梅州市2017～2019年外環境禽流感標本檢測結果分析

鄒勇文 陳志青

[摘要]目的 分析梅州市2017～2019年外環境禽流感標本檢測結果，為預防和控制禽流感疫情提供合理依據。方法 收集梅州市2017年1月～2019年12月禽類市場外環境標本4176份，采用熒光定量PCR方法對甲型流感病毒核酸以及H5、H7、H9亞型流感病毒核酸進行檢測，依據檢測結果分析禽流感病毒污染情況。結果 2017～2019年梅州市禽類市場外環境標本禽流感核酸病毒檢測中，2018年甲型流感病毒檢出數比例呈現上漲趨勢，高于2017、2019年，其中H5、H9類型呈現上漲，H7檢出率呈現下降，其中案板臺面、刀具砧板、禽類糞便、秤具秤盤外環境標本中甲型流感病毒各亞型檢出數顯著偏高。結論 梅州市禽類市場外環境檢出多種亞型禽流感病毒，以屠宰、銷售環境相關外環境污染狀況嚴重，重點加強對禽類市場外環境清潔消毒制度的落實，對重點人群做好防護工作。

[關鍵詞]梅州市;外環境;禽流感;標本;檢測

[中圖分類號] R44 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1674-4721（2020）9（c）-0247-03

[Abstract] Objective To analyze the test results of avian influenza specimens in external environment of Meizhou′s poultry market during the period from 2017 to 2019， provide reasonable basis on the disease prevention and control. Methods From January 2017 to December 2019， 4176 specimens from external environment of Meizhou′s poultry market were obtained. Fluorescent quantitative PCR was applied to detect nuclein acid， H5， H7 and H9 subtypes of avian influenza A virus. Environmental pollution conditions were examined. Results Test results indicated that the detection rate of avian influenza A virus in 2018 was higher than that in 2017 and 2019. H5 and H9 infection rate was increased while H7 rate was decreased. The cases with virus subtypes from chopping board countertops， knife sticky boards， poultry manure， weighing pans were substantially increased. Conclusion Many virus subtypes are generated in the external environment of Meizhou poultry market， especially for those of animal slaughter and selling booths. Therefore， the disinfection system of poultry market environment shall be implemented for protection of focus groups.

[Key words] Meizhou city; External environment; Avian influenza; Specimens; Detection

禽流感是指A型流感病毒感染所引起的禽類呼吸道系統傳染疾病，流感病毒將禽類作為宿主，傳播至禽類，不會感染人類，一旦禽流感病毒基因發生重組、突變，此時禽類之間傳染禽流感病毒亞型會傳播至人類引起感染，嚴重情況導致流感流行[1]。自2013年，人感染H7N9病例以來，影響到禽類養殖業，并造成巨大損失，對人類健康造成嚴重威脅。近些年來研究表明[2]，出現禽流感病毒變異，如H10N8、H5N6和H7N4等禽流感病例。部分研究表明[3]，此時人感染禽流感病毒重要因素為與禽類直接接觸，因此，提高對禽類及其飼養場所外環境標本的監測，能控制禽流感發生。為了解梅州市外環境禽流感病毒污染情況，防止出現疫情，保障人民群眾身體健康、生命安全，我市對2017～2019年外環境禽流感標本檢測情況進行以下分析，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

收集梅州市2017年1月～2019年12月禽類市場外環境標本4176份，2017年樣本收集1697份，2018年樣本收集1184份，2019年樣本收集1295份，按照《廣東省家禽鳥類市場環境樣品禽流感病毒污染監測方案》[4]及相關指引要求，收集梅州市代表性禽類交易市場，收集禽類外環境標本，每月將部分活禽批發市場、農貿市場禽類零售檔口作為外環境采集樣本地點，樣本收集包括禽類排泄物、籠具表面、籠具放置地面、刀具表面、禽肉案板表面等環境標本，帶病保存，及時送至疾病預防控制中心實驗室開展檢測。

1.2方法

本次研究開展，納入樣本檢測，以《人感染高致病性禽流感診斷標準：WS 284-2008》[5]（附錄D）中關于標本檢測作為依據。提取樣本中病毒核酸，研究所用儀器為西安天隆科技有限公司核酸提取儀，核酸提取試劑盒為西安天隆科技提取試劑盒，批號為19120710T014。病毒核酸檢測所用儀器為ABI 7500 fast，檢測所用試劑盒批號：T201908088。甲型流感病毒核酸實時熒光PCR檢測試劑盒為北京卓誠惠生生物科技股份有限公司（XABT）生產，檢測所用試劑盒批號：T201901001。H5/H7/H9亞型禽流感病毒核酸三重實時熒光PCR檢測試劑盒為北京卓誠惠生生物科技股份有限公司（XABT）生產，檢測所用試劑盒批號：T201901001。擴增反應體系及條件嚴格按照試劑盒說明書進行設置及操作。

