牛肝菌粗多糖抗運動病作用的原理研究*

王亞濤

（黃河科技學院公共體育藝術部，河南 鄭州 450067）

“運動病”是指特定環境條件下的各種不規則運動所引起的身體反應癥狀[1]?！疤囟ōh境”是指在乘船、飛機、汽車等交通工具時，環境條件的影響因素是多方面的，有的是汽油、空氣中的特殊氣味，有的是各種外部噪聲，還可能是海浪、周圍景色的起伏變化對視覺造成的沖擊；所謂的“不規則運動”是指顛簸、振動、搖晃、擺動、旋轉等運動方式；而“身體反應的癥狀”則根據不同的人，“運動病”會出現不同反應癥狀，如頭暈目眩、臉色蒼白、惡心嘔吐、眼花耳鳴，或者出冷汗、昏昏欲睡?！斑\動病”這種不適應性的癥狀產生的原因目前還不是十分清楚，有人認為是環境因素對聽覺、嗅覺和視覺的刺激，也有人認為是心理作用，還有研究猜測是內耳內人體位置平衡的器官的失調、植物神經功能紊亂等[2-3]。

“運動病”的治療目前主要通過鍛煉適應能力、服用抗運動病及鎮靜藥物和日常預防治療等手段[4]。近年來，日常預防和治療手段逐漸被人們所認可，通過調節飲食和保健食品的輔助治療取得了一定的效果，其中植物多糖在治療運動病方面的研究越來越受到廣泛的關注[5]。

牛肝菌（Boletus spp.）是牛肝菌科（Boletaceae） 一部分真菌的統稱，部分可食用。牛肝菌不僅香味獨特、營養豐富，是不可多得的美味佳肴，同時其藥用價值也十分突出，西醫對其在糖尿病、抗腫瘤、抗流感病毒[6]的功效十分認可，而中醫則認為牛肝菌在治療貧血、體虛、頭暈、耳鳴有特殊功效[7]，這與運動病的癥狀十分相似。為了解牛肝菌的藥用機理與生物活性成分，就牛肝菌粗多糖在運動病防治中的作用機理進行研究，進一步探討牛肝菌的食療效功效、探討牛肝菌粗多糖在運動病治療中的作用。

1 試驗方法

1.1 材料與試劑

干牛肝菌子實體購自重慶市謙城鑫泰農產品有限公司的“謙誠鑫泰”品牌牛肝菌，蟲蛀率≤1.0%，雜質≤1.0%；水分≤92.0%；灰分≤8.0%。

蒸餾水、95%乙醇、無水乙醇（分析純） 購自西安市灞橋化學試劑廠；氯仿、正丁醇購自山東茂軍化工科技有限公司；無水乙醚（分析純）、丙酮（化學純）購自河南省新鄉市中原有機化工有限責任公司。小鼠5羥色胺 (5-HT)ELISA檢測試劑盒，購自上海江萊生物科技有限公司。

1.2 儀器設備

SJBC-1000型立式粉碎機，臺州市世金塑膠機械有限公司；FA2004型電子分析天平，德國Sartorius公司；JB300-SH數顯恒速電動攪拌器，上海重逢科學儀器有限公司；DZF-6090型立式真空干燥箱，上海舍巖儀器有限公司；47600小鼠轉棒儀，深圳市瑞沃德生命科技有限公司；SA204型Y迷宮實驗分析系統，江蘇賽昂斯生物科技有限公司；BZY-DG-400大小鼠跳臺記錄系統，東莞博之遠生物科技發展有限公司；Allegra X-15R臺式冷凍離心機，貝克曼庫爾特生命科學事業部。

1.3 牛肝菌粗多糖提取

取牛肝菌干品清洗干凈后切段、烘干、粉碎、過篩，按照粗多糖水提醇沉法進行多糖分離提取[6]。取牛肝菌粉200 g，按料液比1∶10的比例加蒸餾水混合均勻，煎煮2 h；自然冷卻后，靜置沉淀反應2 h，重復3次后進行過濾，將過濾后得到的煎煮液濃縮至50%得到約1 000 mL的濃縮液，自然冷卻后放入4°C冰箱靜置24 h。采用Sevag法去除蛋白質[9]，取出后依次加入200 mL的氯仿、20 mL的正丁醇，用電動攪拌器混合15 min后靜置分層，去除水層與溶液交界處的變性蛋白，再加入500 mL的95%乙醇攪拌濃縮，重復3次后自然冷卻靜置24 h，收集底部沉淀物，依次用無水乙醇、丙酮和無水乙醚對沉淀物進行洗滌，除去水分和殘存物，真空干燥即得牛肝菌粗多糖粉末[8]。

1.4 試驗分組與試驗方法

1.4.1 試驗分組

試驗用BALB/c小鼠40只，體重 (20±2)g，購自濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，動物生產許可證號：SCXK（魯）20190003；按標準小動物飼養方式適應性飼養1周后隨機分成4組，每組10只。試驗開始后每天上午定時給3個劑量組的小鼠灌胃配制好的牛肝菌粗多糖溶液，高劑量組、中劑量組、低劑量組分別灌胃 400 mg·kg-1、200 mg·kg-1和 100 mg·kg-1濃度的牛肝菌粗多糖溶液；空白對照組灌胃同樣體積生理鹽水，連續灌胃1周。

