老年乳腺癌患者新輔助化療后原發灶與轉移灶腫瘤標志物表達比較

周祥敏 鄭元停 (三亞市婦幼保健院檢驗科，海南 三亞 572000)

早期乳腺癌患者不會出現特異性臨床表現和體征，導致大部分患者就診時病情已發展至中晚期。此外，由于老年患者各器官功能逐漸衰退，機體免疫力和抵抗力降低，相較于中青年乳腺癌患者，一般預后較差〔1,2〕。新輔助化療是臨床治療局部晚期乳腺癌或使腫瘤縮小后爭取保留乳房手術的有效手段，與傳統輔助化療相較而言，新輔助化療更有利于降低腫瘤分期，提高手術和保留乳房的概率，可有效控制癌細胞向全身擴散，從而提高生存期〔3〕。有研究表明，乳腺癌原發灶和轉移灶中的分子標志物表達水平不同，且臨床治療方案存在一定差異性〔4〕。本研究旨在探討老年乳腺癌患者新輔助化療后原發灶與轉移灶腫瘤標志物的表達情況。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2019年1～7月于三亞市婦幼保健院接受新輔助化療的老年乳腺癌患者82例的臨床資料。年齡61～79歲，平均(69.42±2.74)歲；體重指數17～27 kg/m2，平均(23.42±1.12)kg/m2；文化程度：17例初中及以下，36例高中/中專，29例大專及以上；浸潤性導管癌67例，浸潤性小葉癌15例。納入標準：①符合《中國老年乳腺癌治療專家共識(2018)》〔5〕內相關診斷標準，且經病理學檢查確診者；②認知功能正常。排除標準：①精神疾病史；②合并其他惡性腫瘤；③免疫系統疾??；④血液系統疾病；⑤合并心、肝、腎等重要臟器功能嚴重損害。

1.2方法 所有患者接受新輔助化療后的腫瘤組織標本，采取完畢后需在離體30 min內送至檢查，以5 mm為間距將大體標本切開，并將其放置固定于10倍體積的4%中性甲醛緩沖溶液中，時間6～48 h，進行常規石蠟包埋等操作，5 μm切片。選用3%過氧化氫(H2O2)室溫溫育5～10 min，對內源性過氧化物酶的活性進行滅活，并給予磷酸鹽緩沖液(PBS)進行沖洗，重復3次，2 min/次；之后分別將Ki-67、人表皮生長因子受體(HER)2及孕激素受體(PR)一抗工作液滴加入，在37℃環境下進行溫育，溫育時間1～2 h，或在4℃環境下過夜；再給予PBS進行沖洗，共3次，2 min/次，將聚合物輔助劑(Polymer Helper)滴入，室溫或37℃室溫溫育20 min，給予PBS沖洗，共3次，2 min/次，滴加多聚過氧化物酶抗鼠及抗兔抗體，室溫或室溫37℃溫育20～30 min，再次采用PBS沖洗，共3次，2 min/次。最后選用二氨基聯苯胺(DAB)顯色液進行顯色，4～8 min，再給予自來水進行反復沖洗，蘇木素復染、脫水透明、封片，并采用顯微鏡進行觀察。雌激素受體(ER)、PR及Ki-67采用全自動免疫組化染色機(上海精密儀器儀表有限公司，型號：MY2300)進行染色評估，且采用乙二胺四乙酸(EDTA)緩沖液進行抗原修復，修復時間為20 min。根據《ASCO/CAP 乳腺癌激素受體 IHC檢測指南》〔6〕中標準作為ER、PR結果判斷陽性細胞標準：陽性細胞百分數及陽性強度≥1%腫瘤細胞核陽性為陽性，若腫瘤細胞核染色<1%為受體陰性表達。采用美國Abbott公司所提供的雙探針試劑盒及全自動免疫組化機(徠卡顯微系統(上海)貿易有限公司，型號：BOND MAX)對HER2受體進行檢測評估，常規脫蠟、抗原修復，并在37℃環境下溫育24 min，蘇木精復染。采用ASCO/CAP指南標準〔7〕判定：無著色細胞或10%腫瘤細胞呈模糊不清/微弱、不完整的細胞膜著色為陰性；存在高于10%的腫瘤細胞為弱至中等強度和(或)不完整細胞膜著色，或存在不高于10%的腫瘤細胞呈強度、完整細胞膜著色為不確定；多于10%細胞呈強度、完整細胞膜著色為陽性。對(不確定)的患者進行光原位雜交(FISH)檢測，依據組織學及免疫組織化學切片定位，選取4 mm×4 mm的浸潤癌組織，當切片不均勻染色時，選取不同代表區域對比例進行記錄。處理石蠟切片，選用80℃、1 mmol/L硫氰酸鈉(NaSCN)液進行熱修復，修復時間為30 min，0.1 mg/ml蛋白酶K 37℃消化10 min，采用核酸雜交漂洗液對切片進行漂洗，漂洗時間5 min，在室溫環境下干燥切片；將10 μl雜交液滴入，放置于雜交儀中孵育16 h，溫度為42℃。切片經0.1%NP-40/2×SSC洗滌5 min，4'，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)復染細胞核。觀察切片，并對圖像進行采集。每張切片需確保至少4個區域、共20～80個浸潤性乳腺癌腫瘤細胞，對每個細胞核HER2及CEPl7信號數量進行記錄，計算HER2、17號染色體著絲粒探針(CEP17)的平均拷貝數及HER2/CEP17比值。并對其陰陽性進行判斷，陰性：HER2/CEP17<2.0且HER2平均拷貝數<4.0；不確定：HER2/CEP17<2.0且4.0≤HER2平均拷貝數<6.0；陽性：HER2/CEP17≥2.0或HER2平均拷貝數≥6.0。Ki-67判定標準依據St．Gallen國際乳腺癌會議共識進行判斷〔8〕，低表達：Ki-67<14%；高表達：Ki-67≥14%。

