著癌前病變向胃癌的轉變，Ki-67的表達陽性率提高，這可能與Ki-67能夠提高細胞外調節蛋白激酶活性，提高其在腫瘤組織的表達水平，進而促進了胃癌的發生和發展等因素相關[13]。然而，本研究發現，Ki-67與早期胃癌患者年齡、性別、腫瘤浸潤深度、分化程度等均無明顯關系，提示Ki-67在早期胃癌患者預后判斷中的應用價值可能有限，具體機制還需擴大樣本進行更為深入的研究。

正常組織中，SOX9主要負責干細胞分化的調控，隨著機體慢性損傷的加劇，干細胞活性增強，使SOX9表達陽性率上升。有研究發現，SOX9能夠促進胃癌的發展，并在腫瘤細胞增殖中起到重要作用，具有一定的致瘤效果[14]。本研究發現，早期胃癌浸潤深度與SOX9相關，這可能與SOX9能夠通過提高CEACAM1的表達和抑制腫瘤細胞凋亡等機制，而使腫瘤細胞擴散和增殖能力增強等因素相關，這也提示SOX9與胃癌進展可能具有一定的相關性[15-16]。

綜上所述，LC3、Ki-67和SOX9的陽性表達率均隨著胃黏膜病變嚴重程度的增加而上升，提示三者均可能參與癌前病變向早期胃癌的轉化過程中。關于LC3、Ki-67和SOX9與早期胃癌患者預后的相關性還需更為深入的研究。