微柱凝膠技術在新生兒溶血病檢測中的應用

曾 志 方 樂 賴婷婷 郭 梅 涂彩瓊

1.福建省龍巖人民醫院輸血科，福建龍巖 364000；2.兵器工業五二一醫院，陜西西安 710065

新生兒溶血病（hemolytic disease of the newborn，HDN）作為新生兒常見疾病之一，對于嬰兒的健康具有重要的影響，若不能及時進行有效干預，則有可能導致新生兒神經細胞出現損傷，從而誘發膽紅素腦病，最終造成新生兒生活質量的顯著降低，不利于我國人民群眾健康水平的有效控制。醫務人員應提升血液檢測技術水平，從而確保HDN的及時發現與治療[1]。HDN傳統的檢測方法是采用試管檢測法對新生兒血液進行檢驗，然而該方法檢測步驟相對繁瑣，檢測流程耗時較長。同時，此方法在檢測過程中受到的影響因素相對較多，無法保障檢測工作的準確性。為了解決這一問題，本研究擬應用微柱凝膠技術對HDN患兒血液標本進行檢測，與傳統檢測法比較分析微柱凝膠技術在HDN檢測中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1～12月龍巖人民醫院收治的1766例HDN患兒作為研究對象，所有患兒均存在不同程度高膽紅素血癥，間接膽紅素（IBILI）水平208～250μmol/L，平 均（229.37±18.35）μmol/L；血清總膽紅素（TBILI）水平250～291μmol/L，平均（269.21±16.74）μmol/L；其中男984例，女782例；患兒年齡7h～5d，平均（2.1±0.1）d。本研究獲醫院醫學倫理委員會批準同意。

1.2 納入及排除標準

納入標準：（1）所有入選患兒均符合《新生兒高膽紅素血癥診斷和治療專家共識》中的相關診斷標準[2]；（2）所有患兒生命體征平穩，意識清醒；（3）患兒家屬知曉本研究內容，并簽署知情同意書者。

排除標準：（1）合并先天性疾病者；（2）具有嚴重心、肝、腎等重要器官功能不全者；（3）合并感染性疾病者。

1.3 儀器與試劑

戴安娜全自動血型儀，大容量低速離心機KDC-1044L（安徽中科中佳科學儀器有限公司），新生兒ABO凝膠卡（戴安娜公司生產，DG GEL Newborn凝膠卡），抗人球蛋白卡（戴安娜公司生產，DG Gel Coombs卡），標準A、B、O型紅細胞試劑（上海血液生物醫藥有限公司），抗人球蛋白試劑（上海血液生物醫藥有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 微柱凝膠技術 主要檢測步驟如下。采集患兒靜脈EDTA抗凝血樣2mL，3500rpm離心5min，分離血漿，將紅細胞通過三洗紅細胞進行紅細胞懸液的制備，制備完成后，將其加入DG GEL Newborn凝膠卡（DIANA）中并進行離心，同時對患兒樣本中血型及直接抗人球蛋白試驗進行觀察與記錄。檢測完畢后，將患兒血清與紅細胞放散液分別加入標注A、B、O孔的抗人球凝膠卡（DIANA）中，隨后將標準A、B、O型紅細胞試劑對應滴入抗人球凝膠卡中（紅細胞濃度用生理鹽水稀釋至1%左右），從而對患兒抗體放散與抗體游離情況進行分析與記錄。

1.4.2 傳統試管檢測技術 主要檢測方法如下。采用離心設備對患兒血液樣本進行離心處理，同時通過0.85/0.9%氯化鈉溶液對患兒血液樣本中紅細胞進行相應的清洗，以便實現懸液的有效配制。將制得的紅細胞懸液與抗人球蛋白試劑加入到同一支試管中，兩者的用量分別為1滴和2滴，隨后對試管內試劑進行離心處理，記錄抗人球蛋白的實驗結果。對相關試管進行標記，隨后向試管中加入紅細胞試劑，然后加入上述離心處理后得到的患兒血清，完成后將試管在37℃的環境下進行靜置孵育，孵育時間為1h。培養完畢后，使用氯化鈉溶液對試管進行清洗處理，清洗完畢后加入抗人球蛋白試劑并進行離心，離心結束后，由檢測人員對患兒抗體游離與抗體放散結果進行分析與記錄。

1.5 觀察指標及評價標準

本研究中，研究人員將患兒血液樣本中抗體游離、抗體放散及直接抗人球蛋白的陽性檢出率作為主要觀察指標。新生兒溶血診斷標準：3項試驗同為陽性可確診，不同時為陽性時，以放散試驗陽性為診斷標準，抗體游離和直接抗人球蛋白同時為陽性時可確診，抗體游離或直接抗人球蛋白單項為陽性時為疑似。在微柱凝膠中，患兒紅細胞抗原和抗體生產的復合物若分布在凝膠中或浮于凝膠表層，則判定其為陽性，若紅細胞在凝膠管底部沉積或無特異性復合物生成則判定其為陰性。

