長鏈非編碼RNA（AC073934.6）慢病毒質粒構建及其對HEY 和HeLa 細胞系SND1 表達的影響

扈利紅，邱寶晨，辛靈彪，張緯

（天津醫科大學基礎醫學院生物化學與分子生物學系，天津300070）

非編碼RNA（non-coding RNAs，ncRNAs）是一種不編碼蛋白質的RNA，通常按照其核苷酸的數量分為兩類，其中長度小于200個核苷酸的稱為小ncRNAs，包括微小RNAs（miRNAs）、短干擾RNAs（siRNAs）和小核仁RNAs（snoRNAs）等，而長度大于200個核苷酸的則稱為長鏈非編碼RNA（lncRNAs）。近幾年的研究發現lncRNAs 在胞核和胞漿里均有功能[1]。在胞核里lncRNA 可以起到招募轉錄相關蛋白并識別DNA 的作用；在胞漿里通過吸附小miRNAs避免其與mRNA 結合，進而間接影響mRNA 的穩定性[2]。因此lncRNA 可以參與許多的生命活動以及疾病的發生和發展[3-5]。

長鏈非編碼RNA AC073934.6（lncRNA-AC）是最近被鑒定出的一個不編碼蛋白質的轉錄產物。它位于人的7 號染色體q32.1 區，長7328 bp，包含3個長度分別為340 bp、112 bp、43 bp 的外顯子，但目前尚沒有對其功能的研究。SND1（staphylococcal nuclease domain containing 1）蛋白是一個保守的多功能蛋白，前期的研究已表明，SND1 在基因轉錄、mRNA 剪切、mRNA 穩定性等方面發揮重要作用，進而參與細胞分化和腫瘤細胞的增殖和轉移[6-10]。近期研究發現SND1 在卵巢癌中高表達，并能促進卵巢癌細胞的轉移[11]。但目前為止，對于SND1 本身的表達調控機制尚不清楚。LncRNA-AC 與SND1 基因在基因組上的位置靠近，因此lncRNA-AC 可能會通過調控SND1 進而參與腫瘤的增殖和轉移。本研究利用同源重組的方法構建了真核pLVX-lncRNA-AC重組質粒，并在HEY 和HeLa 兩種細胞系中成功表達，探討lncRNA-AC 與SND1 的關系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗材料 慢病毒質粒載體pLVX-IRESPuro、包裝質粒pMD2.G、包裝質粒psPAX2 由天津醫科大學生物化學與分子生物學系石磊教授饋贈；DH5α 感受態大腸桿菌E.coli（BC102）購自博邁德生物公司；……