2結果

2.1 2017～2019年梅州市禽類市場外環境標本禽流感病毒核酸檢測情況

2017～2019年梅州市禽類市場外環境標本禽流感核酸病毒檢測中，2018年甲型流感病毒檢出數比例呈現上漲趨勢，高于2017、2019年，其中H5、H9類型呈現上漲，H7檢出率呈現下降（表1）。

2.2 2017～2019年梅州市禽類市場不同環境類型標本禽流感病毒核酸檢測情況

其中案板臺面、刀具砧板、禽類糞便、秤具秤盤外環境標本甲型流感病毒各亞型檢出數顯著偏高，占據核酸檢測結果前四位（表2）。

3討論

禽流感病毒歸屬至黏病毒科甲型流感病毒屬，主要發病對象為禽類。1997年香港出現首例跨越物種屏障人類感染禽流感病毒，后續病毒隨著時間推移出現變異，常常出現禽流感病毒致病、致死事件[6]。2013年，我國發現新型重配H7N9禽流感病毒感染，截至2017年6月30日，病毒感染流行次數達到5次以上，總計感染人數為1552例，死亡率為40.00%。至2017年春季，高致病性禽流感病毒出現，導致25人感染，給我國社會經濟造成損害[7]。同時研究表明[8]，部分人禽流感病毒基因在外環境下可重組，當部分基因位點出現變異，并為跨種傳播奠定基礎。近些年來相關研究表明[9]，此時接觸活禽、暴露于活禽市場是人類感染禽流感病毒的重要風險因素，活禽市場在禽流感病毒傳播中發揮著放大的作用。因此，對禽類相關環境中禽流感病毒開展監測，對后續禽流感疫情防范起著重要的臨床意義。

梅州市處于閩、粵、贛三省交接處，作為活禽交易重要地域，禽類來源范圍廣泛，福建、江西等地域均有活禽輸入，且本地散養戶眾多，此時禽流感防控上，整體形勢嚴峻[10]。本研究結果顯示，通過對梅州市禽類市場外環境標本禽流感病毒核酸檢測情況分析得出，梅州市禽類市場外環境普遍存在禽流感病毒污染，2017、2018、2019年甲型流感病毒檢出情況分別為18.80%、25.25%、19.31%，呈現上升趨勢。2017～2019年檢出甲型流感病毒感染，證實上述地區中，禽流感病毒污染情況嚴重，并廣泛存在本地區禽類市場外環境。鑒于本次調查規模僅抽取部分禽類交易市場集中區域進行監測，建議梅州市相關部門仍需加強對禽類環境長期、持續的監測，以期更準確地了解梅州市本地禽類交易市場外環境禽流感的污染情況。通過分析2017～2019年各亞型流感病毒轉變情況，流行亞型為H9，其中H5、H9并存，進一步提示，禽類市場外環境中，存在禽流感病毒發生重配條件。自2018年，將H9亞型恢復，與我國農業生產活動中2015年推廣應用新型禽用H5亞型禽流感疫苗、2017年大面積應用重組禽流感病毒二價疫苗相關。上述措施落實，能改善外環境高致病性禽流感污染情況，控制禽流感發生，有效防控人感染禽流感疫情[11]。對2017～2018年梅州市禽類市場不同環境類型標本禽流感病毒核酸檢測情況分析，其中案板臺面、刀具砧板、禽類糞便、秤具秤盤等外環境標本中甲型流感病毒各亞型檢出數顯著偏高。依據多年累積禽流感病毒研究分析結果表明，上述病毒生命力頑強，并廣泛隱藏至污水、案板及糞便各種外環境中[12]。陽性率偏高為籠具表面、刀具砧板、禽類糞便、秤具秤盤外環境，進一步得出，禽類市場周邊外環境整體感染率偏高，一旦流感病毒基因變異，出現禽傳人現象，市場內爆發性流感發生率偏高。活禽農貿市場作為感染禽流感危險場所，建議相關部門重視對活禽農貿市場徹底消毒管理。加強對禽類養殖管理，加強出欄前免疫檢疫，對活禽市場，落實“一天一清洗，一周一大掃除，一月一休市、活禽零存欄”制度，并積極推行“集中屠宰、冷鏈配送、冰鮮上市”，降低人群禽流感暴露風險[13]。同時，提高市區內對人群禽流感病原學、市場環境禽流感污染狀況監測，并對禽流感病毒動態分布趨勢深入分析，提高對致病力、傳播能力的監測，評估風險程度，并依據結果實施干預措施[14]。同時，對禽類市場作業工作人員，積極宣傳相關衛生防病知識，提高個人防護及自我保護意識，積極對其他禽類、排泄物所接觸環境、地域進行清理和消毒，減少人群感染禽流感病例[15]。上述措施實施，仍然無法消除禽類市場外環境病毒污染風險。長遠發展上，需轉變市民直接購買活禽習慣，減少乃至杜絕與活禽接觸機會。

綜上所述，梅州市禽類市場外環境檢出多種亞型禽流感病毒，以屠宰、銷售環境相關外環境污染狀況嚴重，重點加強對禽類市場外環境清潔消毒制度的落實，對重點人群做好防護工作。

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（收稿日期：2020-02-14）