1.6 統計學處理

應用統計學軟件SPSS23.0對相關數據進行分析，計量資料以（）表示，采用t檢驗；計數資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血型血清學檢測

1766例疑似新生兒溶血患兒中，母親血型均為O型RhD陽性，疑似患兒A型血有891例，確診178例，B型疑似患兒803例，確診151例，O型血疑似患兒62例，確診0例，AB型疑似患兒10例，確診0例，總共確診病例329例，見表1。

表1 1766例疑似新生兒溶血患兒血型血清學檢測結果

2.2 三項試驗檢驗結果

直接抗人球蛋白、抗體游離試驗和抗體放散試驗對1766例疑似新生兒溶血患兒標本檢驗結果的分布及對結果的判斷，見表2。

2.3 兩種檢測方法比較

微柱凝膠技術抗體游離、抗體放散及直接抗人球蛋白的陽性檢出率均高于傳統試管技術，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

3 討論

新生兒溶血病（HDN）主要是由于胎兒在遺傳過程中從父親的基因中繼承了部分母親體內不具有的紅細胞抗原，或母親與嬰兒血型不合所導致[3]。當胎兒紅細胞通過臍帶進入母親體內后，母體中出現相應的免疫性抗體，此類抗體可經過臍帶或胎盤對胎兒紅細胞造成影響，從而導致胎兒出現水腫、黃疽、肝臟腫大以及貧血等不良情況，甚至可導致胎兒死亡，嚴重威脅新生兒健康[4]。為了保障胎兒健康，醫務人員應積極做好新生兒溶血病的早期診斷工作，確保新生兒問題的及時發現與合理干預，從而降低患兒后遺癥與不良情況的發生[5]。相關數據顯示，現階段在已知的血型系統中，最常見的HDN為ABO血型不合，多見于母體血液為O型，而新生兒血型為A型或B型[6]。據不完全統計，由于ABO血型不合而造成的新生兒溶血病患兒約占該病患兒總數的50%以上[7]。

表2 對1766標本三項試驗檢驗結果分布及結果判斷

表3 患兒陽性檢出率情況[n（%）]

臨床上長期以來主要采用試管檢測的方式對新生兒溶血病進行檢測，然而該方法在檢測過程中需要對患兒血液樣本中紅細胞進行反復清洗，且涉及的檢測步驟較為繁瑣，檢測過程中容易受到人為因素的影響，降低檢測結果的準確性[8]。近年來，隨著科學技術水平的不斷提升，我國臨床醫療檢測技術得到了有效的發展與優化。隨著微柱凝膠技術的出現與應用，有效解決了新生兒溶血病的檢測效率與準確性的問題[9-10]。從檢測原理上分析，該方法主要通過稀釋液的應用，有效開展凝膠的配置工作，在配置過程中，當紅細胞與抗體發生反應后，其反應所得到的復合物會在凝膠中聚集或漂浮于凝膠表面，便于檢測人員肉眼觀察檢測結果[11-12]。若紅細胞與抗體之間無結合，紅細胞則會沉積在凝膠底部，即可判定患兒檢測結果為陰性。同時，在微柱凝膠技術中通過抗人球蛋白試劑的合理應用，有利于進一步實現試驗敏感度的提升。相關研究表明，在抗體放散實驗中，該檢測方法具有較強的敏感性[13]。然而，由于新生兒體內所具有的ABO抗原未實現完全發育，導致血液樣本中抗原位點相對較少，難以有效實現凝集反應，從而導致檢測過程中在直接抗人球蛋白中所表現出的陽性率相對低于其他兩項試驗的陽性指標[14]。因此，為了避免漏診情況的出現，醫務人員在進行診斷的過程中應合理對患兒血液樣本的三項檢驗指標進行綜合評價[15]。此外，為了避免由于樣本抗凝效果不佳產生纖維蛋白干擾實驗結果而出現假陽性的問題，檢驗人員應在檢測前對標本質量嚴格把關。

本研究結果表明，在新生兒溶血病檢測過程中，與傳統試管檢測方法比較，通過微柱凝膠技術的應用，可以提升患兒抗體游離、抗體放散以及直接抗人球蛋白的檢測效率，從而在縮短了檢測用時的同時實現了患者檢測質量的提升與發展，這與Chen等[16]學者的研究結果相似。

綜上所述，在臨床過程中，通過微柱凝膠技術的應用，醫務人員可以更為有效地對新生兒身體情況進行合理檢測，從而對患兒是否患有新生兒溶血病進行準確的判定，對于新生兒健康的保障具有積極意義，值得在臨床過程中進行大力推廣與普及應用。