雙孢蘑菇提取液對運動免疫功能提升的影響*

張山佳

（許昌學院體育學院，河南 許昌 461000）

雙孢蘑菇（Agaricus bisporus） 是蘑菇科（Agaricaceae） 蘑菇屬（Agaricus） 真菌，又名白蘑菇、紐扣蘑菇、洋蘑菇等[1]。因其是次級同宗結合的食用菌，每個擔孢子含有2個減數分裂不同交配型細胞核，多數擔子上產生2個擔孢子因而得名“雙孢”。雙孢蘑菇是一種被世界廣泛認可的蘑菇，很早就已經實現了人工栽培和工廠化栽培，是世界上栽培國家最多、面積最大的一種食用菌。目前在我國雙孢蘑菇的產量和消費量正逐年增長，已經成為了重要的食用菌品種[2]。雙孢蘑菇肉厚、潔白光滑，具有特殊的氣味，口感和味道受到世界各地人們的認可，常被水漬、鹽漬或罐裝成各類食材，營養價值也很高。富含多種氨基酸和蛋白質，還有銅、磷、硒、鉀和鋅等微量元素，而且雙孢蘑菇的熱量很低，但確能夠提供非常高水平的多糖、類黃酮和多酚類化合物和抗氧化劑，對高血壓等心血管疾病、腫瘤和炎癥等均有一定的療效[3]。目前，雙孢蘑菇的藥用價值正在被不斷挖掘，其富含的多糖等生物活性物質在現代運動保健和提高運動免疫力方面受到了廣泛的關注[4]。目前，對雙孢蘑菇的特殊鮮味和生物活性物質的研究受到了國內外學者的廣泛關注。針對雙孢蘑菇的生物活性成份對運動免疫力的影響開展研究，探討雙孢蘑菇提取液有效成分對機體運動的抗氧化能力和免疫力的作用和影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鮮雙孢蘑菇采購自河南泌陽縣真菌研究開發有限公司的“享菇事”品牌，開傘度≤7、菌蓋直徑≥3.0 cm均勻、菌蓋厚度≥1.2cm、殘缺菇≤1%、雜質≤0.1%、水分≤90%。

蒸餾水、亞硫酸鈉（分析純），天津金匯太亞化學試劑有限公司；檸檬酸、D-異抗壞血酸鈉（有效物質含量≥99.6%），鄭州裕和食品添加劑有限公司；丙二醛（MDA） 試劑盒、超氧化物岐化酶（SOD）試劑盒，上海優選生物科技有限公司。

1.2 儀器設備

FA1204N型電子分析天平，北京海天友誠科技有限公司；SCM800型高速萬能粉碎機，世邦工業科技集團股份有限公司；DZF-6050MBE型真空干燥箱，北京海天友誠科技有限公司；ASC04D型有機玻璃離子交換柱，新鄉市正安過濾設備有限公司；BW-TDM709型動物實驗跑臺，上海軟隆科技發展有限公司；HT82-BTS-330全自動生化分析儀，北京海富達科技有限公司；紫外可見分光光度計UV-1800PC，上海美譜達儀器有限公司。

1.3 雙孢蘑菇粉及其提取液的制備

試驗所用雙孢蘑菇粉提取采用黃凡等人提出的熱風干燥工藝制備[5]。將新鮮的雙孢蘑菇清洗干凈后，切成2 cm左右厚度的薄片備用。將蒸餾水過離子交換柱去除水中的離子，取100 g去離子蒸餾水，加入D-異抗壞血酸鈉0.5 g，檸檬酸、亞硫酸鈉各0.2 g混合均勻后加入雙孢蘑菇切片，浸泡2 h后取出用蒸餾水沖洗2遍，放入烘箱中60℃烘干2 h，取出用粉碎機打成粉末，過100目篩，即得雙孢蘑菇粉。將雙孢蘑菇粉按1∶10的料液比與蒸餾水混合制成雙孢蘑菇提取液備用。