1.4.2 適應性訓練

1）給藥1小時后進行迷宮適應性訓練：將小鼠放入Y迷宮中央，讓其自由穿梭于迷宮的3個臂，適應2 min～3 min后開始試驗。隨機變換安全區，電擊小鼠，記錄小鼠逃往安全區為一次正確反應。連續9次正確反應即為學會逃避。在每只小鼠試驗結束后，需清理Y迷宮的排泄物。用75%醫用酒精擦拭，直至酒精揮發完全再繼續下一只小鼠的檢測，以防止氣味影響后續小鼠的穿梭行為。如小鼠不能學會逃避則舍棄不用。

2）跳臺適應性訓練：將小鼠放上跳臺系統的平臺，觀察小鼠在箱內可自由上下適應2 min～3 min，然后將跳臺底部電棒通交流電。小鼠能夠感受到電擊，有正常的跳上平臺躲避電擊反應，訓練期內如果小鼠未跳下平臺則舍棄不用。

1.4.3 Y迷宮試驗

選擇迷宮適應性訓練和跳臺適應性訓練表現正常的小鼠，在末次適應性訓練結束后的第2天上午進行Y迷宮試驗。首先建立小鼠眩暈模型：將小鼠置于轉棒儀，轉速為10 r·s-1，勻速正向旋轉60 s急剎停止；立即再進行Y迷宮試驗，記錄小鼠學會逃避所用時間。

1.4.4 跳臺試驗

下午進度小鼠跳臺試驗。同樣方法建立小鼠眩暈模型后，立即將小鼠放入跳臺系統，記錄小鼠第一次從平臺跳下所需要的時間（潛伏期），記錄5 min內小鼠遭受電擊后跳下平臺的次數（錯誤次數）。

1.4.5 小鼠血清神經遞質含量檢測

建立小鼠眩暈模型后，無需麻醉，將小鼠固定，立即對頭部下頜處進行消毒、采血靜置30 min后進行冷凍離心機，在4℃、3 000 r·min-1離心15 min，將分離后的上清液嚴格按照小鼠5-羥色胺（5-HT）ELISA（酶聯接免疫吸附反應分析）檢測試劑盒操作步驟和方法，檢測血清內的神經遞質含量。

2 試驗結果與分析

2.1 小鼠Y迷宮試驗結果

各組小鼠學會逃避所用時間見表1。

表1 Y迷宮試驗結果Tab.1 The results of Y maze test

由表1可知，與對照組比較，灌胃牛肝菌粗多糖后，3個劑量組的小鼠逃避時間均有所縮短。說明牛肝菌粗多糖對產生眩暈的小鼠判斷力有積極的影響，對小鼠的機械旋轉所導致的眩暈有一定的抑制作用。而且灌胃劑量與抑制眩暈的效果有一定的正比例關系。

2.2 小鼠跳臺試驗結果

各組小鼠從平臺跳下時間和次數見表2。

表2 跳臺試驗結果Tab.2 The results of jumping test

由表2可知，與對照組比較，3個劑量組的小鼠的潛伏期均有顯著延長，其中高劑量組延長效果最好；而3個劑量組的錯誤次數均有明顯少，其中高劑量組的減少作用最為明顯。試驗結果說明，灌胃牛肝菌粗多糖對機械旋轉所導致的小鼠眩暈有一定的抑制作用，且灌胃劑量與抑制眩暈的效果呈現一定的正比例關系。

2.3 小鼠血清神經遞質水平變化

小鼠血清中神經遞質含量的試驗結果見表3。

表3 小鼠血清中神經遞質含量Tab.3 5-HT contents of in serum of mice

由表3可知，與對照組比較，3個劑量組的小鼠的神經遞質5-HT含量均有所降低，而且中劑量組的效果最為明顯。說明灌胃牛肝菌粗多糖能夠顯著降低小鼠血清中神經遞質5-HT的含量，抑制胃腸神經的興奮度，減少惡心嘔吐等運動病癥狀；同時，灌胃中等劑量的效果要更好些。

3 結論

通過試驗，顯示出牛肝菌粗多糖中的生物活性物質能夠對神經功能紊亂有一定的抑制作用，對小鼠的學習和記憶能力有一定的提高。這說明牛肝菌粗多糖對運動病的作用機理主要是對神經系統的調控作用，包括了對腦神經、中樞神經等神經系統的調節。牛肝菌粗多糖的主要功效在于對神經細胞過氧化的保護作用、對神經細胞的營養作用、新陳代謝和免疫力的調節作用等。但由于運動病的產生原因復雜，與人的心情、對外界環境的適應能力和神經系統的反應等多種因素有關。因此，后期還需要對牛肝菌粗多糖對血液系統和心理方面的影響進行研究，進一步探討對運動病的診斷和治療方法。