食品中對羥基苯甲酸酯類化合物含量的GC-MS法測定

傅群

吉安市食品藥品檢驗檢測中心（吉安 343000）

對羥基苯甲酸酯類化合物因其良好的殺菌能力和穩(wěn)定性，在食品、化妝品及醫(yī)藥等行業(yè)被廣泛用作防腐劑。有研究表明，此類化合物對人體可能存在一定的危害[1-3]。與此同時，人為添加和環(huán)境帶入等不同渠道已經(jīng)使得越來越多的食品中檢出對羥基苯甲酸酯類物質(zhì)[4-6]。我國食品安全國家標準GB 2760—2014《食品添加劑使用標準》規(guī)定了從飲料、水果、蔬菜等到醬及其制品、蠔油、蝦油等多類食品中對羥基苯甲酸酯類及其鈉鹽的最大使用量，而對應(yīng)的食品安全國家標準GB 5009.31—2016《食品中對羥基苯甲酸酯類的測定》只規(guī)定了醬油、醋、飲料及果醬四類基質(zhì)較為簡單的食品中的檢測方法。因此，建立適用多類食品中對羥基苯甲酸酯類的檢測方法已迫在眉睫。

食品中對羥基苯甲酸酯類的檢測方法主要有氣相色譜法[5-6]、液相色譜法[7-8]、液相色譜-質(zhì)譜法[9-11]、氣相色譜-質(zhì)譜法[12-16]等。樣品的前處理方法主要是液液萃取、分散液液微萃取、固相萃取等。綜合來看，較簡單的前處理方法并不能很好地除去色素、磷脂、脂肪等基質(zhì)干擾，而除雜效果較好的方法步驟又很繁瑣，消耗品也多。此次試驗旨在建立一個適用范圍廣、相對簡單且高效的檢測方法。

1 試驗部分

1.1 儀器、試劑與材料

Agilent 7890A/5975C氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀；DL-6000B離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠）；VORTEX-5渦旋混合器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；Quintix224-1CN電子天平（德國賽多利斯集團）。

對羥基苯甲酸酯類溶液標準物質(zhì)：對羥基苯甲酸甲酯（MeP）、對羥基苯甲酸乙酯（EtP）、對羥基苯甲酸丙酯（PrP）、對羥基苯甲酸丁酯（BuP），質(zhì)量濃度均為1.00 mg/mL，北京海岸鴻蒙標準物質(zhì)技術(shù)有限責任公司。

乙腈（色譜純，SCHARLAB S. L.）；氯化鈉（分析純，西隴科學(xué)股份有限公司）；鹽酸（分析純，西隴科學(xué)股份有限公司）；Waters Oasis PRIME HLB（3 mL，60 mg；3 mL，150 mg；6 mL，200 mg）固相萃取小柱（Waters）。

1.2 樣品前處理

準確稱取1 g（精確至0.000 1 g）樣品于10 mL玻璃試管中，加入1 mL水和0.05 mL（1+1）鹽酸，渦旋1 min，再依次加入1 mL飽和氯化鈉溶液和2.00 mL乙腈，渦旋1 min，以4 000 r/min離心5 min，殘渣加入2.00 mL乙腈重復(fù)提取1次，合并上清液，直接過Oasis PRIME HLB小柱后進行氣相色譜-質(zhì)譜測定。

1.3 色譜/質(zhì)譜條件

1.3.1 色譜條件

色譜柱為HP-5（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進樣口溫度為250 ℃；進樣量為1.0 μL，不分流進樣；載氣為高純氦氣（純度99.999%）；恒流模式；流量為1.0 mL/min；升溫程序：100 ℃保持1 min，以15 ℃/min升到180 ℃保持1 min，以5 ℃/min升到200 ℃保持1 min，以20 ℃/min升到280 ℃保持5 min。

1.3.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊源（EI）；電離能為70 eV；離子源溫度為230 ℃；MS四極桿溫度為150 ℃；溶劑延遲7.5 min，采集模式為全掃描和選擇離子監(jiān)測模式，主要質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 4種羥基苯甲酸酯類化合物的質(zhì)譜參數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑選擇

為了簡化操作，使吸取溶劑更方便，選用比水輕的乙腈、乙醚、乙酸乙酯、丙酮-正己烷（1︰9，V/V）作為提取溶劑進行考察。結(jié)果表明，上述溶劑的提取效率無明顯差異，從經(jīng)濟、環(huán)保、安全的角度考慮，選擇乙腈作為提取溶劑。

2.2 樣品凈化

Oasis PRIME HLB小柱使用無需活化和平衡，為了提高檢測效率，選擇它來凈化樣品。對不含油脂色素等基質(zhì)很簡單的樣品，提取上清液，可在過微孔濾膜之后直接上機測定。對其他樣品，用Oasis PRIME HLB（3 mL，60 mg）小柱凈化。結(jié)果顯示4種目標物回收率均在88%～105%之間。但對于油脂含量特別高的樣品如油辣椒，其凈化效果并不太有效。因此用Oasis PRIME HLB（3 mL，150 mg）和Oasis PRIME HLB（6 mL，200 mg）小柱凈化。使用Oasis PRIME HLB（3 mL，150 mg）小柱時，其凈化效果無明顯改善，且回收率下降至65%～78%；使用Oasis PRIME HLB（6 mL，200 mg）時，小柱凈化效果有明顯改善，但回收率也出現(xiàn)較大幅度的下降，在60%～70%之間。因此，對于油脂含量特別高的樣品，Oasis PRIME HLB（3 mL，150 mg）小柱并不適用，而如果使用Oasis PRIME HLB（6 mL，200 mg）小柱凈化，則必須將加標回收率代入計算測定結(jié)果才更準確。

2.3 方法學(xué)驗證

2.3.1 方法的線性關(guān)系

將對羥基苯甲酸酯類溶液標準物質(zhì)按比例稀釋成系列濃度的混合標準工作液，質(zhì)量工作濃度在0.01～2.00 μg/mL之間。在選定的色譜條件和質(zhì)譜條件下測定，以目標物質(zhì)量濃度為橫坐標，以目標物峰面積為縱坐標，建立線性關(guān)系。試驗得出的線性回歸方程、線性關(guān)系、相關(guān)系數(shù)（r）和方法檢出限結(jié)果見表2，質(zhì)譜圖見圖1。方程線性相關(guān)系數(shù)均在0.999 6以上，表明此方法在該濃度范圍內(nèi)線性良好。

表2 4種羥基苯甲酸酯類化合物的線性范圍、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和方法檢出限

圖1 1.00 μg/mL的混標溶液色譜圖

2.3.2 精密度和回收率

表3 4種羥基苯甲酸酯類化合物的平均回收率和相對標準偏差

圖2 蠔油加標樣品色譜圖

圖3 果汁飲料加標樣品色譜圖

圖4 魚罐頭加標樣品色譜圖

2.4 實際樣品測定

通過試驗建立的方法，對蠔油、醬油、含乳飲料、果汁飲料、辣椒醬、魚罐頭、火腿腸進行檢測。除辣椒醬檢出對羥基苯甲酸乙酯，含量為7.6 mg/kg，其他樣品均未檢出目標物。

3 結(jié)論

試驗運用氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)對多種食品中對羥基苯甲酸酯類化合物含量的測定進行研究，建立起一套基于氣相色譜-質(zhì)譜法可同時測定4種對羥基苯甲酸酯類化合物的檢測方法。該方法前處理簡單安全高效、消耗少、重復(fù)性好，除油脂含量特別高的樣品外，對其它樣品均能在保證較好凈化效果的同時獲得準確穩(wěn)定的檢測結(jié)果。