2 結 果

2例乳腺癌原發灶與轉移灶ER存在表達差異，2例乳腺癌原發灶為陽性，而轉移灶為陰性。7例乳腺癌原發灶與轉移灶PR存在表達差異，5例乳腺癌原發灶為陽性，而轉移灶為陰性；2例乳腺癌原發灶為陰性，而轉移灶為陽性。3例乳腺癌原發灶與轉移灶HER2存在表達差異，1例乳腺癌原發灶為陽性，而轉移灶為陰性；2例乳腺癌原發灶為陰性，而轉移灶為陽性。17例乳腺癌原發灶與轉移灶Ki-67存在表達差異，14例乳腺癌原發灶為陽性，而轉移灶為陰性；3例乳腺癌原發灶為陰性，而轉移灶為陽性。見表1。

表1 乳腺癌原發灶及轉移灶中ER、PR、HER2、Ki-67表達變化(n)

3 討 論

乳腺癌是女性群體中高發的一種惡性腫瘤疾病，主要在老年女性群體中多見，且發病率及死亡率目前仍呈逐年遞增及年輕化趨勢，現已成為危害女性健康的重要疾病之一。乳腺癌的發生及發展過程與性激素具有密切關系，而激素受體的發現是乳腺癌治療史上的里程碑之一〔9,10〕。

ER是一種與雌二醇結合后形成的蛋白分子，可與雌激素相互結合后形成復合物，且可轉向細胞內，能夠參與基因轉錄、蛋白合成和細胞的分裂增殖等多種生理過程中。PR是核受體超家族中的一種甾體激素受體，ER的表達水平與乳腺癌患者接受內分泌治療的治療效果具有緊密關系，對兩種受體進行檢測能夠對患者接受內分泌治療的情況進行精準反饋，其檢測結果對制定、選擇治療方案具有重要影響〔11〕。不同類型腫瘤存在原位癌演變為浸潤癌，原發腫瘤隨著時間的自身演變及原發灶向轉移灶發展等3種情況的時間異質性〔12,13〕。臨床認為造成這種異質性的原因較多，如標本不同、實驗室條件差異及不同檢測方法等客觀因素可能會造成人為誤差，而腫瘤生物學特性發生變化、以往治療史及受體之間的相互作用也會造成差異性。有研究表明，2/3的50歲以下乳腺癌患者可見ER或PR呈陽性表達，而50歲以上的乳腺癌患者中有80%可見ER陽性，表明ER和PR是乳腺癌患者臨床治療過程中對預測及預后進行觀察的兩項重要參考指標〔14〕。

HER2是目前研究較為透徹的乳腺癌基因之一，主要由922個腺嘌呤、1 382個胞嘧啶、1 346個鳥嘌呤及880個胸腺嘧啶構成〔15〕。HER2蛋白是一種跨膜蛋白，具有一定的絡氨酸蛋白激酶活性，目前臨床認為HER2基因擴增是影響乳腺癌生長與轉移的重要因素之一，約有30%的乳腺癌患者中存在HER2基因過度表達，且與患者預后情況較差具有密切關聯。當乳腺癌患者HER2過度表達時，可促進患者的病情發展，化療緩解期縮短且內分泌的治療效果較差，生存率較低〔16〕。Ki-67是預測乳腺癌預后的重要參考指標之一，可對腫瘤組織細胞增殖活性、組織細胞良惡性生長狀態進行反饋，有助于確定是否采用輔助性化學治療〔17〕。新輔助化療是臨床治療乳腺癌過程中較為重要的一個環節，是局部晚期乳腺癌的首選治療手段，現也常用于治療存在淋巴結轉移的乳腺癌患者及無法行保乳術但有保乳意愿的患者〔18〕。本研究結果表明老年乳腺癌患者新輔助化療后原發灶與轉移灶ER、PR、HER2及Ki-67腫瘤標志物表達水平存在差異，可實時對上述腫瘤標志物進行監測，以對患者進行最佳救治。