α-地中海貧血/精神發育遲滯綜合征X染色體相關基因蛋白表達對兒童神經母細胞瘤預后的影響

張 大，李夢嬌，楊 林

(鄭州大學第一附屬醫院小兒外科，河南 鄭州 450052)

神經母細胞性腫瘤是一組臨床表現及預后差異較大的兒童惡性實體腫瘤，主要分為神經母細胞瘤(neuroblastoma，NB)、節細胞神經母細胞瘤(ganglioneuroblastoma，GNB)、節細胞神經瘤(ganglioneuroma，GN)[1-3]。α-地中海貧血/精神發育遲滯綜合征X染色體相關基因(α-thalassemia/mental retardation syndrome X-linked，ATRX)在NB標本中表達異常，這些異常僅在18月以上患兒的腫瘤組織中出現，這些異常包括點突變或基因片段缺失，最終導致ATRX編碼蛋白表達明顯減少且功能缺失，考慮ATRX蛋白可能參與了NB的生物學行為；ATRX基因突變與Ⅳ期NB診斷的年齡有關，并對NB患兒的預后產生影響[4]。2014年，ATRX蛋白被列為中樞神經系統腫瘤的標志物之一[5]。NB的預后與腫瘤的原發部位、發病年齡、疾病的臨床分期等密切相關[6]。但ATRX蛋白在神經母細胞瘤中的表達與預后關系尚不明確。

1 資料與方法

1.1 研究對象收集鄭州大學第一附屬醫院小兒外科2016年1月至2019年8月期間手術治療的49例顱外神經系統腫瘤患兒的資料和腫瘤組織標本，其中病理確診為NB 29例、GNB 10例、GN 10例。術后隨訪失訪15例(其中失聯7例，死亡8例)，存活34例。本研究中的病例樣本量較少，失訪率較高，在不影響統計學分析的情況下進行缺失值的替換，全部納入分析。

1.2 ATRX蛋白檢測方法所有組織標本制作組織芯片及切片，并進行免疫組化(immunohistochemistry，IHC)操作。使用多光譜組織成像與定量系統進行圖像采集，腫瘤細胞的細胞核棕黃色染色為陽性。染色結果判定采用Image J軟件IHC Tool Box工具檢測細胞核染色情況，獲得高倍(×200)鏡下單位面積內的細胞核被染為棕黃色的數目，以此來評估NB患兒ATRX蛋白表達情況。

2 結果

2.1 NB組、GNB組、GN組腫瘤組織中ATRX蛋白表達情況比較NB組、GNB組、GN組的ATRX蛋白表達水平分別是201.72±108.66、302.80±128.71、285.80±103.85，總體比較差異有統計學意義(F=4.103，P=0.023)；其中NB組與GNB組、NB組與GN組的ATRX蛋白表達水平比較差異均有統計學意義(P均<0.05)。見圖1。

圖1 NB組(A)、GNB組(B)、GN組(C)腫瘤組織中ATRX蛋白表達情況比較(IHC，×200)

2.2 NB組、GNB組、GN組患者生存情況比較NB組、GNB組、GN組中位生存期分別為39個月、30個月、30個月(χ2=1.820，P=0.403)。見圖2。

3 討論

ATRX蛋白是一個大小約為2 500殘基的表觀遺傳調控因子，包含一個N端同源異型結構域，在整個細胞周期中都具有調控作用，主要作用于細胞核[7-8]。在細胞分裂間期，ATRX蛋白在核基質的調控中占主導地位；在有絲分裂期，蛋白定位于凝縮染色體。ATRX蛋白的活動主要在細胞核中，因此可使用Image J軟件中的IHC Tool Box工具統計細胞核被染為棕黃色的數目來反映ATRX蛋白的表達水平。

根據統計數據分析，我們發現，NB組、GNB組、GN組的ATRX蛋白表達水平分別是201.72±108.66、302.80±128.71、285.80±103.85，總體比較差異有統計學意義(F=4.103，P=0.023)；其中NB組與GNB組、NB組與GN組的ATRX蛋白表達水平比較差異均有統計學意義(P均<0.05)。GN為良性腫瘤，其預后良好，而NB為惡性腫瘤，其預后一般較差，提示ATRX蛋白的低表達可能與NB預后相關。

兒童外周神經母細胞性腫瘤分為NB、GNB和GN等3種組織病理學分型，ATRX蛋白表達在NB組、GNB組、GN組中的生存曲線相近。考慮原因有：1)患兒隨訪時間短，未能獲得有臨床意義的5 a無事件生存時間，生存時間受影響，進而影響各組生存曲線，如本研究中作為良性GN的中位生存期較惡性程度較高的NB短，而該結果也由樣本量少所致；2)NB、GNB、GN中有分化程度不同的神經節細胞，降低了ATRX蛋白表達差異；3)組織芯片選取的腫瘤組織點不夠典型，可能會降低組間的差異；4)不同切片平面細胞核的數目不同可能會增大組內的差異或降低組間的差異；5)Image J軟件中的IHC Tool Box工具插件識別的準確性也需考慮在內，其統計細胞核染為棕黃色數目來間接衡量ATRX蛋白表達水平存在系統偏倚；6)腫瘤標本例數較少，檢驗功效會受影響；7)觀察各組生存曲線之間有交叉，考慮ATRX蛋白表達水平對外周神經母細胞性腫瘤預后的影響存在混雜因素的干擾。

圖2 NB組、GNB組、GN組患者Kaplan-Meier生存曲線比較

ATRX蛋白表達水平不同對NB患兒的預后生存時間雖無直接影響，但因本研究樣本量偏少且NB高危患兒相對較多，不能完全排除ATRX蛋白表達對NB患兒預后的間接影響[9-10]。

總之，NB中ATRX蛋白低表達，且ATRX蛋白低表達可能預示著不良預后。