羊肚菌與盤菌相關性初探*

李建英，劉春麗，尚陸娥，楊珍福，羅孝坤，劉紹雄**

（1.云南省供銷合作社科學研究所，云南 昆明 650221；2.中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所，云南 昆明 650221）

羊肚菌（Morchella spp.）是一種珍貴的食（藥）用菌，隸屬于子囊菌門（Ascomycota） 盤菌綱（Discomycetes） 盤菌目（Pezizales） 羊肚菌科（Morchellaceae），是羊肚菌屬（Morchella） 真菌的統稱。因其形似羊肚狀而得名，又稱羊肚蘑、蜂窩磨、包谷菌等[1-4]。

羊肚菌具有較高的營養價值和經濟價值，市場需求量大，野生資源較少，是人工栽培食用菌產業中的熱門栽培品種。據不完全統計，2012年全國羊肚菌栽培面積約200 hm2[5]，2018年～2019年達到8 000 hm2～9 333 hm2[6]，發展趨勢迅猛。羊肚菌栽培發展快速，但其產量不穩定、重現性差等問題尚未解決，成為產業發展過程中的“隱疾”，又由于其較高的成本投入，因此羊肚菌栽培存在著較大的風險。造成羊肚菌產量不穩定的原因有很多，環境條件無法完全人為控制，對其生活史了解不夠清楚，與其他微生物間的相互作用尚不明確等，都可能是影響羊肚菌產量的重要因素。

在之前的研究中，發現一些霉菌、黑腐皮殼菌等對羊肚菌菌絲生長、出菇有一定促進作用[7-8]，但都缺乏精確的數據支撐。朱斗錫[9]研究中羊肚菌生長中發現了“伴生菌”，認為在特定的條件下形成菌核（sclerotium）促進羊肚菌的萌發，但也沒有列出確切的研究證據。羊肚菌是否具有自己的伴生菌，在自身生長過程中產生作用，通過影響子實體產生來影響羊肚菌的產量，目前尚未可知。但在羊肚菌栽培過程中發現，大棚中一般都有盤菌出現，被稱為羊肚菌的出菇標志，且盤菌科和羊肚菌科同屬于盤菌目，在分類地位上較為接近。如果盤菌是羊肚菌的伴生菌，兩者在相同環境中就會協同生長。

鑒于此，通過統計10個羊肚菌栽培大棚中盤菌生長情況和羊肚菌產量，并對盤菌菌絲和羊肚菌菌絲進行拮抗試驗研究，探索其作為羊肚菌伴生菌的可能性。

1 材料和方法

1.1 供試菌種

羊肚菌101、中菌羊肚菌1號、晉寧羊肚菌3號，3個品種均為羊肚菌屬中的六妹羊肚菌（Morchella sextelata），由中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所菌種與資源研究中心提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 羊肚菌栽培

按照羊肚菌常規栽培方法進行羊肚菌栽培。10個羊肚菌大棚，栽培3個羊肚菌品種（1號～4號4個大棚為羊肚菌101，5號～9號5個大棚為中菌羊肚菌1號，10號大棚為晉寧羊肚菌3號）。栽培方式為作畦撒播，每畝菌種使用量為150 kg～250 kg，播種完成后覆土2 cm～4 cm，保證將菌種全部覆蓋，后進行覆膜，起到保濕、保溫、防雨的作用，同時能夠減少雜草的生長。

播種后10 d，播種廂面布滿菌絲，出現菌霜（大量白色的分生孢子）時放置營養袋，放置營養袋時將袋子一側劃口后緊貼廂面，用量為3袋/m2。菌絲生長階段需土壤含水量約20%，出菇前澆2次重水，期間間隔15 d，保證水分充足。