1.4 試驗分組

試驗用SPF級小鼠購自上海交通大學醫學院（實驗動物科學部），動物生產許可證號：SCXK（滬） 2018-0007；體重 （22.2±3.5） g，雌雄各半，按照GB 14925-2010標準規定配制小鼠飼養條件和設施，按照GB 14924.3-2010配制小鼠飼料，保證小鼠生長所需的各種營養，嚴格按照SPF級實驗小鼠的飼養標準操作規程進行1周的適應性飼養。適應性飼養1周后對小鼠進行為期3 d的跑臺適應性訓練，將BW-TDM709型動物實驗跑臺的跑臺傾角設置為-15°，不使用電刺激，跑臺的速度設置為15 m·min-1，讓小鼠進行跑臺適應性訓練，一次可進行6只小鼠的跑臺訓練，選擇能夠連續正常跑步15 min以上的小鼠，按體重隨機分成3組，每組10只。

高劑量組每天灌胃0.3 mL的雙孢蘑菇提取液；中劑量組每天灌胃0.2 mL的雙孢蘑菇提取液；低劑量組每天灌胃0.1 mL的雙孢蘑菇提取液；空白對照組灌胃同樣體積蒸餾水。每天小鼠灌胃結束后1 h進行跑臺運動。使用適應性訓練時的系統參數，利用跑臺的自我保護設置。根據試驗小鼠的實際跑步時間，自動判別并記錄小鼠的力竭跑步時間。以上灌胃處理及跑步訓練連續進行4周。

1.5 小鼠血液指標檢測

末次跑臺運動結束后，對小鼠頜下用酒精消毒后固定，用采血針進行頜下一股靜脈采血。每次采血量控制在0.2 mL左右，如一次采血量不足可反復進行，采血完成后再次用酒精消毒止血。將采集的血樣用全自動生化分析儀進行血液紅細胞（RBC）、血紅蛋白HGB指標的檢測。

雙孢蘑菇提取液的抗氧化性通過檢測血液中丙二醛（MDA）的含量來完成。利用氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質后逐漸分解，生成丙二醛，檢測血液中的丙二醛含量即可得到脂質氧化的水平，從而評價雙孢蘑菇提取液的抗氧化能力。丙二醛測試盒的工作原理是：丙二醛與硫代巴比妥酸（Thiobarbituric Acid，TBA）縮合，生成紅色產物，在532 nm有吸收峰，進行比色后可估測樣品中過氧化脂質的含量；同時測定600 nm下的吸光度，利用532 nm與600 nm下的吸光度的差值計算MDA的含量。

同時通過超氧化物歧化酶（SOD） 來進一步評價雙孢蘑菇提取液的抗氧化性，超氧化物歧化酶廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，催化超氧化物陰離子發生岐化作用，生成過氧化氫和氧氣。超氧化物歧化酶不僅是超氧化物陰離子的催化酶，也是過氧化氫的主要生成酶，在生物抗氧化系統中具有重要作用。超氧化物歧化酶（SOD）測試盒的工作原理是：通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子，超氧陰離子再反應產生水溶性染料甲臜，后者在450 nm處有吸收；而超氧化物歧化酶可以有效抑制超氧陰離子，從而抑制了甲臜的形成；反應液黃色越深，說明超氧化物歧化酶的活性越低，反之則活性越高。

2 試驗結果與分析

2.1 雙孢蘑菇提取液對小鼠血液RBC、HGB含量的影響

雙孢蘑菇提取液后對小鼠RBC、HGB含量的影響見表1。

表1 雙孢蘑菇提取液對小鼠血液RBC、HGB含量的影響Tab.1 Effect of Agaricus bisporus powder on RBC and HGB content in blood of mice

由表1可知，3組小鼠紅細胞含量與對照組相比均有明顯的上升，高劑量組、中劑量組、低劑量組與對照組相比分別上升了10.39%、19.57和29.47%，灌胃劑量與紅細胞含量呈一定的正比量價關系。中劑量組和低劑量組小鼠血紅蛋白含量與對照組相比分別上升了3.53%和2.75%，影響不大，但高劑量組血紅蛋白含量上升了16.02%。試驗結果顯示高劑量雙孢蘑菇提取液的灌胃對與血紅蛋白含量影響較大，而中劑量組和低劑量組基本沒有影響。

試驗結果顯示，與對照組相比，3個組的紅細胞數量均有所增加，分析其主要原因是運動量的加大，一方面促使人體產生更多的紅細胞來增加攜氧量；另一方面，雙孢蘑菇提取液為體內紅細胞的新陳代謝提供了營養，修復了部分因運動而受損的紅細胞，從而增加了體內紅細胞的總量。從而提升了肌肉的運動能力。

2.2 雙孢蘑菇提取液對小鼠抗氧化能力的影響

雙孢蘑菇提取液對小鼠抗氧化能力的影響見表2。

表2 雙孢蘑菇提取液對小鼠抗氧化能力的影響Tab.2 Effect of Agaricus bisporus powder on the antioxidant capacity of mice

由表2可知，低劑量組與對照組相比MDA含量略微上升了2.56%，中劑量組與對照組相比MDA含量略微下降了1.87%，而高劑量組的MDA含量與對照組相比明顯下降達13.29%；高劑量組、中劑量組、低劑量組與對照組相比SOD含量均有所上升，高劑量組、中劑量組、低劑量組上升幅度分別為16.47%、26.62%和57.26%，雙孢蘑菇提取液的灌胃劑量與SOD含量呈一定的正比量價關系。

雙孢蘑菇提取液的抗氧化試驗表明。高劑量的雙孢蘑菇提取液對清除體內的MDA效果良好，而中、低劑量組效果一般。而灌胃了高劑量雙孢蘑菇提取液的小鼠MDA含量明顯較低，其主要原因就是雙孢蘑菇提取液中的生物活性物質對MDA的清除作用，能夠有效預防機體組織的過氧化現象，減少自由基對機體的傷害。推測雙孢蘑菇中的多糖、多酚等大分子等是提高機體抗氧化能力的主要活性物質。而中劑量組和低劑量組效果不明顯的主要原因可能是活性物質數量太少，對過量自由基的清除效果不佳，導致MDA含量變化不大。

試驗結果顯示，SOD抗氧化酶的含量與雙孢蘑菇提取液的灌胃劑量呈一定的正比量價關系。灌胃了雙孢蘑菇提取液的小鼠，體內SOD含量均有所升高，說明了雙孢蘑菇對小鼠體內抗氧化能力和免疫力的提升具有積極的作用，高劑量組、中劑量組和低劑量組的雙孢蘑菇提取液均對運動免疫力的提升有一定的功效。

3 討論

運動分為有氧運動和無氧運動，短時間的無氧運動對免疫力的影響相對較?。欢L時間的有氧運動由于考驗的是運動機體的有氧代謝能力，即肌肉在長時間、相對低強度下的運動能力。對免疫力的影響相對較大。在長時間的耐力運動時，機體對氧氣的需求量持續位于高位，運動時的心肌、骨骼肌等運動參與的肌肉細胞會因長時間的運動而出現缺水、過氧化狀態。同時，長時間的運動也會導致神經和免疫系統的超負荷工作，增加病毒入侵機會，出現“運動性免疫”問題，即因長期運動而產生的免疫力低下癥狀。對機體健康和免疫功能造成嚴重影響。

運動性免疫力低下產生的主要原因就是身體長期處于過氧化狀態，身體內產生過量的自由基，出現過氧化現象。通過采用動物試驗對雙孢蘑菇提取液的“免疫抑制”功效進行了研究。血液指標的檢測結果表明，模擬有氧運動的小鼠在灌胃了雙孢蘑菇提取液后，機體的血液指標表現出了一定的抗氧化能力，能夠改善運動時出現的機體免疫力下降現象，補充機體的營養物質也有效提高了機體的運動免疫力。試驗結果可為雙孢蘑菇提取液藥用價值的開發提供參考。