1.2.2 羊肚菌產量和盤菌統計

每個大棚中隨機圈出1 m2的5個樣方進行羊肚菌產量統計，計算平均數；再按照每個大棚實際栽培面積250 m2，計算出各個大棚中的羊肚菌產量。

盤菌產量按照肉眼可見的密度來進行統計，并測量其圓盤形態大小，對子實體樣品進行ITS序列測定和比對分析。

1.2.3 拮抗試驗

1） 菌絲分離

采用組織分離的方法，在接種室無菌操作臺中進行無菌操作，切取小塊羊肚菌子實體在75%的酒精中浸泡2 min，在滅菌的純凈水中浸泡清洗3次～5次，放置在吸水紙上洗干水分后接種到PDA培養基中，放置在24℃恒溫培養箱培養，7 d后即獲得羊肚菌菌絲培養物。應用同樣的方法獲得盤菌菌絲培養物。

2） 拮抗試驗

在接種室無菌操作臺中分別?。?.5×0.5） cm2大小的羊肚菌菌絲和盤菌菌絲培養物，接種在同一個PDA平板中，24℃培養箱中進行對峙培養，對峙雙方為羊肚菌和其大棚中產生的對應盤菌。觀察盤菌和羊肚菌菌絲的拮抗反應。

2 結果與分析

2.1 盤菌與羊肚菌產量的相關性

在10個羊肚菌栽培大棚中產生了4種形態的盤菌，圓盤形態和ITS測序結果見圖1、表1，羊肚菌產量和盤菌數量統計結果見表2。

表1 盤菌形態和序列測定結果Tab.1 Morphology of Peziza spp.and sequence determination results

由圖1、表1可知，在10個大棚中栽培了同屬于六妹羊肚菌（M.sextelata） 的3個不同羊肚菌品種，10個大棚產生了4種不同形態的盤菌。根據ITS序列在NCBI數據庫中的比對結果，將盤菌1型鑒定到盤菌目，盤菌2型和盤菌3型鑒定到盤菌屬，盤菌4型鑒定到多變盤菌種（P.varia），且4個不同類型的盤菌ITS序列差異較大，確定為不同的種。10個大棚中都是六妹羊肚菌，產生了4種不同類型的盤菌，說明羊肚菌和盤菌間不存在種間生長特異性。1個羊肚菌大棚會產生多種盤菌，說明盤菌的產生與羊肚菌的品種、環境條件都沒有特異性關系。

表2 盤菌生長情況和羊肚菌產量統計Tab.2 Statistics of the Peziza spp.and the yield of Morchella sextelata

由表2可見，所有羊肚菌栽培大棚中都自發產生了盤菌，但羊肚菌產量和盤菌的數量之間沒有相關性。栽培羊肚菌的產地基本都會產生盤菌，兩者之間應該是存在著一些聯系，但盤菌是否是羊肚菌出菇的關鍵還未可知，還需要做更多的分析研究。

2.2 盤菌與羊肚菌的拮抗反應

盤菌菌絲和羊肚菌菌絲拮抗試驗結果見表3。

表3 盤菌和羊肚菌的拮抗作用Tab.3 Antagonistic action of Peziza spp.and Morchella sextelata

由表3可知，分離得到的4個盤菌，菌絲與羊肚菌菌絲間都不存在拮抗反應，且在試驗過程中發現，盤菌和羊肚菌菌絲都能正常生長，并不存在任何一方生長緩慢、受抑制的情況。

3 結論

羊肚菌栽培大棚中基本都會自發產生盤菌，且通過拮抗試驗發現，盤菌菌絲和羊肚菌菌絲之間不存在拮抗反應，雙方都能在同一培養基中快速生長，滿足了作為伴生菌的生長特性。

通過統計發現，羊肚菌產量和盤菌的數量之間沒有相關性，盤菌滿足了作為羊肚菌伴生菌的生長條件，但盤菌是否作為羊肚菌伴生菌，盤菌和羊肚菌之間是否存在互利共生，是否對羊肚菌子實體的產生有影響，還需要做更多的研究。且在研究過程中發現盤菌子實體抗感染能力較弱，極易被霉菌感染，之后傳染周圍的羊肚菌，影響羊肚菌產量，如果作為伴生菌，就需要對其抗感染性進行進一步的研究。